尤强
- 作品数：14 被引量：45H指数：5
- 供职机构：上海第二医科大学基础医学院上海市免疫学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目上海市高等学校科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备被引量：5
- 2003年
- 目的:获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术从睾丸中获得cML66的cDNA,亚克隆至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE、Westernblot鉴定后,应用纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列 一致。用纯化的目的蛋白免疫家兔后,获得高滴度的特异性兔抗血清。结论:成功地克隆CML66基因,建立了原核表达、纯化体系。制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清。
- 尤强程琳玲王颖王树军张惠珍葛海良
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 正常人及肿瘤病人血清中CML66蛋白抗体水平被引量：1
- 2003年
- 程琳玲尤强王颖王树军张惠珍葛海良
- 关键词：正常人肿瘤病人血清抗体水平
- HLA和肿瘤被引量：6
- 2001年
- 机体抗肿瘤的免疫效应机制中 ,是以细胞免疫为主导作用 ,并与体液免疫相互调节 ,协同杀伤肿瘤细胞 ,其中 ,HLA起关键作用。研究HLA与肿瘤的关系 ,有助于了解肿瘤的发生、发展过程 ,不同个体患肿瘤的风险度 ,以及寻找肿瘤特异的抗原肽 ,从而为肿瘤的防治提供依据。
- 尤强葛海良
- 关键词：HLA肿瘤免疫
- 新的肿瘤相关抗原(OVA66)的研制和临床初步应用被引量：2
- 2005年
- 目的 制备OVA6 6蛋白和其抗体,探讨其检测肿瘤的应用价值。方法 应用原核表达技术和Ni2 + 亲和层析法,制备纯化的OVA6 6蛋白,经SDS- PAGE电泳鉴定,将纯化蛋白加佐剂免疫家兔,获得抗OVA6 6蛋白抗血清,并应用WesternBlot测定其滴度和特异性。利用OVA6 6蛋白和其抗体分别建立ELISA和免疫组化法,测定正常人和肿瘤患者的血清OVA6 6抗体水平和肿瘤组织标本中OVA6 6蛋白表达量。结果 获得的高纯度OVA6 6蛋白和高滴度、特异性抗OVA6 6抗血清。ELISA检测显示,正常人和肿瘤患者血清抗体水平存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。正常人组OD均值为0 . 2 0±0 0 5 ,肿瘤患者组OD均值为0 . 36±0. 12 ,肿瘤患者中阳性率为4 0 % (46 / 116 )。免疫组化法结果表明,肿瘤组织标本阳性率达81% (34/ 4 2 ) ,而正常组织均为阴性。结论 应用OVA6 6蛋白和其抗血清建立的检测方法,为临床肿瘤辅助诊断的应用奠定基础。
- 杨振熙李美星尤强陈影张惠珍葛海良
- 关键词：肿瘤相关抗原ELISA
- HLA—A＊0201的cDNA克隆及在COS—7细胞上的瞬时表达
- 2001年
- 目的 :克隆HLA A 0 2 0 1编码区的cDNA ,并建立在COS 7细胞上的瞬时表达系统。方法 :采用逆转录 PCR技术从HLA A 0 2 0 1阳性的淋巴细胞中获得HLA A的cDNA ,将其定向克隆至载体pBluescriptIISK(+ / - )中 ,经测序确证后 ,将该基因插入真核表达载体pcDNA3中 ,通过阳离子脂质体介导转染至COS 7细胞 ,用流式细胞仪测定细胞表面HLA A 0 2 0 1分子的瞬时表达。结果 :获得的HLA A 0 2 0 1基因的cDNA序列与Genebank登录的cDNA序列一致。FACS检测结果显示 ,COS 7细胞上HLA A 0 2 0 1的表达率为 5 3%。结论 :成功克隆HLA A 0 2 0 1基因 ,并实现了在COS 7细胞上的瞬时表达 ,为研究HLA
- 尤强葛海良张笑人王颖周光炎
- 关键词：COS-7细胞CDNA基因治疗
- CML抗原肽与HLA—A2分子结合性和稳定性的实验研究
- MHC分子和被递呈的抗原肽之间的相互作用是诱导特异性细胞免疫的重要基础。有实验表明,低亲和力的抗原肽以诱导免疫耐受为主,而高亲和力的抗原肽以诱导免疫应答为主,所以抗原肽与MHC分子之间亲和力的大小往往决定诱导免疫应答的性...
