- 碱性成纤维细胞生长因子对胰腺星状细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对胰腺星状细胞(PSCs)增殖作用的影响。方法采用组织块分离法培养PSCs,通过免疫荧光检测结蛋白、神经胶质原纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴别。取培养的第2-3代PSCs,用不同浓度bFGF(5、10、20、25ng/ml)处理72h,CCK8法检测PSCs增殖情况,荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白基因mRNA表达,Western blot方法检测α-SMA表达;其结果与对照组比较。结果 (1)不同浓度bFGF组的细胞增殖率明显高于对照组[(145.17±6.67)%、(152.96±7.50)%、(148.64±8.74)%和(144.83±10.06)%vs.100%](P<0.05)。(2)与对照组比较,bFGF促进Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达显著增加(P<0.05)。(3)与对照组比较,bFGF刺激PSCs后引起α-SMA表达显著增加(P<0.05)。结论 bFGF可促进PSCs增殖活化,在一定程度上可促进胰腺纤维化。
- 徐岷王国乙李萍王国英蔡菁周冰洁赵义蒋小猛顾威张尤历
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子胰腺星状细胞纤维化
- 靶向Lin28B基因沉默对胰腺癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨靶向Lin28B基因沉默对细胞增殖的影响。方法设计Lin28B及GFP短发夹核糖核酸(shRNA)序列,装入Tet-on-pLKO-puro质粒,进行慢病毒包装,感染胰腺癌细胞Panc1,嘌呤霉素筛选并培养稳定干扰细胞株。实验组为Panc1-Tet-on-pLKO-sh-Lin28B;对照组为Panc1-Tet-on-pLKO-sh-GFP。筛选强力霉素最佳诱导浓度并诱导干扰序列表达,Western blot检测干扰效率,细胞增殖与活性实验CCK8检测沉默Lin28B对Panc1细胞增殖的影响。结果构建的Tet-on-pLKO-sh-Lin28B慢病毒可显著抑制Panc1细胞内Lin28B的表达。与对照组Panc1-Tet-onpLKO-sh-GFP相比,实验组Panc1-Tet-on-pLKO-sh-Lin28B的增殖速度减缓(P<0.05)。结论成功筛选出沉默Lin28B的稳定干扰细胞株,沉默Lin28B对胰腺癌细胞的增殖有抑制作用,为进一步研究Lin28B基因的功能或基因治疗提供有用技术。
- 张尤历陈晖翁星月蔡菁殷文皓周冰洁卞石惠龚爱华徐岷
- 关键词：慢病毒胰腺癌
- MicroRNA-429对TGF-β1诱导的大鼠胰腺星状细胞活化和上皮-间质转化的调控作用
- 2015年
- 目的 探讨miR-429对大鼠胰腺星状细胞（PSCs）活化和上皮-间质转化（EMT）的调控作用.方法 用组织块法提取、培养和分离PSCs,通过免疫荧光染色法检测结蛋白（desmin）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达鉴定PSCs.取新鲜分离的第2代PSCs,采用脂质体法将miR-429的模拟物（miR-429 mimic）和无意义小分子阴性对照片段（miR-NC）分别转染大鼠PSCs,再用10 μg/L TGF-β1刺激PSCs.采用蛋白质印迹法检测细胞a-SMA、波形蛋白（vimemin）、E-钙黏蛋白（E-cad）及EMT相关蛋白TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3的表达量;实时荧光定量PCR法检测a-SMA、vimentin、E-cad mRNA和miR-429的表达量.结果 培养后PSCs细胞体积变大,伪足发达,细胞间连接减少,脂滴消失,GFAP、desmin表达阳性,α-SMA表达阴性,符合星状细胞的生物学特征.TGF-β1刺激后,大鼠PSCs α-SMA、vimentin、E-cad蛋白的表达量分别为对照组的（1.369 ±0.878）、（1.518±0.041）、（0.549±0.076）倍,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.转染miR-429 mimic且经TGF-β1刺激后,PSCs的α-SMA、vimentin、E-cad mRNA表达量是转染miR-NC组的（0.423±0.038）、（0.652±0.043）、（2.235±0.045）倍,蛋白表达量是（0.683±0.053）、（0.548±0.049）、（1.548±0.038）倍,差异均有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）;TGF-β/Smad通路的TGF-β1、p-Smad2/3的相对表达量是miR-NC组的（0.459±0.038）、（0.525±0.029）倍,差异均有统计学意义（P ＜0.05或＜0.01）.结论 上调miR-429的表达可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化的影响及逆转EMT,其可能的机制是抑制TGF-β1介导的TGF-β/Smad信号转导通路。
- 徐岷王国英赵义蔡菁倪鑫刘鑫张行行张尤历
- 关键词：微RNAS胰腺星形细胞上皮-间质转化
- 一种组装TALE/TALEN模块的方法
- 本发明涉及一种组装TALE/TALEN模块的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用一次PCR来获得组装TALE模块，具体技术方案包括：首先设计4 gBlock DNA寡核苷酸，在相邻2个寡核苷酸之间有30bp的重叠；然后...
