粟宽源
- 作品数：20 被引量：73H指数：5
- 供职机构：解放军第458医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科委科技攻关项目广州市科技局重点攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 人源性抗HBsAg噬菌体抗体的筛选及纯化
- 1998年
- 目的:获得人源性抗HBsAg抗体Fab片段。方法:用预包被HBsAg的ELISA板,从构建的人全套抗体库中筛选出针对HBsAg的噬菌体抗体。并转入大肠杆菌中表达。破裂细胞后,获得可溶性Fab片段。以羊抗人Fab抗体偶联HiTrap柱。
- 余宙耀粟宽源任向荣高辉高磊张宜俊曾平鲁龙玉琴郑业华陈文吟陈南春陈苏民
- 关键词：HBSAG
- 重组毕赤酵母菌高密度表达人源抗-HBs Fab抗体的研究被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨抗 HBsFab抗体发酵工程菌GS1 1 5 /Fab的高密度发酵及对发酵产物的纯化与活性鉴定方法。方法 采用补料分批培养方法 ,在 5L发酵罐中对发酵工程菌GS1 1 5 /Fab进行高密度发酵 ,发酵温度 2 8～ 30℃ ,pH值范围为 5 0～ 5 5 ,溶氧范围 2 0 %以上 ;3次发酵分别于OD60 0 值达到 4 0 0～4 5 0、2 0 0～ 2 5 0、30 0～35 0时开始诱导 ,甲醇诱导浓度为 0 5 %～1 % ,经 96h左右的诱导后终止发酵 ,对发酵上清进行亲和纯化 ,并通过ELISA法对纯化产物进行活性鉴定。结果 在OD60 0 为 30 0～ 35 0时开始诱导有利于发酵过程条件的控制和目的蛋白的表达 ,目的蛋白表达量为 2 4 5mg/L。发酵上清通过亲和层析纯化 ,获得纯度为 98%的重组Fab抗体 ,该抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力及特异性。结论 Fab酵母菌工程菌在 5L发酵罐高密度发酵成功 ,为抗
- 陈文吟饶桂荣粟宽源邓宁余宙耀
- 关键词：抗-HBSFAB抗体高密度发酵毕赤酵母菌
- 人源性抗HBsAg抗体Fab段在酵母中的表达被引量：12
- 2002年
- 通过分步整合的方式 ,将人源性抗乙肝表面抗原 (HBsAg)抗体Fab的轻、重链基因分步整合到巴斯德毕赤(Pichiapastoris)酵母GS115菌株的染色体上 ,经甲醇诱导 ,成功地分泌表达出抗HBsAg抗体的Fab片段 ,表达量达5 0～ 80mg L。ELISA结果显示重组酵母分泌表达出的Fab具有较强的结合HBsAg的能力。通过抗Fab的抗体柱亲和层析 。
- 邓宁粟宽源王珣章龙綮新杨林余宙耀
- 关键词：FAB段酵母
- 人源性抗HBsAg单链Fab基因在Pichia pastoris中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的：研究重组Fab的结构与亲和活性的关系：方法：通过重叠PCR，将人源性抗HBsAg Fab的H和L链基因融合构建单链Fab基因，并将其转入毕赤酵母表达载体pPICZαA中。以单链Fab基因表达载体通过氯化锂转化法转化毕赤酵母GS115。将获得的重组酵母在摇瓶中培养进行重组单链Fab的可溶性表达。表达上清经硫酸铵沉淀及亲和层析纯化后，用直接ELISA检测表达产物和纯化Fab的活性：结果：SDS—PAGE和Western blot分析显示，单链Fab在毕赤酵母中获得分泌型表达。薄层扫描显示，在摇瓶中培养毕赤酵母表达的单链Fab约为5～10mg／L。经亲和层析纯化获得纯度达97．8％的重组单链Fab。经直接ELISA测定的结果显示，重组单链Fab具有较好的结合HBsAg的活性。结论：通过重叠PCR构建的融合单链Fab基因，可成功地在毕赤酵母中获得分泌型表达，表达产物具有较好的结合HBsAg的活性。
- 邓宁向军俭粟宽源王宏唐勇
- 关键词：HBSAG毕赤酵母
- 人源性抗HBsAg单链Fab基因在酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 邓宁向军俭粟宽源
- 关键词：抗HBSAG单链酵母表达载体人源性抗体噬菌体抗体重叠PCR
- 重组人抗HBs-Fab抗体的纯化及结构分析被引量：4
- 2006年
