夏湘萱
- 作品数：14 被引量：79H指数：6
- 供职机构：解放军第309医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 16S～23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针不同显色方法对结核患者痰标本的检测
- 2003年
- 目的 评价 16S～ 2 3SrDNA间隔区序列寡核苷酸探针碱性磷酸酶显色与辣根过氧化物酶化学发光法对结核患者痰标本检测的应用价值。方法 采用生物素标记 5′端 18bp的寡核苷酸探针斑点杂交的碱性磷酸酶显色反应及辣根过氧化物酶化学发光检测 90例结核患者和 30例非结核患者痰标本。结果 痰标本基因组DNA直接与探针杂交 ,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为 2 2 2 % ,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为 33 3% ;痰标本经引物PL1、PL2扩增 (扩增产物 35 0bp ,)与寡核苷酸探针杂交 ,碱性磷酸酶显色反应检测阳性率为 77 8% ,辣根过氧化物酶化学发光检测阳性率为 83 3% ;痰标本经引物b扩增 (扩增产物 2 5 0bp)与探针杂交 ,碱性磷酸酶显色和化学发光检测阳性率分别为 75 6 %、80 0 % ,检测的敏感性高于痰涂片。寡核苷酸探针与 30例非结核患者痰标本DNA杂交则全为阴性。结论 寡核苷酸探针和 2 5 0bpPCR扩增产物相结合 ,经化学发光显色是分枝杆菌检测的一种有效方法。
- 张灵霞庄玉辉杨华卫李邦印夏湘萱
- 关键词：寡核苷酸探针斑点杂交
- 结核病4种实验室检测方法的评价被引量：4
- 1997年
- 结核病４种实验室检测方法的评价１０００９１北京解放军第３０９医院李晓明王巍张敦熔李国利夏湘萱吴雪琼关键词结核，肺；聚合酶链反应；抗酸染色；酶联免疫吸附试验；细菌培养中国图书资料分类号Ｒ３７８．９１在结核病病原学诊断的方法中，抗酸染色和细菌培养是较传统...
- 李晓明王巍张敦熔李国利夏湘萱吴雪琼
- 关键词：结核病PCRELISA抗酸染色
- 荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值被引量：8
- 2003年
- 目的 评价聚合酶链反应 (PCR)荧光探针杂交技术 (TaqMan技术 )检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养 )及TaqMan法检测 1 3 3份结核病患者痰标本 ,5 3份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为 3 6.1 % ,TaqMan法阳性率为 61 .7% ,高于细菌学检测法 ,经统计学处理 ,两者有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,用TaqMan法检测临床标本特异性为 96.2 %。 结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化 ,在单一管内完成 ,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。
- 李国利赵铭王巍夏懿沈建伟夏湘萱庄玉辉常京元
- 关键词：结核分支杆菌聚合酶链反应
- 结核分支杆菌MPT63抗原的表达及其血清学诊断价值的研究被引量：12
- 2001年
- 获得结核分支杆菌重组MPT6 3蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值 ,寻找更有效的结核病诊断试剂。方法 :应用基因工程技术表达、纯化MPT6 3蛋白 ,通过Westernblotting和免疫双扩散试验分析其抗原性 ,通过斑点免疫试验、结明试验和结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -MPT6 3测序表明具有正确的编码序列 ,MPT6 3蛋白在大肠杆菌细胞内以可溶性蛋白的形式高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 40 %左右 ,分子量约 16kDa ,Westernblotting和免疫双扩散试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 46 .7%和 5 0 % ,结核病一步法检测的阳性率为 70 % ,结明试验的阳性率为 80 %。在34例正常血清中 ,MPT6 3和PPD斑点免疫试验检测抗结核抗体的阳性率分别为 38.2 %和 35 .3 % ,结核病一步法检测的阳性率为 2 3 .5 %。结论 :pET2 4b -MPT6 3大肠杆菌工程菌能以可溶性蛋白的形式高效表达 ,重组的MPT6 3也许可作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。
- 吴雪琼张俊仙夏湘萱刘军李洪敏
- 关键词：抗原血清学诊断分支杆菌结核
- 结核病实验室3种快速检测方法的评价
- 1996年
- 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，以及用抗酸染色的方法，对１０种抗酸杆菌，２种非分枝杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＩｔＩＳＡ检测除人型结核杆菌，ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疲分枝杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分枝杆菌均呈阳性。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感度为１５ｎｇ／ｍｌ。抗酸染色敏感度为１×（１０￣４～１０￣５）个细菌。应用抗酸染色，ＰＣＲ及ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了１３８份结核临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色徐片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明，抗酸染色，ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ均为快速结核病病原学检测方法。在使用中各自又有其特点。
