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组建重组腺病毒伴随病毒包装系统的自主复制载体及应用: 能用于组建腺病毒伴随病毒包装系统的自主复制型载体，它是由腺病毒伴随病毒基因组编码所有病毒蛋白基因的191-4484核苷酸序列元件、EB病毒质粒型复制子及其反式作用因子、真核细胞抗性选择标志、和带大肠杆菌复制子和氨苄青霉素...; 颜子颖侯云德张桐王海林舒跃龙; 文献传递

差异筛选肝癌凋亡细胞cDNA文库的简便方法: 1998年; 目的差异筛选人肝癌凋亡细胞ｃＤＮＡ文库。方法消减杂交和点杂交相结合的噬菌斑原位杂交法筛选ｃＤＮＡ文库，首先采用（－）ｃＤＮＡ探针杂交，挑取（－）的噬菌斑克隆，再用（－）和（＋）两种ｃＤＮＡ探针与初筛出的噬菌斑克隆杂交的差异筛选方法。结果得到４个充分孤立的噬菌斑克隆，其插入片段长度为１．５ｋｂ左右。结论该方法简便、快速，是差异筛选ｃＤＮＡ文库的一种较为可行的简便方法。; 马运国王文亮张桐杨帆; 关键词：肝肿瘤 CDNA文库细胞凋亡

β－半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒（AAV－2）载体的构建及其在哺乳类细胞中的表达: 1996年; 以野生型２型人类腺伴随病毒（ＡＡＶ－２）全基因组载体（ｐＳＳＶ９和ｐＳＳＶ９－ｉｎｔ－）为基础，构建了重组ＡＡＶ载体ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋）和ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（－），制备ＡＡＶ重组病毒，感染宿主细胞后表达了β－半乳糖苷酶基因。此外，用脂质体转染法将载体导入２９３细胞和Ａ５４９细胞，进行了ＬａｃＺ基因瞬时表达研究。结果显示，重组ＡＡＶ载体（ＰＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋））ＬａｃＺ基因表达的动态变化特点是，转染后表达较早（１２～２４ｈ）出现，并迅速达到高峰值（经２４ｈ），随后较快下降（经４８～７２ｈ）并维持在较低水平。将启动子附近ｉｔｒ结构有差别的上述两载体转染宿主细胞７２ｈ后做表达水平比较，结果ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（－）在２９３细胞和Ａ５４９细胞中，ＬａｃＺ表达水平均高于ｐＳＳＶ９／Ｐ４０－ＬａｃＺ（＋）（１．２倍～１．４倍），提示启动子附近ＡＡＶｉｔｒ结构的变异对表达有一定的影响。; 张桐王文亮王伯云杨新科颜子颖段淑敏候云德; 关键词：腺伴随病毒基因治疗 Β-半乳糖苷酶

腺伴随病毒2型作为基因治疗载体研究的进展: 1997年; 应用腺伴随病毒(AAV)作基因治疗载体的研究取得了很大进展。与其他病毒载体比较,AAV载体具有不致病,在宿主染色体上有较特异的整合位点,宿主范围广泛,可感染非分裂细胞,无致癌性等优点,随着对重组病毒载体构建,载体在染色体上整合机制,外源基因表达调控以及该病毒安全性的深入研究,可望作为一种较为理想的病毒载体用于基因治疗。; 张桐; 关键词：腺伴随病毒基因治疗

2型腺伴随病毒生物安全性的初步形态学观察: 1998年; 用野生型AAV－2感染宿主293细胞后对细胞进行了形态学观察，并采用AAVCap基因探针检测了感染细胞标本中的野生型AAVDNA；采用携带β-半乳糖苷酶基因，而不含AAVrep基因及其表达产物的重组AAV作对照，感染293细胞后检测细胞内β-半乳糖苷酶表达产物，同时对细胞作形态学观察。结果显示野生型AAV－2感染宿主细胞后24～48h，多数细胞胞体收缩、变形，部分细胞死亡、脱落，用Cap基因探针从病变的293细胞基因组DNA中检测到了野生AAVDNA；而被重组AAV感染的293细胞表达了β-半乳糖苷酶，而未出现细胞病变，本结果提示野生型AAV对敏感宿主细胞可表现出毒性作用，其原因可能与rep产物的作用有关。; 张桐王文亮候云德杨新科王伯云; 关键词：腺伴随病毒形态学 293细胞安全性

以EBV复制子载体为基础的新型重组AAV载体包装系统被引量：2: 1997年; 重组腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体是能建立稳定表达的转导型表达载体,可用作基因治疗的外源基因荷载工具.与逆转录病毒相比,它具有高安全性、无致病性和能感染有丝分裂后细胞等的特点.目前重组AAV的制备,需要两种不同的重组AAV质粒,一种是含位于AAV基因组两端的为病毒复制和包装所必需的反向末端重复(Inverted ter-minal repeats,ITR)和外源基因的重组表达质粒载体;另一种质粒作为助手质粒,克隆了除两端ITR外的AAV全基因组DNA,它反式提供AAV复制和包装所需的病毒蛋白,当这两种质粒共转染宿主细胞时,如存在辅助病毒(腺病毒或单纯疱疹病毒)的感染,就能包装出含外源基因的重组AAV假病毒颗粒.; 颜子颖姚二梅张桐舒跃龙侯云德; 关键词：腺病毒

表达β-半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究: 1997年; 表达β－半乳糖苷酶基因的腺伴随病毒载体构建及重组病毒包装系统的研究张桐１王文亮１王伯云１颜子颖２杨新科２候云德２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室）关键词β－半乳糖苷酶腺伴随病毒载体...; 张桐王文亮王伯云颜子颖颜子颖杨新科; 关键词：半乳糖苷酶腺伴随病毒重组体; 全文增补中

一种通用型重组2型腺伴随病毒载体的构建及外源基因表达的研究被引量：2: 1997年; 以野生型2型人腺伴随病毒（AAV－2）基因组载体pSSV9－int-为基础，构建了一种携带和表达真核基因的基础AAV载体pSSV9／MulV－neosv，表达了neo基因，并采用该载体组建了携带人白细胞介素-2cDNA的重组AAV载体pSSV9／MulV－neosv－IL－2，转染A549细胞后表达了人白细胞介素-2基因。为应用腺伴随病毒作基因治疗研究提供了实验基础。; 张桐王文亮侯云德杨新科颜子颖孙立连王伯云; 关键词：腺伴随病毒基因表达基因载体

组建重组腺病毒伴随病毒包装系统的自主复制载体及应用: 能用于组建腺病毒伴随病毒包装系统的自主复制型载体，它是由腺病毒伴随病毒基因组编码所有病毒蛋白基因的191-4484核苷酸序列元件EB病毒质粒型复制子及其反式作用因子、真核细胞抗性选择标志、和带大肠杆菌复制子和氨苄青霉素抗...; 颜子颖侯云德张桐王海林舒跃龙; 文献传递

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张桐