张松柏
- 作品数：49 被引量：273H指数：9
- 供职机构：湖南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程化学工程生物学更多>>
- 辣椒脉黄病毒P4蛋白多克隆抗体制备与应用被引量：1
- 2022年
- 【目的】辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)属马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus),生产上主要侵染辣椒,目前在我国呈现快速扩展态势,因此,亟需开展PeVYV致病性研究,为分析对辣椒的潜在威胁提供依据。以PeVYV编码运动蛋白P4为免疫源,制备多克隆抗体,建立PeVYV P4蛋白特异性检测方法,为PeVYV P4蛋白功能研究奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术,从感染PeVYV辣椒cDNA中扩增获得片段大小为471 bp的PeVYV P4基因,并克隆到原核表达载体pDEST17,转化E.coli Rosetta中进行诱导表达,采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化P4蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用Western blotting检测。【结果】原核表达的PeVYV P4蛋白,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为25 kDa的单一条带。Western blotting检测表明,制备的多克隆抗体,特异性的结合P4蛋白。PeVYV侵染辣椒样本检测表明,制备的P4多克隆抗体能特异性检测PeVYV。【结论】制备的PeVYV P4多克隆抗体,可用于特异性检测PeVYV P4蛋白,为进一步深入研究P4蛋白的功能奠定基础。
- 卜姗罗香文张德咏张德咏张宇张松柏
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 一种利用广适茄砧提前秋延后番茄育苗期的方法
- 本发明涉及农业种植技术领域，具体涉及一种利用广适茄砧提前秋延后番茄育苗期的方法。本发明包括以下步骤：(1)砧木和接穗选择；(2)播种；(3)育苗；(4)嫁接；(5)嫁接后管理；(6)移栽。本发明的方法在7‑8月高温期开始...
- 张战泓欧阳娴白占兵刘峰陈绍祥李兴华张松柏张卓刘勇
- 文献传递
- 贵州辣椒叶脉黄化病毒分离物检测及其P0、CP、MP基因进化分析被引量：2
- 2020年
- 为明确辣椒叶脉黄化病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)在贵州辣椒上的发生分布及其分子变异情况。用RT-PCR法对采自贵州省25个采样地点的548份辣椒疑似病毒病样品进行检测。结果表明:129份为阳性样品,检出率为23.54%。将获得的14个不同采样点PeVYV分离物和已报道的中国和其他国家PeVYV分离物进行序列比对,P0基因核苷酸同源性为90.9%~100.0%,氨基酸相似性为97.7%~100.0%;CP基因核苷酸同源性为93.7%~100.0%,氨基酸相似性为97.9%~100.0%;MP基因核苷酸同源性为94.7%~100.0%,氨基酸相似性均为100.0%。在系统进化树中,有13个采样点PeVYV分离物P0基因聚在一起,与中国分离物(KP326573)的亲缘关系较近,而遵义播州PeVYV分离物与澳大利亚分离物的亲缘关系较近。贵州所有PeVYV分离物CP基因与中国、澳大利亚、美国和西班牙分离物聚为一支,但不同采样点的PeVYV分离物又聚为两个不同的分支。而不同采样点MP基因全部聚在一起,且与其他地区PeVYV分离物的差异不明显。研究结果表明贵州辣椒上不同地区PeVYV分离物具有一定的分子差异,存在遗传分化现象。
- 王莉爽李淳杨学辉张松柏刘勇
- 关键词：辣椒CP基因
- 甲氰菊酯对蔬菜土中微生物数量的影响被引量：4
- 2010年
- 在模拟的土壤生态系统中研究了甲氰菊酯对蔬菜土中微生物数量的影响。结果表明:低浓度甲氰菊酯对蔬菜土中微生物数量影响不大,高浓度甲氰菊酯短期内,对土壤微生物具有抑制作用,17天后恢复至对照水平。土壤微生物30天对土壤中120mg/kg的甲氰菊酯的降解率为37.71%。
- 张战泓张松柏刘勇张德咏罗香文成飞雪罗源华
- 关键词：甲氰菊酯微生物降解
- 水稻橙叶病PCR检测体系的建立被引量：4
- 2008年
- 利用植原体通用引物sP1和sP2,采用PCR法从发病的水稻植株中扩增植原体一段保守的16S rRNA基因的核苷酸序列.结果表明,从发病的水稻植株中都能够稳定扩增得到1条558 bp的特异性条带.对该条带进行克隆和序列分析表明,该片段和Genbank中公布的众多植原体的相应区域的核苷酸序列相似性都高达95%以上,表明利用植原体通用引物能有效扩增得到水稻橙叶病原的序列.利用此引物并优化PCR反应条件,建立了水稻橙叶病的PCR检测方法.该方法对检测水稻橙叶病具有特异、灵敏和有效性.应用该检测体系检测从广东信宜、高州和从化采集的多份疑似标样,结果表明,在这几个地区均有水稻橙叶病的发生和危害.