- 目的研究重组人抗HBs-Fab抗体的纯化工艺,并对其结构等特性进行分析。方法采用离子交换-分子筛层析法分离纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAg Fab抗体,并经ELISA检测其抗体活性,等电聚焦电泳法检测其等电点(pI),基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量和肽质量图谱。结果纯化的重组Fab抗体的纯度可达90%以上,经Sephacryl-100进一步层析后,纯度达99%以上,总收率可达80%以上。Fab抗体具有较好的抗体活性,其pI值为7·6,为一碱性蛋白,相对分子质量为50494,比其理论值约多2579·35,经Endoglycosidase H内切酶消化后的相对分子质量为49609,证明Fab的一级结构中有糖基化现象,且分布于Fab抗体的H链和L链上。胰酶酶解肽段中有21个与理论肽段相符,另检测到1对二硫键正确。结论已建立了重组人抗HBs-Fab抗体的稳定的纯化工艺,且Fab抗体的一级结构正确。
- 饶桂荣陈文吟粟宽源任向荣郑业华余宙耀
- 关键词：FAB片段纯化
- hIL-15成熟肽段基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量：3
- 1999年
- 本文采用ＲＴＰＣＲ的方法自成人脾脏中扩增出ｈＩＬ１５成熟肽段基因，定向克隆入ｐＵＣ１９中，筛选带有插段的阳性克隆。经序列测定证实后，插入大肠杆菌融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ１中，构建重组表达质粒ｐＧＩＬ１５。ＳＤＳＰＡＧＥ证实ｐＧＩＬ１５大肠杆菌中可表达分子量为３８６ｋＤ的融合蛋白带，表达量约占菌体总蛋白的１８５％。目的蛋白经纯化后具有促进靶细胞ＤＮＡ合成的作用。
- 纪宗玲陈苏民余宙耀高磊高磊陈南春粟宽源
- 关键词：RT-PCR分子克隆原核表达活性测定
- 工程化人源性抗-HBs Fab抗体的制备、纯化和鉴定被引量：12
- 1999年
- 用获得的表达人源性抗ＨＢｓＦａｂ片段的大肠杆菌，发酵表达该抗体的可溶Ｆａｂ片段。以羊抗人Ｆａｂ抗体偶联ＨｉＴｒａｐ柱，用Ａｃｔｉｓｅｐｅｌｕｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ作为洗脱液，在ＦＰＬＣ上纯化。用ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白印迹法分析、鉴定，用固相放兔法检测其活性单位。蛋白印迹及ＥＬＩＳＡ显示转化菌株有抗ＨＢｓＦａｂ片段的表达。经ＦＰＬＣ纯化的抗体Ｆａｂ片段呈单一峰，与抗ＨＢｓ阳性血清相似。纯化后的抗体Ｆａｂ片段达到电泳纯，具有较高的活性。
- 余宙耀粟宽源任向荣曾平鲁张宜俊高辉高磊
- 关键词：HBSAG噬菌体抗体
- 人源性抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌中的表达及活性测定被引量：5
- 2002年
- 目的 :制备有活性的人源性抗HBsAg单链抗体。方法 :应用噬菌体表面呈现技术获得人抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗体的Fab片段 ,并将VH 和VL 基因以 (Gly4Ser) 3linker连接成单链 ,插入表达载体pQE40 ,筛选大肠杆菌高表达菌株。结果 :工程菌表达优化试验表明 ,在OD6 0 0 为 0 6时开始诱导 ,持续 6h ,目的蛋白表达量最高可达菌体总蛋白的 31%。包涵体变性后上样镍离子螯合层析柱一步纯化 ,收集目的峰 ,透析复性 ,得纯度为 97%的重组单链抗体 ,其亲和常数为 0 2 3× 10 8mol L。结论 :抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌内获得高效表达 ,经变性和复性 ,得到有活性的单链抗体 ,氨基酸组成正确。为进行临床前研究打下基础。
- 任向荣熊盛唐永红粟宽源陈文吟郑业华余宙耀
- 关键词：大肠杆菌噬菌体表面呈现乙型肝炎表面抗原复性
- 重组人抗HBsAg Fab抗体的纯化方法比较研究
- 2005年
- 目的研究重组人抗HBsAgFab抗体的纯化条件。方法采用羊抗人Fab抗体亲和层析柱、14F7单克隆抗体亲和层析柱、离子交换分子筛层析柱,分别纯化由酵母工程菌(GS115/Fab)发酵的重组人抗HBsAgFab抗体,并对3种纯化方法所得Fab抗体的纯度、收率、与HBsAg的结合活性进行比较。结果3种纯化方法中,14F7单克隆抗体柱纯化的Fab抗体的纯度达98%左右,Fab抗体柱纯化的Fab抗体的纯度为95%,但这两种亲和柱的目的蛋白收率都不高,分别为35%、55%。而离子交换柱纯化的Fab抗体的纯度为93.8%,经分子筛柱进一步纯化后,可达98%以上,Fab抗体蛋白收率可达80%以上。经ELISA分析,3种方法纯化的Fab抗体均具有较高的HBsAg抗原结合力和特异性。结论通过对3种纯化方法的比较得出,离子交换分子筛层析法是重组人抗HBsAgFab抗体的最佳纯化方法,这为抗HBsAgFab抗体的产业化生产和临床研究打下良好基础。
- 饶桂荣粟宽源陈文吟余宙耀
- 关键词：抗HBSAGFAB抗体纯化
