陈文吟
- 作品数：22 被引量：62H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科委科技攻关项目广州市科技局重点攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 重组毕赤酵母菌高密度表达人源抗-HBs Fab抗体的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨抗 HBsFab抗体发酵工程菌GS1 1 5 /Fab的高密度发酵及对发酵产物的纯化与活性鉴定方法。方法 采用补料分批培养方法 ,在 5L发酵罐中对发酵工程菌GS1 1 5 /Fab进行高密度发酵 ,发酵温度 2 8～ 30℃ ,pH值范围为 5 0～ 5 5 ,溶氧范围 2 0 %以上 ;3次发酵分别于OD60 0 值达到 4 0 0～4 5 0、2 0 0～ 2 5 0、30 0～35 0时开始诱导 ,甲醇诱导浓度为 0 5 %～1 % ,经 96h左右的诱导后终止发酵 ,对发酵上清进行亲和纯化 ,并通过ELISA法对纯化产物进行活性鉴定。结果 在OD60 0 为 30 0～ 35 0时开始诱导有利于发酵过程条件的控制和目的蛋白的表达 ,目的蛋白表达量为 2 4 5mg/L。发酵上清通过亲和层析纯化 ,获得纯度为 98%的重组Fab抗体 ,该抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力及特异性。结论 Fab酵母菌工程菌在 5L发酵罐高密度发酵成功 ,为抗
- 陈文吟饶桂荣粟宽源邓宁余宙耀
- 关键词：抗-HBSFAB抗体高密度发酵毕赤酵母菌
- 国产胸腺肽对人T淋巴细胞E受体和CD_2抗原表达的影响被引量：9
- 1997年
- 张宜俊陈阳述尤玉琴陈文吟李灼亮
- 关键词：胸腺肽CD2抗原
- 人源性抗HBsAg噬菌体抗体的筛选及纯化
- 1998年
- 目的:获得人源性抗HBsAg抗体Fab片段。方法:用预包被HBsAg的ELISA板,从构建的人全套抗体库中筛选出针对HBsAg的噬菌体抗体。并转入大肠杆菌中表达。破裂细胞后,获得可溶性Fab片段。以羊抗人Fab抗体偶联HiTrap柱。
- 余宙耀粟宽源任向荣高辉高磊张宜俊曾平鲁龙玉琴郑业华陈文吟陈南春陈苏民
- 关键词：HBSAG
- 胸腺肽对HBV转基因小鼠表达HBV DNA的影响被引量：3
- 1999年
- 应用胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠进行腹腔内注射（３ｍｇ／只），连续３个月，同时设促肝细胞生长素及生理盐水对照组，定期取血检测ＨＢＶＤＮＡ。结果，发现胸腺肽组ＨＢＶＤＮＡ阴转率为２２％～５５％，停药２２ｄ后阴转率为２２％，而对照组小鼠ＨＢＶＤＮＡ无阴转。结果提示胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠表达ＨＢＶＤＮＡ有抑制作用。
- 张宜俊李灼亮王宝奎陈文吟章谷生
- 关键词：胸腺肽乙型肝炎病毒DNA转基因
- 人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定被引量：5
- 2002年
- 目的 :制备有活性的人源性抗HBsAg单链抗体。方法 :应用噬菌体表面呈现技术获得人抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗体的Fab片段 ,并将VH 和VL 基因以 (Gly4Ser) 3linker连接成单链 ,插入表达载体pQE40 ,筛选大肠杆菌高表达菌株。结果 :工程菌表达优化试验表明 ,在OD6 0 0 为 0 6时开始诱导 ,持续 6h ,目的蛋白表达量最高可达菌体总蛋白的 31%。包涵体变性后上样镍离子螯合层析柱一步纯化 ,收集目的峰 ,透析复性 ,得纯度为 97%的重组单链抗体 ,其亲和常数为 0 2 3× 10 8mol L。结论 :抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌内获得高效表达 ,经变性和复性 ,得到有活性的单链抗体 ,氨基酸组成正确。为进行临床前研究打下基础。
- 任向荣熊盛唐永红粟宽源陈文吟郑业华余宙耀
- 关键词：大肠杆菌噬菌体表面呈现乙型肝炎表面抗原复性
- 抗乙型肝炎病毒药物转基因小鼠模型药效评价技术平台建设
- 孔祥平刘光泽易学瑞佟明华陈文吟李秀梅胡莲美吴庆洲罗显荣
- 经不同整合位点乙肝病毒转基因小鼠双杂交以增加转基因小鼠目的基因拷贝数和整合位点，进一步提高了转基因小鼠HBV的复制表达水平和阳性率，已稳定传至23代。建立了先进、全面、系统抗乙型肝炎病毒药物评价体系，并应用于多种抗乙肝病...