- 张松柏罗香文李华平
- 关键词：水稻橙叶病PCR检测
- 云南省番茄莴苣褪绿病毒分子检测及遗传进化分析被引量：1
- 2022年
- 采集了77份云南省疑似感染莴苣褪绿病毒(lettuce chlorosis virus,LCV)的番茄样本,采用特异性反转录PCR扩增LCV次要外壳蛋白基因(minor coatprotein,CPm)近全长序列,常规Sanger测序法测定相应片段序列,并对其进行遗传进化分析。结果表明,LCV特异性反转录PCR扩增得到与预期大小(1.38 kb)—致的特异性条带;采集的77份番茄样本中LCV检出率为12.99%。测定的LCV CPm;发育分析表明,所有LCV分离物可分为3个亚簇,具有明显的地域特性,其中LCV云南分离物与中国其他地区LCV分离物聚为一亚簇,来自美洲和欧洲分离物分别聚为一个簇。遗传进化分析表明,LCV云南分离物YN58有1个重组事件,序列中嘧啶(C/T)替换率最高(25.25),呈现独立进化、加速扩展趋势。这是在云南省首次报道发现LCV。
- 冯丽肖胡荣卜姗张德咏张德咏罗香文李凡丁铭张卓刘勇
- 关键词：番茄分子检测系统发育分析
- 番茄斑萎病毒侵染的西花蓟马酵母双杂交cDNA文库的构建和分析被引量：1
- 2022年
- 【目的】探明番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt tospovirus,TSWV)和介体西花蓟马(Frankliniella occidentalis)之间的分子互作关系,探索介体因子如何参与病毒侵染过程,以期为解析西花蓟马蛋白调控介体传毒机理奠定基础。【方法】通过若虫期饲毒获得高带毒西花蓟马群体,借助SMART技术构建TSWV侵染的西花蓟马酵母双杂交三框cDNA文库。【结果】3种读码框初级cDNA文库的库容量分别为3.0×10^(6)、2.0×10^(6)和2.0×10^(6) cfu,文库实际扩增基数大于1.5×10^(6) cfu(3种读码框均大于5×10^(5))。扩增文库平均插入片段主要分布在0.5~3.0 kb。对文库随机挑选16个克隆,测序后与GenBank数据库比对,结果显示各插入片段具有同源序列。【结论】构建的cDNA文库具有较高的库容量和重组率,可用于后续筛选西花蓟马与TSWV互作的蛋白。
- 叶倩卢冰心魏艳陈建斌刘勇张松柏章松柏郑立敏
- 关键词：番茄斑萎病毒西花蓟马
- 一株吡嘧磺隆降解菌S_(8-1)的分离鉴定及生物学特性被引量：1
- 2010年
- 以多年连续施用吡嘧磺隆除草剂的水稻试验田泥土为材料,采用富集培养、平板反复划线分离方法,分离到一株能以吡嘧磺隆为唯一碳源和能源生长的光合细菌(Photosynthetic Bacterium,简称PSB),命名为S8-1。通过菌落形态特征观察、菌体形态学观察、活细胞吸收光谱特征、培养特性、生理生化特性及16SrRNA同源性序列分析(GenBank登录号:GQ180069)等试验,初步鉴定该菌为红假单胞菌属(Rhodopseudomonas sp.)。