邓健蓓
- 作品数：24 被引量：35H指数：3
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 三种抗人TNF-α重组抗体的重折叠
- 2002年
- 目的 探讨重组抗体蛋白的复性规律 .方法 用共溶剂氧化还原、表面活性剂介导、变性剂介导及抗原介导复性四种条件对抗人 TNF- α单域抗体、单链抗体 GST融合蛋白进行了分离纯化 .结果 复性产物的可溶率为 1 0 %左右 .结论 几种复性方法均可使目的蛋白复性 。
- 陈萍徐鹏蒲勤邓健蓓药立波
- 关键词：复性抗体肿瘤坏死因子重折叠
- 抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体基因的构建及序列测定被引量：1
- 1998年
- 构建鼠抗人肿瘤坏死因子-α（hTNF-α）单链抗体基因．方法：从分泌hTNF-α单抗的小鼠杂交瘤细胞株E6中获得抗体可变区基因的基础上，采用限制性内切酶酶切拼接法，并按VH-Linker-VL的结构将轻、重链可变区基因拼接单链抗体（ScFv）基因，荧光标记测序引物分析其核苷酸序列．结果：构建成长747bp的单链抗体基因，其中连接肽基因长45bP，经序列测定和分析表明为拼接正确、完整的抗hTNF-α单链抗体基因．结论：所构建ScFv为功能性的抗hTNF-α单链抗体基因．
- 陈萍邓健蓓王字玲韩骅药立波苏成芝
- 关键词：单链抗体基因核苷酸序列肿瘤坏死因子
- 人黑色素瘤单抗VH-TNF融合蛋白基因的构建和表达被引量：2
- 1998年
- 目的：在大肠杆菌中表达人黑色素瘤单抗ＶＨＴＮＦ融合蛋白基因．方法：在人肿瘤坏死因子基因上游插入了抗黑色素瘤单抗Ｍｅｌ３的重链可变区基因，将此融合基因插入大肠杆菌表达系统ｐＧＥＸ２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，ＩＰＴＧ诱导表达，表达产物经凝血酶消化后，测定其对Ｌ９２９细胞的杀伤活性，并进行ＳＤＳＰＡＧＥ，用抗ＴＮＦ抗体进行蛋白印迹分析．结果：序列分析表明融合基因拼接点有正确读框，可表达ＶＨＴＮＦ融合蛋白．将融合的基因插入融合性表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ的ＧＳＴ基因下游，表达出预期的５５ｋｕＧＳＴＶＨＴＮＦ融合蛋白．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ证明可用凝血酶从该蛋白切下２９ｋｕ的ＶＨＴＮＦ蛋白．活性分析表明这一融合蛋白仍具有对Ｌ９２９细胞的杀伤活性．结论：构建并在大肠杆菌中表达了人黑色素瘤单抗ＶＨＴＮＦ融合蛋白基因，表达产物具有对Ｌ９２９细胞的杀伤活性．
- 韩骅王字玲邓健蓓陈常庆苏成芝
- 关键词：黑色素瘤单克隆抗体融合蛋白
- 鼠抗hTNF-α单克隆抗体重链基因片段的克隆和cDNA序列测定被引量：1
- 1997年
- 采用反转录ＰＣＲ方法，以一对锚ＰＣＲ引物和一对针对鼠ＩｇＶＨ区基因的引物，从分泌鼠抗ｈＴＮＦ－α单克隆抗体的Ｅ６杂交瘤细胞株中，分别扩增和克隆了自５′非翻译区至Ｃγ１近３′端的重链基因片段和重链可变区基因片段，并测定了其核苷酸序列。计算机分析表明，系重排的鼠Ｉｇ重链基因。
- 邓健蓓韩骅苏成芝
- 关键词：HTNF-Α单克隆抗体核苷酸序列
- 抗黑色素瘤单链抗体在大肠杆菌中的表达
- 1997年
- 单链抗体是用一段连接肽将抗体重、轻链可变区连接而成的抗体片段,大小为完整抗体的六分之一。具有分子小,免疫原性低,容易进入实体瘤周围微循环,有很强的肿瘤组织穿透力,血循环和全血廓清快,半衰期短,肾脏蓄积少,无Fc段不易与非靶细胞结合,肿瘤/正常组织分布率高,定位成像时本底低,易于基因操作和大量生产等诸多优点。
- 王字玲韩骅邓健蓓陈萍苏成芝
- 关键词：单链抗体抗黑色素瘤肠杆菌外壳蛋白基因抗体基因抗体片段
- 诱导条件对TNF-αScFv在原核系统中表达量的影响
