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肠道病毒71型3C基因原核表达质粒的构建表达及纯化: 2012年; 目的构建肠道病毒71型(Entervirus71,EV71)3C基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达并纯化。方法以病毒的反转录产物为模板,PCR扩增EV71 3C基因,克隆至pGEx-4T-1载体中,构建重组表达质粒pGEx-3C,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白GSR-3C经GST-Agarose亲和层析和分子筛层析纯化后,Western blot检测其反应原性。结果重组表达质粒pGEx-3C经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约46 000,表达量约占菌体总蛋白的50%,主要以可溶性形式表达;纯化后的重组融合蛋白纯度大于90%,可与小鼠抗EV71单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pGEx-3C,在大肠杆菌中高效分泌表达并纯化了重组GST-3C融合蛋白,为EV713C蛋白酶结构与功能的研究及3C靶向药物和疫苗的研究奠定了基础。; 江月丛浩龙李梨; 关键词：原核细胞基因表达纯化

肠道病毒71型感染对细胞内钙离子分布的影响: 2014年; 利用流式细胞技术和激光共聚焦显微镜技术观察EV71感染前后,细胞内钙离子分布变化情况。细胞感染EV71后,细胞内质网内钙离子浓度显著降低,细胞质及线粒体内钙离子浓度显著升高。EV71的感染能够引起宿主细胞内钙离子的分布变化,这种变化可能会调节病毒与宿主细胞间的一系列相互作用。; 田洪超丛浩龙田波; 关键词：肠道病毒71型钙离子内质网

串联亲和纯化技术筛选肠病毒71型3D聚合酶的相互作用蛋白被引量：5: 2012年; 目的利用串联亲和纯化技术筛选与肠病毒71型3D聚合酶相互作用的宿主细胞蛋白。方法利用RT-PCR方法从EV71BrCr株全基因组中获得3D聚合酶全长基因,构建pcDNA3.0-3D-Flag-HA真核表达载体并转染RD细胞,48 h后收集细胞。用Western blot方法检测3D蛋白在RD细胞内的表达情况。串联亲和纯化技术筛选与3D聚合酶相互作用的宿主蛋白并进行质谱分析,确定与3D聚合酶相互作用的蛋白或多肽。并采用免疫共沉淀实验,对候选蛋白CyclinG1与3D的相互作用进行验证。结果成功构建了pcDNA3.0-3D-Flag-HA载体,在RD细胞内检测到3D蛋白的表达。经串联亲和纯化和质谱分析得到LATS2、Nek2、APC5、CyclinG1、PI3K等一系列参与细胞凋亡及细胞周期调控的蛋白。免疫共沉淀实验证实3D蛋白与CyclinG1的相互作用。结论 3D聚合酶可能与宿主细胞内蛋白相互作用,引起细胞凋亡及细胞周期改变。; 江月丛浩龙王健李梨; 关键词：肠道病毒71型串联亲和纯化

干扰肌肉特异E3泛素蛋白连接酶基因的干扰RNA,包含其的载体及其应用: 本发明提供了干扰肌肉特异E3泛素蛋白连接酶基因表达的方法，具体地Atrogin-1基因和MuRF 1基因的干扰RNA及其DNA序列，包含其的载体和由所述载体转录的干扰RNA，以及将所述干扰RNA序列，包含其的载体和由所述...; 刘长梅田波丛浩龙; 文献传递

pH值对FOXO1、GDF-8基因反义RNA寡核苷酸吸收的影响: 2009年; 研究不同pH值下,口服靶向FOXO1与GDF-8基因反义RNA寡核苷酸药物对药效的影响。化学合成靶向FOXO1与GDF-8基因的有效反义RNA寡核苷酸片段,调节药物PH值,通过灌胃方式给药,给药20 d后处死小鼠,进行体重,腿部肌肉增长情况分析。提取腿部肌肉组织总RNA,用real time PCR检测FOXO1与GDF-8基因的表达。结果表明,服用RNA oligos的试验组小鼠腿部肌肉重量均比对照组肌肉重量增长快。其中pH为7.0的RNA oligos的效果比pH为5.0的效果好,pH9.0的RNAoligos的作用效果最弱。与小鼠体重变化结果一致,real time PCR检测实验组FOXO1与GDF-8基因转录水平较对照组均有明显下降,其中服用pH为7.0的RNA oligos的下降最多。因此,口服靶向FOXO1与GDF-8基因的反义RNA寡核苷酸药物的最适pH值应为中性偏酸。; 丛浩龙刘建玲杨倬孙仑泉刘长梅; 关键词：肌肉萎缩 RNA干扰 PH值 FOXO1

干扰肌肉特异E3泛素蛋白连接酶基因的干扰RNA,包含其的载体及其应用: 本发明提供了干扰肌肉特异E3泛素蛋白连接酶基因表达的方法，具体地Atrogin-1基因和MuRF1基因的干扰RNA及其DNA序列，包含其的载体和由所述载体转录的干扰RNA，以及将所述干扰RNA序列，包含其的载体和由所述载...; 刘长梅田波丛浩龙

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丛浩龙