利用高效液相色谱(HPLC)测定了菌株S8-1的降解性能,得出该菌降解吡嘧磺隆的最佳条件为:pH值为7.0-7.5,温度为30°C-35°C;在30°C与pH7.0的光合细菌培养基中培养7d,对100mg/L的吡嘧磺隆降解率为52.07%;并且该菌对浓度高达800mg/L的吡嘧磺隆仍保持降解活性,外加发酵提取物能够明显提高菌体的生长及其降解效率,显示了该菌在高浓度农药废水处理及土壤农药残留生物修复方面潜在的开发价值。
- 尹乐斌张德咏张松柏何明远刘绍文罗香文刘勇
- 关键词：吡嘧磺隆光合细菌红假单胞菌属
- 辣椒斑驳病毒CP蛋白多克隆抗体制备与应用
- 2022年
- 【目的】辣椒斑驳病毒(Pepper mottle virus,PepMoV)是近年来生产上主要侵染辣椒的新发病毒之一,目前有在我国快速扩展的趋势,因此,亟需开展该病毒的特异性快速检测技术,为明确该病毒在我国辣椒主产区的分布、发生致害规律及机制等研究提供科学手段。本研究以PepMoV编码的外壳蛋白CP为免疫源,制备特异性多克隆抗体,建立PepMoV的特异性快速检测方法,为PepMoV的分布和发生致害规律等研究奠定基础。【方法】采用特异性RT-PCR技术,从感染PepMoV辣椒的cDNA中扩增获得片段大小为822 bp的CP基因,并克隆到原核表达载体pET28α,转化E coli DH5α中进行诱导表达,采用Ni-NTA柱层析纯化。以纯化的重组CP蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备特异性多克隆抗体。制备的多克隆抗体采用ID-ELISA和Western blotting检测。【结果】获得原核表达的PepMoV重组CP蛋白,SDS-PAGE结果表明纯化蛋白为分子量约为37 kDa的单一条带。Western blotting和IDELISA检测结果表明,制备的多克隆抗体特异性高,仅识别PepMoV CP蛋白,不识别寄主蛋白和其他选择的马铃薯Y病毒;田间样本检测结果表明,PepMoV在湖南和贵州辣椒上的检出率为20.00%和43.33%。【结论】基于PepMoV CP蛋白特异性多克隆抗体建立的PepMoV快速检测方法,可为进一步深入研究该病毒在我国的分布和发生规律提供科学手段,也为该病毒CP蛋白的功能研究奠定基础。
- 王鑫叶倩吕小园田培洁张松柏张松柏张德咏罗香文
- 关键词：CP基因多克隆抗体间接ELISA
- 光合细菌PSB07-15对水培黄瓜体系中甲氰菊酯污染的生物修复被引量：8
- 2009年
- 为了探索光合细菌PSB07-15降解甲氰菊酯的应用潜力,在实验室研究了光合细菌PSB07-15对水培黄瓜体系中的甲氰菊酯污染的生物修复效率。结果表明,培养30d,光合细菌PSB07-15对黄瓜营养液中100mg·L-1甲氰菊酯降解率达到47.63%,黄瓜中甲氰菊酯降解率达59.73%。光合细菌PSB07-15可以使黄瓜的根长和生物量显著增加,而黄瓜的根活力以及根H2O2酶活力增加并不显著。
- 张松柏张德咏刘勇罗香文成飞雪罗源华
- 关键词：甲氰菊酯生物修复
