罗永能
- 作品数：32 被引量：67H指数：6
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- 非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸对人乳头瘤病毒治疗性蛋白疫苗的免疫佐剂作用被引量：2
- 2013年
- 目的研究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）联合宫颈癌治疗性融合蛋白疫苗HPV16L2ESET（以下简称蛋白疫苗）诱导小鼠产生的免疫应答及其在肿瘤免疫治疗中的免疫佐剂作用。方法免疫学试验：108只雌性C57BL／6小鼠随机分成CpG组、蛋白疫苗组、CpG＋蛋白疫苗组，每组36只，分别肌肉注射CpG-ODN（10μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg/只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0,3、7d；ELISPOT法检测IFN-T，间接ELISA法检测IgG抗体水平，分别评价小鼠产生的细胞及体液免疫效果。肿瘤抑制试验：将40只雌性C57BL／6小鼠皮下接种TC．1肿瘤细胞（1×104／只），24h后随机分成4组接种疫苗，每组10只，CpG组、蛋白疫苗组和CpG＋蛋白疫苗组分别肌肉注射CpG-ODN（10μg/只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0、3、7d；对照组不给药。通过成瘤率分析抗肿瘤效果。结果免疫学试验表明，免疫后14、21和28d,CpG＋蛋白疫苗组小鼠分泌IFN-y的T细胞高于蛋白疫苗组（Z=-2．36、-3．58、-3．58，P均〈0．05），在21d达到最高水平；免疫后5周，CpG＋蛋白疫苗组IgG抗体滴度维持在1：1×105左右，其中在10、14、21、42d与蛋白疫苗组比较差异显著（t=6．15、5．84、4．57、7．91，P均〈0．01）；抑瘤试验表明，蛋白疫苗组能延缓肿瘤生长，成瘤率为40％，添加CpG-ODN后，成瘤率降为0（x^2=5．00，P〈0．05）。结论将CpG-ODN与HPV16L2E6E7融合蛋白疫苗联合应用，可以诱导C57BL／6雌性小鼠产生更强的特异性体液和细胞免疫应答，对荷瘤鼠有更好的抗肿瘤效果，有望提高疫苗的免疫治疗效果。
- 吴小红吴洁陈刚金素凤高孟陈科达姜云水李剑波罗永能庄昉成
- 关键词：CPGODN肿瘤免疫治疗
- 肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证被引量：2
- 2013年
- 目的 探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性.方法 将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,并用IPTG诱导VP1的表达.然后将表达的重组VP1 （rVP1）经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性.结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性.SDS-PAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符.纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体（单抗）和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答.rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729 000,高于本底效价,且差异有统计学意义（t=2.646,P＜0.01）.结论 EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性.
- 朱赟李剑波高孟唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒感染衣壳蛋白原核表达
- 人感染新型冠状病毒致中东呼吸综合征的全球流行特征被引量：1
- 2013年
- 目的 了解人感染中东呼吸综合征冠状病毒确诊病例的全球流行特征.方法 对截至2013年8月31日,全球108例感染中东呼吸综合征冠状病毒病例的相关数据进行统计,总结分析其发病地点、时间、患者年龄、性别分布和临床症状轻重等特征.结果 108例病例主要发生在中东地区,少数在欧洲及非洲地区,病例数在2013年4月开始呈上升趋势.患者主要为中老年人,占52.8％,并且男性占60.2％,明显高于女性的32.4％.死亡病例共50例,死亡率46.3％,远高于SARS的10.3％,其中60岁以上患者的死亡率为61.5％.大多数病例临床症状严重或死亡,少数病例症状轻微或无症状.结论 中东呼吸综合征冠状病毒感染患者以中老年人为主,男性多于女性,并且死亡率远高于SARS.
- 顾春燕陈卓罗永能
- 关键词：冠状病毒感染
- 肠道病毒71型灭活疫苗滴度的酶联免疫吸附检测方法被引量：5
- 2011年
- 目的 建立肠道病毒71型（EV71）灭活疫苗滴度的检测方法,用于疫苗研制及生产过程中抗原含量的测定.方法 以兔抗EV71多克隆抗体为包被抗体,小鼠抗EV71单克隆抗体为检测抗体,以夹心ELISA方法测量我们制备的EV71疫苗抗原参照品,建立抗原标准曲线,确定定量限度及最佳定量范围,同时验证该方法的特异性和可重复性.结果 建立了检测EV71抗原含量的夹心ELISA方法,定量限度为3.9352log10TCID50/mL,最佳定量范围为3.9352～5.9686 log10TCID50/mL,相关系数为R2=0.9956;特异性好,除与EV71疫苗样品有反应外,与其他样品无交叉反应;稳定性和重复性好,变异系数小于7%.结论 本研究建立的检测EV71灭活疫苗滴度的夹心ELISA方法灵敏、特异,为疫苗研制过程中抗原含量测定提供了快捷有效的检测手段.
