寇笑笑
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 透明颤菌血红蛋白基因在刺糖多孢菌中整合表达促进多杀菌素的生物合成被引量：2
- 2012年
- 为解决刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)高密度深层培养过程中的供氧不足问题,促进多杀菌素的生物合成,采用重叠PCR技术将透明颤菌(Vitreoscillastercoraria)血红蛋白基因(vgb)可读框(ORF)置于红霉素抗性基因启动子(PermE)之下,并将其克隆到整合型载体pSET152上,构建成vgb表达载体pSET152EVHB;通过接合转移方式将其导入刺糖多孢菌SP06081中,利用载体上ΦC31整合性位点通过位点特异性重组将vgb定点整合到SP06081菌株染色体上,获得一株遗传性能稳定的重组菌株S078-1101;重组工程菌的PCR与Southern blotting检测显示vgb已整合到染色体上,一氧化碳结合差光谱分析表明在S078-1101工程菌中表达了有活性的透明颤菌血红蛋白(VHb);摇瓶发酵结果显示,在正常溶氧与中度限氧状态下,vgb的表达均可显著促进多杀菌素的生物合成(P<0.01).这说明vgb在刺糖多孢菌中的整合表达改善了菌体对溶氧的吸收性能,是一种有效的定向遗传改良手段.
- 罗玉双寇笑笑丁学知胡胜标唐滢李文萍黄璠杨琦陈汉娜夏立秋
- 关键词：刺糖多孢菌多杀菌素透明颤菌血红蛋白同源重组
- 大肠杆菌-链霉菌穿梭表达载体pMF的构建及其应用被引量：2
- 2010年
- 【目的】构建能定点整合到链霉菌（Streptomyces）染色体上的高效表达载体。【方法】以链霉菌自杀型表达载体pLSB2为基础,通过插入链霉菌噬菌体ΦC31整合酶基因int和attP位点（Phage attachment site）,构建了能在大肠杆菌和链霉菌之间进行接合转移并定点整合到链霉菌染色体上的表达载体pMF。将pMF转化大肠杆菌ET12567（pUZ8002）,并分别接合转移天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolorM145）、变铅青链霉菌（Streptomyces lividansTK24）和红色糖多孢菌（Saccharopolyspora erythraea2338）,挑取接合子进行PCR和Southern杂交检测。将来自刺糖多孢菌S08-4的S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（SAM-s）克隆到载体pMF的启动子下游,接合转移到天蓝色链霉菌中。【结果】表明pMF成功整入链霉菌染色体,并且检测到目的蛋白的表达。【结论】构建的pMF载体可作为外源基因定点整合表达的有效工具,为后续的基因功能研究以及链霉菌的遗传改造奠定了基础。
- 全梅芳余凯夏立秋丁学知曾凡军寇笑笑王海龙胡胜标余子全李敬业
- 关键词：链霉菌整合酶
- 多杀菌素研究进展
- @@本实验室从436份土壤中分离出的两株放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa).经对多杀菌素成分分析和杀虫生物活性测定，呈现了较高的杀虫毒力，其中一株已成为国家发明专利菌种(CCTCC M...
- 夏立秋唐滢杨尉寇笑笑张友明黄科学余子全胡胜标罗玉双黄瑶易勇全梅芳
- 关键词：多杀菌素刺糖多孢菌原生质体
- 文献传递
- 刺糖多孢菌eryR基因的克隆与功能研究
- eryR基因是红色糖多孢菌/(Saccharopolyspora erythraea/)菌体形态分化和红霉素合成的途径专一调控基因,该基因缺失的突变株,其红霉素产量仅为原始菌株的1//7,并且形态分化也受到明显的抑制。过...
- 寇笑笑
- 关键词：刺糖多孢菌异源表达
- 文献传递