- 李晓明庄玉辉李国利张敦熔王巍吴雪琼张小刚夏湘萱
- 关键词：结核病染色单克隆抗体聚合酶链反应
- 结核分支杆菌重组MPT64蛋白的血清学诊断被引量：3
- 2005年
- 评价结核分支杆菌重组MPT64蛋白为抗原进行结核病血清学诊断的价值。以PPD为对照,通过ELISA方法检测121例结核病人、146例健康体检者、37例卡介苗阳转者血清中的抗结核抗体。结果表明,结核分支杆菌重组MPT64蛋白具有很强的免疫反应性,可以作为结核病抗结核抗体检测的血清学诊断试剂之一。
- 张俊仙吴雪琼张翠英夏湘萱李洪敏陆阳
- 关键词：血清学诊断结核病抗结核抗体
- rDNA探针杂交检测病人痰标本中结核杆菌的研究被引量：10
- 2000年
- 应用结核分枝杆菌特异的rDNA探针杂交检测痰标本中的结核杆菌rDNA ,评价其在临床标本检测中的应用价值。方法 用引物b对结核分枝杆菌 1 6S - 2 3SrDNA间隔区序列进行扩增 ,同时加入生物素标记 ,制成 2 50bp的rDNA探针。对该探针的敏感性、特异性进行了研究 ,并对 90份结核病人 ,30份非结核病人痰标本的PCR产物进行了斑点杂交检测。结果 rDNA探针检测引物bPCR扩增产物的敏感性为 1 0 0pg。rDNA探针与受试 2 4种分枝杆菌和 1 1种非分枝杆菌引物bPCR扩增产物杂交只有结核分枝杆菌、胃分枝杆菌为阳性杂交 ,特异性较高。而rDNA探针对 90份结核病人痰标本引物b扩增产物检测的阳性率为 80 .2 % ,高于PCR扩增产物电泳检测结果 (64% )。rDNA探针与 30份非结核病人痰标本杂交结果均为阴性杂交。结论 rDNA探针与引物bPCR扩增相结合能提高结核病人痰标本检测的敏感性与特异性。
- 张灵霞庄玉辉杨华卫李邦印夏湘萱
- 关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应肺结核
- 聚合酶链反应分子灯塔法检测结核分枝杆菌被引量：9
- 2001年
- 目的 评价聚合酶链反应 (PCR )分子灯塔法检测临床标本中结核分枝杆菌 (结核菌 )的应用价值。方法 应用涂片镜检法、培养法及PCR分子灯塔法检测 142份结核病患者痰标本 ,42份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 涂片镜检法检测结核病患者临床标本中结核菌阳性率为 35 .2 % (5 0 / 142 ) ,培养法阳性率为 35 .9% (5 1/ 142 ) ,PCR分子灯塔法阳性率为 44 .4% (6 3/ 142 )。用PCR分子灯塔法检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 PCR分子灯塔法是一种全新的PCR分子杂交模式 ,PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化 ,在单一管内完成 ,其简便、快速、防污染 ,敏感性较高、特异性强 。
- 李国利赵铭庄玉辉王巍夏湘萱徐淼戴海峰方翔
- 关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应
- 结核分支杆菌ESAT6蛋白的表达、纯化及抗原性研究被引量：19
- 2001年
- 目的 :获得重组ESAT6蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 :分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠 8周后 ,以结核分支杆菌接种小鼠。应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白 ,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT6蛋白为抗原 ,通过ELISA方法及结核病一步法检测小鼠或人血清中抗结核抗体。结果 :重组质粒 pET2 4b -ESAT6在大肠杆菌BL2 (DE3)细胞内以包涵体形式存在 ,分子量约6kDa ,每 10 0ml培养菌可获得约 18mg纯化的重组蛋白。生理盐水和卡介苗免疫小鼠血后血清中抗ESAT6抗体无区别 ;结核分支杆菌攻击后 ,两组小鼠血清中抗ESAT6抗体均明显升高 ,但只有卡介苗组小鼠抗体水平超过平均值 +2标准误。以 33例正常人血清的OD值 +2S为正常界限值 ,33例正常人和 32例结核病人血清一步法和PDD、rESAT6ELISA检测抗结核抗体的特异性和敏感性分别为 :一步法 87.9% (2 9/33)、6 5 .6 %(2 1/32 ) ;PPD 93 .9% (31/33)、6 2 .5 % (2 0 /32 ) ;rESAT6 97% (32 /33)、18.2 % (4/32 )。结论 :pET2 4b -ESAT6大肠杆菌工程菌能以包涵形式高效表达重组ESAT6蛋白 ,卡介苗免疫对血清中抗ESAT6抗体无影响 ,结核病人血清中抗ESAT6抗体阳性率低 ,rESAT6纯化蛋白可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一。
- 吴雪琼张俊仙史迎昌李洪敏金关甫夏湘萱刘军
- 关键词：ESAT6血清学诊断分支杆菌结核
- 两种DNA探针杂交检测结核分枝杆菌的研究被引量：8
- 2001年
- 张灵霞庄玉辉杨华卫李邦印夏湘萱
- 关键词：结核分枝杆菌DNA探针聚合酶链反应痰标本斑点杂交
