黄菲
- 作品数：5 被引量：25H指数：3
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- 一种体外扩增γδT细胞的新方法被引量：6
- 2011年
- 目的:建立一种新的γδT细胞扩增方法。方法:从健康人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMCs),与用唑来膦酸预处理过的未成熟DCs按10:1混合,在含IL-2 400 U/ml和10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养,用MTT法测定细胞增殖倍数。用流式细胞仪对γδT细胞进行表型分析并检测其细胞内的颗粒酶B、穿孔素和CD107a含量。用乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测细胞杀伤活性。结果:经唑来膦酸预处理的树突状细胞与自身外周血单个核细胞共培养,到11天时γδT细胞增殖倍数达到(120±15)倍,第8天和11天γδT细胞百分率分别达到70.26%±3.56%、90.11%±4.67%。γδT细胞细胞内颗粒酶B、穿孔素及CD107a在第8天时分别为81.66%±4.32%、86.62%±5.21%和80.12%±3.78%,均高于对照组。培养的γδT细胞对SGC-7901、SW-1990、SW-480肿瘤细胞株杀伤活性至第8天时达到峰值。结论:此法能有效诱导γδT细胞体外扩增,培养的γδT细胞颗粒酶B、穿孔素及CD107a均显著高于对照组,并有较强的抗肿瘤活性。
- 吕小婷刘军权周忠海陈玲张娟张颂黄菲陈复兴
- 关键词：树突状细胞唑来膦酸ΓΔT细胞免疫治疗
- 唑来膦酸预处理的巨噬细胞诱导γδT细胞体外扩增的实验研究被引量：2
- 2011年
- 探讨唑来膦酸预处理的巨噬细胞对γδT细胞体外扩增作用及扩增的γδT细胞体外抗肿瘤的效应。从健康人外周血分离单个核细胞(PBMC),与唑来膦酸预处理的自身巨噬细胞以10∶1的比例在含400 U/ml IL-2的培养基中共培养。在培养的第10天收集细胞计数;采用流式细胞术进行γδTCR表型分析,同时检测其CD107a、NKG2D、穿孔素和颗粒酶B的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562细胞的体外杀伤效应。结果显示,PBMC和唑来膦酸预处理自身巨噬细胞共培养10 d时,γδT细胞扩增224.34±84.19倍,纯度达到73.55%±9.42%,CD107a、NKG2D、穿孔素和颗粒酶B表达分别为55.90%±8.62%、78.18%±7.56%、72.65%±6.54%、59.82%±7.26%,均显著高于对照组;γδT细胞对K562细胞的杀伤效应在效靶比为40∶1时达72.37%±5.18%。以上结果表明,唑来膦酸预处理的巨噬细胞能有效诱导γδT细胞体外扩增,扩增的γδT细胞具有较强的抗肿瘤活性。
- 周忠海陈复兴吕小婷周燏张娟孙蕾清黄菲陈玲刘军权
- 关键词：唑来膦酸ΓΔT细胞巨噬细胞免疫治疗
- 羽扇豆醇对胰腺癌细胞株SW1990及γδT细胞生长的影响被引量：7
- 2011年
- 目的:探讨羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990及γδT细胞生长的影响.方法:采用本实验室体外扩增人外周血γδT细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的羽扇豆醇在不同时间段对人γδT细胞和人胰腺癌细胞SW1990生长的影响.本实验分3组:空白对照组、溶剂对照组和实验组,时间段分24、48、72h组.结果:羽扇豆醇浓度在0.4-200μg/mL时羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990在24、48、72h各组与空白对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).而24、48、72h3组比较差异无统计学意义.γδT细胞培养7d从扩增前的3.61%增加到80.2%,羽扇豆醇对γδT细胞在24、48、72h随浓度的增加先增值后抑制作用.24h与空白对照组和溶剂对照组比较差异无统计学意义.48、72h各组与空白对照组和溶剂对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:羽扇豆醇对人胰腺癌细胞SW1990有抑制作用,对γδT细胞随着浓度增加有先促进后抑制作用.
- 罗冠琴朱炳喜陈复兴刘军权黄菲吕小婷
- 关键词：羽扇豆醇胰腺癌细胞SW1990ΓΔT细胞
- 白藜芦醇对人CIK细胞功能的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨白藜芦醇对人C IK细胞生长以及体外杀伤活性的影响。方法体外常规法培养CD3+CD56+达15%以上的C IK细胞。用不同浓度的白藜芦醇诱导人CIK细胞48 h后:MTT比色法检测人CIK细胞增殖力、流式细胞术(FCM)测定CIK细胞表达的穿孔素和颗粒酶B的变化和乳酸脱氢酶释放法测定CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤活性。结果白藜芦醇浓度在0～1.6μmol/L时能促进C IK细胞生长,并增加CIK细胞穿孔素、颗粒酶B的含量表达。当浓度大于3.1μmol/L时可抑制CIK细胞生长,并随着药物浓度的递增抑制率逐渐增加。结论白藜芦醇在一定浓度下可促进CIK细胞生长,提高CIK细胞的杀伤活性。
- 陈玲刘军权周忠海吕小婷黄菲李佚陈复兴
- 关键词：CIK细胞白藜芦醇胃癌SGC-7901细胞株杀伤活性
- 人外周血γδT细胞CD107a的表达变化与细胞毒活性的关系被引量：9
- 2011年
- 目的：探讨人外周血γδT细胞体外诱导过程中CD107a的表达变化及其与γδT细胞细胞毒活性的关系。方法：分离健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,加入含有IL-2和异戊烯焦磷酸（isopentenyl pyro-phosphate,IPP）的培养基,体外诱导γδT细胞。分别在第7、10、14天以流式细胞仪对培养的γδT细胞进行鉴定,并同时检测其CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达。CCK-8试剂盒检测γδT细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤效应。采用SPSS13.0软件进行spearman相关分析。结果：在培养的第7、10、14天,γδTCR阳性细胞分别为（60.31±3.84）%、（66.45±4.25）%、（70.99±4.66）%。CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达在γδT细胞培养第710天达到峰值后呈下降趋势,第7天与第0天相比差异有统计学意义[（80.66±4.42）%、（70.11±3.34）%、（94.26±4.25）%vs（69.02±5.04）%、（62.31±4.66）%、（53.62±3.69）%,P〈0.05]。培养第7天、第10天的γδT细胞对SW-1990细胞杀伤率显著高于第14天的γδT细胞[（58.86±5.12）%、（61.53±4.69）%vs（40.31±4.83）%,P〈0.05]。γδT细胞CD107a表达与穿孔素、颗粒酶B、其对SW-1990细胞杀伤效应显著相关（r=0.853,r=0.785,r=0.839,均P〈0.01）。结论：人外周血γδT细胞CD107a的表达与其抗肿瘤能力正相关,可能是γδT细胞细胞毒活性的一个标志。
- 周忠海陈复兴吕小婷张娟孙蕾清张磊黄菲
- 关键词：ΓΔT细胞细胞毒作用穿孔素颗粒酶B
