肖艳
- 作品数：8 被引量：17H指数：2
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅科研基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律更多>>
- 鼻咽癌人源抗独特型单链抗体诱导的免疫应答被引量：1
- 2010年
- 目的观察鼻咽癌人源抗独特型单链抗体G22ScFv在小鼠体内诱导的免疫应答,探讨其作为鼻咽癌疫苗的可能性。方法在大肠杆菌中诱导表达G22ScFv并进行纯化,以纯化的G22ScFv免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA及竞争抑制ELISA检测免疫小鼠特异性体液免疫应答水平;流式细胞术检测免疫小鼠脾T淋巴细胞表型的变化。结果纯化的融合蛋白纯度达95%以上,且具有良好的反应原性。经ELISA检测,G22ScFv免疫后,小鼠产生了Ab3,且小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞数量升高。结论G22ScFv可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答,为鼻咽癌人源抗独特型抗体疫苗的临床应用奠定了基础。
- 汪静李官成童永清张志杰杨丞肖艳孙硕水漩
- 关键词：鼻咽癌免疫应答
- 论中国知识产权法院的构建
- 随着经济科技的快速发展，人们迫切需要加强对知识产权的司法保护。目前，我国知识产权民事案件、刑事案件、行政案件主要由在众多不同级别、不同领域的普通法院分散审判。这种分散审理的模式在司法实践中容易导致民、行、刑管辖冲突、审判...
- 肖艳
- 关键词：知识产权法院司法保护
- 文献传递
- 噬菌体抗体库的筛选策略及其进展
- 2005年
- 噬菌体抗体库技术的出现开创了一条简便快捷的基因工程抗体生产路线,为人源抗体的制备提供了新途径随着现代分子生物技术的迅速发展,抗体库的筛选工作也在传统的亲和淘选的基础上不断改进,涌现出越来越多新的有效筛选方法,显示出噬菌体抗体库技术在抗体开发应用中极为广阔的前景。
- 肖艳李官成
- 关键词：细菌噬菌体抗体亲和力抗体筛选
- 用EBV转化的肝癌患者B细胞构建噬菌体单链抗体库被引量：1
- 2008年
- 目的构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库。方法体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061。经四环素抗性筛选,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗独特型抗体库,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,制备全人源抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的。
- 肖艳李官成李跃辉童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建与筛选
- 目的：构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库，从抗体库中筛选抗肝癌的噬菌体单链抗体(ScFv)，并对其进行鉴定和测序分析。
方法：体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基...
- 肖艳
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌单链抗体
- 文献传递
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果:scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后,随机挑取2798个克隆进行ELISA,发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应,而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应。对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定,结果与ELISA一致。免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义。结论:构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库。通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。
- 黄建肖艳童永清郭锋杰周国华李跃辉胡锦跃李官成
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建与筛选鉴定被引量：2
- 2008年
- 体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC.用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因.将ScFv基因与载体fuse5连接后,电击转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库.用人肝癌细胞及人肝细胞对初级噬菌体抗体库进行亲和富集及phage-ELISA筛选.筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序.结果表明,经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因.将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗体库,全长ScFv基因的插入率为80%.用人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系QSG-7701对抗体库进行三轮正负淘选和富集后,从中随机挑取533个克隆进行ELISA筛选,得到179个阳性克隆,阳性率为33.6%.将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的鉴定,发现克隆A82对肝癌细胞系HepG2、人胚肾上皮细胞系HEK293呈强阳性反应,免疫组织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应,而不与正常肝组织反应.且A82的相对亲和力为2.4mol/L,解离常数Kd为5.32×10-9mol/L,显示其亲和力较高.对克隆A82进行测序分析,结果表明:A82全长742bp,含linkercDNA序列45bp,重链可变区基因与人胚系IgVH3-23有94.3%的同源性,轻链可变区基因与人胚系IgV4-2有94.9%的同源性,V-D-J分别属于VH3-23-D2-21-JH6-linker-V4-2-JL2.由上述结果可见,应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术,构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌单链抗体库,通过细胞ELISA和免疫细胞化学鉴定,获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异性,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.
- 肖艳李官成李跃辉黄建童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌单链抗体
- 太空诱变宫颈癌细胞的生物学研究被引量：7
- 2007年
- 目的:研究太空诱变宫颈癌细胞的生物学特性。方法:将搭载于“神舟四号”飞船飞行返地后的宫颈癌Caski细胞进行单克隆化,观察细胞形态、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线初步筛选出变异株并测定其倍增时间、流式细胞仪检测细胞周期、软琼脂细胞集落培养和裸鼠成瘤实验检测空间诱变细胞的恶性表型。结果:单克隆化后获得1440株细胞克隆,发现空间诱变株出现多种细胞形态;MTT法筛选出4株变异株,其中有两株编号为44F10和17E3的细胞克隆生长速度快于对照组,其细胞周期分布改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;而另两株编号为48A9和31F2的细胞克隆生长速度慢于对照组,其细胞周期分布规律与以上两株相反;地面正常对照细胞,地面模拟对照细胞,44F10,17E3,48A9和31F2细胞的平均倍增时间依次为56.54,58.44,52.96,51.46,101.76和88.47h,其中44F10和17E3与对照细胞组比较平均倍增时间降低但无统计学意义,而48A9和31F2与对照细胞之间的差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂细胞集落形成率依次为9.7%,9.3%,14.7%,12.1%,0和0.1%,诱变细胞与对照细胞之间的差异有统计学意义(P<0.01);将6组细胞分别注射入裸鼠体内,47d后处死动物,各组裸鼠成瘤率为100%;剥离出肿瘤组织并称重,各组瘤块平均重量依次为0.066,0.066,0.175,0.249,0.011和0.018g,变异组与两对照组的细胞成瘤能力比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验证明空间环境可影响肿瘤细胞的生理特性,并且诱导细胞的变异是多向性的。
- 杨丞李官成李跃辉胡锦跃肖艳张志杰
- 关键词：空间环境肿瘤细胞宫颈癌生物学特性