- 徐岷龚爱华蔡菁张尤历莫寅元
- miR-15a和miR-16通过调控bcl-2蛋白的表达逆转结肠癌细胞的耐药性被引量：8
- 2014年
- 目的研究miR-15a和miR-16靶向调控bcl-2的表达对结肠癌细胞耐药性的逆转作用。方法将miR-15a和miR-16模拟物或抑制物转染结肠癌长春新碱（VCR）敏感细胞株HCT8或耐药细胞株HCT8／VCR，采用实时荧光定量PCR法检测miR-15a和miR-16的表达，Westernblot法检测bcl-2和P糖蛋白（P—gP）蛋白的表达，细胞计数盒8（CCK8）法检测不同浓度VCR对HCT8和HCTS／VCR细胞生长的抑制作用。结果实时荧光定量PCR法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组和转染miR-15a模拟物组HCT8／VCR细胞中miR-15a的相对表达量分别为1．00、0．87±0．24和223．44±59．07，转染模拟物后，miR-15a的相对表达量明显升高（P〈0．001）；空白对照组、阴性对照组和转染miR-16模拟物组HCT8／VCR细胞中miR-16的相对表达量分别为1．00、0．66±0．19和107．32±22．58，转染模拟物后，miR-16的相对表达量明显升高（P〈0．001）。Western blot法检测结果显示，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCT8／VCR细胞中bcl-2蛋白的相对表达量分别为1．00、0．97±0．02、0．51±0．06和0．65±0．03，转染模拟物后，bcl-2蛋白的表达下调（P〈0．05）。而P-gp蛋白的表达在转染模拟物后没有明显变化。CCK8法检测结果显示，经1、5、25和125斗g／mlVCR处理后，空白对照组、阴性对照组、转染miR-15a模拟物组和转染miR-16模拟物组HCTS／VCR细胞存活率的变化趋势基本-致，转染模拟物后，HCTS／VCR细胞的存活率明显降低（P〈0．05）。实时荧光定量PCR法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞中miR．15a和miR．16的表达明显降低（P〈0．001）。Western blot法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞bcl-2蛋白的表达明显上调（P〈0．05），而P-gP蛋白的表达没有明显变化。CCK8法检测结果显示，转染抑制物后，HCT8细胞的存活率明显高于空白对照�
- 徐岷周冰洁王国英王国乙翁星月蔡菁李萍陈晖蒋小猛张尤历
- 关键词：结肠肿瘤肿瘤耐药性BCL-2
- 阿司匹林对胰腺癌细胞上皮间质转化和吉西他滨耐药性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨阿司匹林对人胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)和吉西他滨耐药性的影响。方法应用MTT法检测阿司匹林(0、1、2、5、10mmol/L)对三种胰腺癌细胞(SW1990、PATU-8988、PANC-1)生存率的影响以及阿司匹林(2mmol/L)与吉西他滨(0.05mg/L)联合用药对SW1990细胞增殖的影响。平板克隆实验检测药物对克隆形成能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞划痕实验观察细胞的迁移能力;Western blot检测凋亡相关蛋白及EMT相关蛋白表达水平。结果(1)与对照组相比,低浓度阿司匹林(1、2mmol/L)对PATU-8988、PANC-1有生长抑制作用(P<0.05、P<0.01);高浓度阿司匹林(5、10mmol/L)对SW1990、PATU-8988、PANC-1均有较明显的生长抑制作用(P<0.05、P<0.01)。(2)与单药组相比,联合用药组中SW1990细胞增殖率显著降低,克隆形成率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05),细胞中的Bcl-2蛋白表达水平显著降低。(3)与单药组相比,联合用药组细胞迁移率显著降低,细胞中的EMT相关蛋白E-钙黏蛋白表达显著升高,波形蛋白表达显著降低。结论阿司匹林有抑制胰腺癌细胞增殖的作用,并且能增强细胞对吉西他滨的敏感性,同时逆转胰腺癌细胞EMT。