- 关键词：
- 关键词：抗乙型肝炎病毒药物药效评价实验动物模型
- 重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化方法的比较研究被引量：3
- 2004年
- 抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析等 3套纯化工艺在酵母发酵生产的重组人源性抗HBsAgFab抗体纯化中的效率。结果显示 ,抗Fab抗体亲和层析柱纯化酵母表达的重组Fab ,纯度为 96 8% ,但回收率偏低 ,只有30 %～ 4 0 %。ScFv单克隆抗体亲和层析纯化的重组Fab ,纯度为 97 5 % ,回收率达 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较小规模的生产应用。离子交换层析纯化的重组Fab ,纯度为 97% ,回收率为 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较大规模的生产应用。以上结果表明 ,应用ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析纯化技术均能很好的纯化出重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,这两种纯化工艺不仅大大节约纯化成本 ,且纯化效率和回收率有很大提高。
- 邓宁向军俭饶桂荣陈文吟
- 关键词：HBSAG纯化方法毕赤酵母
- 重组人心肌营养素对体外培养受损心肌细胞的保护作用被引量：4
- 2007年
- 心肌营养素是一种具有心肌保护功能的细胞因子.为鉴定人心肌营养素在体外具有促进受损大鼠心肌细胞存活的生物学活性,构建pQE-huCT-1表达载体,在大肠杆菌中表达重组人心肌营养素(rhCT-1);利用含有还原型及氧化型谷胱甘肽的复性体系,恢复变性蛋白的天然构象;通过MTT法鉴定rhCT-1的促进受损大鼠心肌细胞存活的生物学活性.pQE-huCT-1在M15菌中得到高效表达,但95%的目的蛋白以包涵体形式存在;通过变性、复性及Ni-NTA纯化,得到纯度为90%的可溶性重组蛋白.利用无血清培养基培养新生大鼠心肌细胞,造成缺血损伤;利用低浓度阿霉素损伤大鼠心肌细胞,构建阿霉素损伤模型;通过加入rhCT-1治疗,发现rhCT-1具有明显的促进受损心肌细胞存活的作用;心肌细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性随rhCT-1浓度的升高而增强,且呈显著的剂量依赖性关系;通过测定预防组和治疗组心肌细胞SDH和乳酸脱氢酶(LDH)活性,发现预防组较治疗组在促进细胞线粒体产生SDH和降低培养液上清LDH活性方面效果更加显著,说明rhCT-1可能是在心肌细胞损伤早期通过抑制细胞凋亡而达到心肌保护作用的.本研究通过复性获得了可溶性rhCT-1,它在体外具有显著的促进受损心肌细胞存活的生物学活性.
- 刘冠群孔祥平佟明华李茹冰陈文吟游松
- 关键词：心肌营养素-1心肌保护琥珀酸脱氢酶阿霉素
- 重组人抗HBs-Fab抗体的纯化及结构分析被引量：4
- 2006年
- 目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱。结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上。Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7·6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50494,比其理论值约多2579·35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上。胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确。结论已建立了重组人抗HBs-Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确。
- 饶桂荣陈文吟粟宽源任向荣郑业华余宙耀
- 关键词：FAB片段纯化
- 人源性抗HBsAg Fab抗体的发酵生产研究被引量：4
- 2004年
- 为了适应工业生产的需要 ,利用fed batch方法 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体酵母工程菌在 30L发酵罐中进行了高密度发酵 ,发酵最适温度 30℃ ,pH值范围 5 0～ 5 3,溶氧范围 2 0 %～ 30 %。发酵液OD6 0 0 值达到 30 0时开始诱导 ,甲醇最佳诱导浓度为 1 0mL L。重组人源性抗HBsAgFab抗体经离子交换层析纯化 ,纯化产品经SDS PAGE、Westernblot进行分析和ELISA方法进行活性测定。结果显示 ,重组Fab抗体在Fed batch发酵系统中可高效表达 ,经过 1 92h的发酵生产 ,重组人源性抗HBsAgFab抗体的表达量可达 4 1 2mg L。发酵上清经过离子交换层析纯化 ,获得纯度为 95 %的重组Fab抗体 ,该Fab抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力和特异性。结果证实可以通过高密度发酵毕赤酵母工程菌来高效生产重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,为后续的工业化生产应用奠定了基础。
- 邓宁向军俭陈文吟熊盛王珣章粟宽源
- 关键词：抗体发酵生物制品表面抗原