- 高孟周康凤罗永能姜云水唐彩华陈柯达高丽美朱莲毛子旭毛江森
- 关键词：酶联免疫吸附测定肠道病毒71型灭活疫苗
- 甲肝减毒活疫苗滴度的逆转录－聚合酶链反应检测法
- 本发明是一种检测甲肝减毒活疫苗滴度的逆转录—聚合酶链反应检测法。该法选用编码甲肝病毒结构蛋白3羧基端的基因区为目标区，设计合成引物，并严格的运用逆转录—聚合酶链反应技术对甲肝活疫苗的滴度进行检测。该技术的检测灵敏度与组织...
- 陈勇罗永能洪艳杨连华毛江森
- 文献传递
- 地高辛标记RT-PCR检测甲肝减毒活疫苗的研究
- 1999年
- 以编码甲肝病毒ＶＰ３ 羧基端的基因区为目标区，运用地高辛标记ＲＴＰＣＲ 法对甲肝疫苗进行检测，并与ＴＣＩＤ５０ 检测法进行比较。建立甲肝减毒活疫苗滴度的地高辛标记ＲＴＰＣＲ 检测法。结果显示：地高辛ＲＴＰＣＲ 法灵敏度略高于ＴＣＩＤ５０ 法，特异性与ＴＣＩＤ５０ 相似，且快速简便，易于推广应用。结果表明：地高辛标记ＲＴＰＣＲ 法是一种简便、快速、灵敏的甲肝病毒检测方法，可用作疫苗的常规检测。
- 洪艳陈勇罗永能杨连华
- 关键词：地高辛RTPCR甲肝疫苗滴度
- 一种抗原多肽及其应用
- 本发明公开了一种抗原多肽，氨基酸序列为QMTKSYKNTRKS或在此基础上经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸能够与人抗H7亚型禽流感病毒血凝素抗体特异性结合的多肽；本发明还公开了所述抗原多肽在制备诊断人感染H7亚型禽流...
- 陶薇洪艳罗永能高孟姜立民谢珲倪红霞高丽美傅婷何卓晶
- 大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用被引量：6
- 2013年
- 目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗），并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH，腹腔内注射免疫大鼠数次后，取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6，体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体，用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度，并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系，分别有6株属于IgGl亚型，2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化，其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl，用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量，用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒，而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗，可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法，成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。
- 张锋高丽美朱赟高孟潘海桦陈卓吴海光罗永能
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体ELISA免疫荧光检测
- 柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1～VP3的B淋巴细胞线性抗原表位预测与确定被引量：7
- 2015年
- 目的 确定柯萨奇病毒A16型（CVA16）YY157株衣壳蛋白VP1～VP3的优势B淋巴细胞线性抗原表位。方法用生物信息学软件Lasergene分析CVA16YY157株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性，预测出包含潜在B淋巴细胞线性抗原表位的区段，并用BepiPred1．0Server进行评估。人工合成相应的多肽片段，用多肽-酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其与明确感染CVA16的患儿血清的阳性反应与否和程度，并以健康人血清作比较。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求，共预测出21个可能的B淋巴细胞线性抗原表位。相应的人工合成多肽与感染CVA16的患儿血清均呈现阳性反应，但程度不同。结论成功预测并用实验证实了CVA16YY157株衣壳蛋白VP1～VP3的优势线性B淋巴细胞线性抗原表位。
- 高孟倪红霞朱莲李剑波高丽美罗永能
- 关键词：柯萨奇病毒感染酶联免疫吸附测定
- 肠道病毒71型H3-TY株衣壳蛋白VP1~VP3的优势线性B细胞抗原决定簇预测与确定被引量：6
- 2014年
- 目的确定肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点。方法用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可能性,预测出包含潜在线性B细胞抗原决定簇位点的区段,并计算各区段上述指数的加权平均值。人工合成相应的多肽片段,用多肽-酶联免疫吸附检测（多肽-ELISA）检测其与明确感染EV71的临床病患儿童血清的阳性反应与否和程度。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求,共预测出15个可能的线性B细胞抗原决定簇位点。相应的人工合成多肽与感染EV71的临床病患儿童血清均呈现为阳性反应但程度不同,其中免疫显性最高的肽段为包含VP1氨基酸残基208-222位的VP1D。结论成功预测并用实验证实了EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点,有助于揭示EV71衣壳蛋白抗原特异性的分子基础。
- 高丽美高孟王静华唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒71型