- 张尤历翁星月卞石惠周冰洁陈晖李萍蔡菁蒋小猛黄红梅徐岷
- 关键词：胰腺癌阿司匹林上皮间质转化吉西他滨
- 蒿属香豆素对胰腺星状细胞的氧化、活化及纤维化的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨中药茵陈蒿的主要成分蒿属香豆素对大鼠胰腺星状细胞(PSCs)氧化、活化及细胞外基质沉积的影响。方法:分离PSCs并培养,免疫荧光法鉴定细胞,培养并传代至第3-5代后进行实验,分成空白组、丹酚酸B组、不同浓度香豆素组。分别培养24、48h后MTT法检测PSCs增殖情况。48h后通过比色法检测各组细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的变化。免疫荧光、Western blot法检测各组平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原表达的情况。结果:与空白组相比,蒿属香豆素组的细胞增殖水平、MDA水平、α-SMA、Ⅰ型胶原的表达明显降低,SOD水平显著增高(P<0.05)。结论:蒿属香豆素能有效降低PSCs的氧化应激水平,抑制其活化进而减轻纤维化。
- 张尤历蔡菁赵义陈晖王国英王国乙李萍周冰洁翁星月徐岷
- 关键词：氧化应激胰腺星状细胞纤维化
- 一种组装TALE/TALEN模块的方法
- 本发明涉及一种组装TALE/TALEN模块的方法，属于基因工程技术领域。本发明采用一次PCR来获得组装TALE模块，具体技术方案包括：首先设计4 gBlock DNA寡核苷酸，在相邻2个寡核苷酸之间有30bp的重叠；然后...
- 徐岷龚爱华蔡菁张尤历莫寅元
- 文献传递
- 转化生长因子-β_2诱导大鼠胰腺星形细胞活化及上皮间质转化的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导大鼠胰腺星形细胞(PSCs)活化及上皮间质转化(EMT)的作用。方法组织块法分离、培养及鉴定大鼠PSCs后,10 ng/ml TGF-β2刺激PSCs 72 h,光镜下观察细胞形态学改变;免疫荧光染色及Western blot法检测α-SMA、Col-Ⅰ的蛋白表达;q RT-PCR及Western blot法分别检测E-caderin、Vimentin基因及蛋白的表达;荧光显微镜观察E-caderin和Vimentin在细胞内的表达情况。结果免疫荧光染色显示新分离PSCs神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、结蛋白(desmin)表达阳性,α-SMA表达阴性,符合其生物学特性。TGF-β2处理PSCs后,光镜下观察细胞体积及胞核变大,伪足发达,脂滴消失;免疫荧光染色及Western blot结果显示α-SMA和Col-Ⅰ表达量显著增加,呈典型活化状态;q RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色结果显示Vimentin的表达明显高于空白对照组,而E-caderin的表达明显降低(P<0.05)。结论 TGF-β2可诱导PSCs活化及上皮间质转化。
- 张尤历李萍王国英赵义王国乙蔡菁郭柔玉刘鑫徐岷
- 关键词：转化生长因子-Β2胰腺星形细胞活化上皮间质转化
- 胰腺纤维化相关转录因子及信号通路的研究进展被引量：4
- 2014年
- 胰腺纤维化是慢性胰腺炎的重要特征,活化的胰腺星状细胞在胰腺纤维化的发生、发展过程中起着关键作用。核因子-κB、Smad、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、活化蛋白-1(AP-1)、信号转导及转录激活因子(STAT)等转录因子在胰腺纤维化过程中发挥重要作用,涉及多个重要的信号通路,包括转化生长因子-β(TGF-β)/Smad、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、PI3激酶(PI3K)/Akt通路、Wnt/β-catenin、酪氨酸激酶-信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)、活性氧(ROS)等。现就胰腺纤维化相关转录因子及信号通路的研究进展作一综述。
- 蔡菁张尤历徐岷
- 关键词：胰腺纤维化胰腺星状细胞转录因子信号转导