- 1999年
- 目的： 探讨诱导时间对目的蛋白表达量的影响， 为大量获得抗ＴＮＦα单链抗体提供实验依据。方法：将Ｅ６ＳｃＦｖ 基因分别克隆入表达载体ｐＥＴ１５ｂＥｔａｇ 和ｐＢＶ２２０ 中， 构建重组表达质粒ｐＥＴＥ６ＳｃＦｖ 和ｐＢＶＥ６ＳｃＦｖ。在化学诱导和温度诱导两种条件下， 于诱导后相同时间点等量取菌体， 用ＳＤＳＰＡＧＥ 对各时间点表达产物扫描定量。结果： ｐＥＴＥ６ＳｃＦｖ （ＢＬ２１） 的阳性克隆过夜菌经ＩＰＴＧ 化学诱导２ ｈ， 就有新生蛋白条带出现； 而ｐＢＶＥ６ＳｃＦｖ （ＤＨ５α） 诱导４ ｈ 后才有新生蛋白条带出现。两者均随诱导时间的延长而加深， 但将诱导时间延长至２０ ｈ 表达量并无明显变化， 表达水平反而下降。结论： ｐＥＴＥ６ＳｃＦｖ （ＢＬ２１） 的最佳诱导时间为４ ｈ ～６ ｈ，ｐＢＶＥ６ＳｃＦｖ （ＤＨ５α） 的最佳诱导时间为８ ｈ 。
- 陈萍邓健蓓韩骅药立波苏成芝
- 关键词：TNF-Α单链抗体原核细胞
- 抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用被引量：1
- 2000年
- 为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检测 E6Sc Fv与配体的结合 ;用 L92 9细胞检测 E6Sc Fv对人 TNF- α细胞毒作用的中和活性 .经变性 ,复性与亲和层析 ,E6Sc Fv被纯化 ,在 SDS- PAGE上为单一蛋白带 ;体外结合与中和实验表明 ,表达纯化的 E6Sc Fv可与人 TNF-α结合并中和其细胞毒活性 ;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时 ,E6Sc Fv仍保持了与TNF-α相结合的能力 .
- 陈萍邓健蓓韩骅药立波苏成芝
- 关键词：人TNF-Α单链抗体酵母双杂交胞内抗体
- 特异性转移因子对人胃癌细胞RNA合成及H—ras癌基因表达的影响被引量：7
- 1990年
- 七十年代以来,转移因子(Transfer factor,简称TF)作为一种细胞免疫调节剂应用于多种恶性肿瘤的临床辅助治疗,取得了一定的疗效。有文献报道,TF对小鼠H_(22)腹水癌细胞具有一定抑制作用,提示TF对肿瘤细胞很可能还具有直接效应。但由于腹水中细胞成分复杂,这种抑制作用尚不能完全确认为对肿瘤的直接效应.因此进一步观察TF对肿瘤细胞的直接效应并探讨其机制。
- 邓健蓓钱微苏成芝
- 关键词：胃癌癌基因表达TF
- 抗TNF-α重组抗体复性条件的研究
- 重组抗体分子在大肠杆菌中进行高效表达时,目的蛋白常以不溶性形式产生,而聚集形成蛋白质的聚合物—包涵体.包涵体本身没有生物学活性,欲获得具有一定纯度和活性的蛋白质,需要用一定的变性剂溶解包涵体,并选用复性剂对变性蛋白质进行...
- 陈萍蒲勤邓健蓓陈南春药立波
- 文献传递
- 黑色素瘤特异性单克隆抗体HB8760可变区基因的克隆和序列测定被引量：1
- 1997年
- 目的：克隆黑色素瘤特异性单克隆抗体ＨＢ８７６０可变区基因．方法：从培养的可分泌人黑色素瘤特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＢ８７６０提取总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ，用合成的一对寡核苷酸引物从中扩增了抗体可变区基因，并克隆入ｐＵＣ１９，挑选出阳性克隆后进行了核苷酸序列分析．结果：所克隆基因分别长３６０ｂｐ和３３０ｂｐ，编码１２０个和１１０个氨基酸，含三个ＣＤＲ区和四个ＦＲ区，并含有维持抗体结构所必需的两个半胱氨酸．计算机分析与已发表的小鼠抗体可变区基因有较高同源性．结论：所克隆基因可编码小鼠抗体可变区．
- 王字玲邓健蓓韩骅陈梅红苏成芝
- 关键词：黑色素瘤单克隆抗体克隆核苷酸序列