- 王颖尤强张惠珍王树军陈琳琳葛海良
- 文献传递
- 肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响被引量：10
- 2006年
- 目的:探讨肿瘤抗原基因OVA66对肿瘤细胞生物学特征的影响。方法:采用脂质体法,以重组真核表达载体pcDNA3.1-OVA66转染肝癌细胞系SMMC-7721,经G418稳定筛选、克隆及扩增,采用RT-PCR、Westernblot和免疫细胞化学(ICC)染色法,检测目的基因及其蛋白的表达。用FACS检测细胞周期的变化;电镜技术观察细胞的超微结构;体外运动、侵袭实验检测细胞运动及侵袭能力;并应用基因芯片技术检测相关基因的差异表达。结果:RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1-OVA66的细胞中OVA66基因呈高表达。Westernblot显示,在OVA66蛋白处出现明显的条带。电镜和FACS检测表明,该基因可增强肿瘤细胞的增殖能力。体外运动、侵袭实验证实,该基因可促进肿瘤细胞的迁移、侵袭。基因芯片显示,该基因的高表达可促进Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)等基因的表达,影响肿瘤的侵袭和转移。结论:OVA66基因及其蛋白可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移等一系列生物学功能。
- 李美星王树军王颖张惠珍尤强周光炎葛海良
- 关键词：OVA66肿瘤相关基因基因芯片
- CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备
- CML66是新近发现的一种具有免疫原性的肿瘤抗原,分子量为66KD,位于人8号染色体,它广泛表达于各种肿瘤组织及细胞株,除睾丸外,在正常组织中无表达。目前对于其蛋白的生物学功能和免疫学特性还仍未知。本文着重报道该基因克隆...
- 尤强程琳玲王颖王树军张惠珍葛海良周光炎
- 从卵巢癌cDNA表达文库筛选肿瘤抗原基因的研究被引量：15
- 2001年
- 目的利用肿瘤患者自体血清筛选患者肿瘤cDNA表达文库SEREX,寻找肿瘤特异性抗原是肿瘤免疫学研究的新策略,由此方法所获B细胞抗原肽可为进一步寻找T细胞抗原肽,开展肿瘤免疫治疗和诊断提供线索。方法采用SEREX方法,筛选中国人卵巢癌cDNA表达文库。对获得的阳性克隆片段测序鉴定和进行BLAST同源性比较。采用RTPCR,分析正常组织和肿瘤组织及肿瘤细胞株中6个新的EST片段的表达。结果所获基因片段大多数为已知抗原基因20/27。根据其来源又可归类为结构基因、线粒体基因和调控基因。另外,获得6个未知的EST片段。RTPCR的结果表明,4个ESTEST8788、1750、1754和3533片段在肿瘤和正常组织中均有表达,2个EST在正常组织中未见表达,而在肿瘤组织中有表达,可能是与肿瘤相关或特异的EST片段。结论SEREX方法不失为一种有效筛选卵巢癌肿瘤抗原的新方法,所获肿瘤抗原候选基因,可进一步进行结构和功能的研究。
- 袁明王颖张惠珍王树军张笑人尤强马安伦冯荻周光炎葛海良
- 关键词：卵巢癌肿瘤抗原基因表达
- 从卵巢癌cDNA文库中筛选新的肿瘤标志物被引量：10
- 2002年
- 采用SEREX法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文库 ,得到 2 7个阳性克隆 ,其中 3个为全长cDNA。序列分析和同源性比对结果表明所获得的 2 7个克隆分属于分化抗原、细胞结构蛋白及功能未知三类。选择其中一个全长cDNAMY OVA 13(该基因编码的蛋白是MAD2 ) ,利用基因工程方法克隆、表达和纯化得到目的蛋白 ,采用点杂交方法检测了MY OVA 13目的蛋白与正常人和肿瘤患者中的血清学反应。MY OVA 13抗体只在肿瘤组中检测到 (5 / 74 ) ,在正常组中均为阴性 ;间接ELISA测定结果显示 ,MY OVA 13抗体的水平在肿瘤组中均高于正常组 ,其中肝癌和前列腺癌组与正常组相比 ,在统计学上有显著差异 ,P值分别 <0 0 1和 <0 0 5。我们的初步结果表明MY OVA 13及其抗体具有一定的肿瘤特异性 。
- 王颖葛海良袁明张惠珍王树军马安伦尤强周光炎
- 关键词：卵巢癌CDNA文库肿瘤标志物SEREX
