张瑛杰
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- Anti-hEGFR轻、重链共表达及高表达细胞株快速筛选被引量：2
- 2015年
- 为实现h EGFR全长抗体(anti-h EGFR)轻、重链共表达以及建立快速、高效筛选方法并获得共表达细胞株。采用分子克隆技术获得重链和轻链基因,将之连入peedual真核表达载体;经GS-Neo加压及流式细胞术筛选获得稳定表达细胞株;通过protein A亲和层析技术纯化出目标抗体;应用cck-8法、Annexin V/PI法以及q PCR技术检测anti-h EGFR对A431细胞增殖、凋亡影响。SDS-PAGE分析结果显示,纯化后抗体纯度为95.0%、分子质量约为150 ku。cck-8试验中不同浓度anti-h EGFR对A431细胞增殖均有极显著抑制作用,且与商品化Cetuximab效果相近;anti-h EGFR与Cetuximab均可诱导A431细胞产生凋亡,作用效果相近,均达极显著。全长抗体轻、重链的共表达,省去分别表达的重组过程,保证抗体天然结构;GS-Neo双加压结合流式筛选,实现阳性细胞株快速、高效分离;建立省时、高效抗体共表达平台,为抗体类药物真核构建及筛选提供新思路。
- 李德山刘春香姜媛媛刘铭瑶张瑛杰袁清艳郭笑辰任桂萍吴强李婷婷
- 抗IBDV鸡源重组抗体的构建及生物活性鉴定
- 尹杰超张瑛杰李天鹤周兵郭笑辰李德山
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒抗体Fab的表达及其中和活性的测定被引量：1
- 2015年
- 为表达抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体Fab并检测其中和活性,本研究将抗IBDV抗体的轻链(L)和重链片段(Fd)基因分别克隆于p ET-27b(+)载体中,并转化于大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。将L和Fd片段包涵体蛋白变性后等量混合于复性液中,制备Fab并对其进行活性鉴定。结果显示L和Fd蛋白相对分子质量大小分别为25 ku和28 ku。Western blot和ELISA检测结果表明,获得的抗体Fab大小约为50 ku,并且与VP2蛋白和不同病毒株均具有特异性结合能力。体外中和试验结果表明,获得的IBDV抗体Fab具有中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DF1)的感染。本实验获得的IBDV抗体Fab有望成为治疗IBD的候选生物制剂,为研制治疗IBD抗体制剂奠定了基础。
- 张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞荆燕任桂萍李德山
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒FAB抗体中和活性治疗性抗体
- 表达抗鸡传染性法氏囊病病毒重组鸡源抗体CHO细胞的悬浮驯化
- 2016年
- 为将贴壁生长的表达抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)重组鸡源抗体的CHO细胞株驯化为在无血清培养基中悬浮生长、高产的工程细胞株,本研究利用流式细胞仪筛选得到高产贴壁细胞株;以快速降低血清法进行驯化,使其适应悬浮培养,经过摇瓶无血清培养扩增,持续监测葡萄糖消耗情况,最终检测抗IBDV抗体的表达量。结果显示,悬浮驯化培养的CHO细胞能够在无血清培养基中稳定生长,生产周期短,接种密度为4.8×10~5cells/m L,无血清单细胞悬浮培养120 h后最大活细胞密度可达6.0×10~6 cells/m L,相同体积下抗体表达量较贴壁生长的高3倍,平均每个细胞每24 h表达量达到15 pg^20 pg。以上结果表明,贴壁生长的CHO细胞经过悬浮适应,不仅可以在无血清培养条件下快速生长,而且细胞对葡萄糖的利用率高,抗体表达量高。本研究筛选获得的细胞株节省了工艺生产中原料成本,操作方便,减少污染,易于放大,为工业化大批量生产奠定了基础。
- 曹宏雪郭笑辰李婷婷张胜奇张瑛杰刘鑫任桂萍尹杰超Lubna Muhi Rasoul荆燕李德山
- 关键词：传染性法氏囊病病毒CHO
- 利用细菌展示技术系统地筛选猪圆环病毒2型衣壳蛋白的线性抗原区域被引量：4
- 2016年
- 为了系统的筛选位于猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白上的抗原优势区域,本研究将缺少N端核定位信号的Cap蛋白基因分成7个连续重叠的DNA片段cap（1~7）,然后分别克隆于细菌展示载体APEx中,IPTG诱导重组蛋白片段表达于细菌内膜外侧,采用流式细胞仪检测各片段和抗PCV2 Cap蛋白的多克隆抗体的结合能力。结果表明,cap（1~7）均可以和抗该Cap蛋白的多抗结合,并且cap6的结合能力最强。将cap6片段进一步分为连续不重叠的3段（cap6-1、cap6-2、cap6-3）,以同样的方法鉴定抗原表位。结果显示,cap6-2与抗PCV2 Cap蛋白的多抗结合能力最强。此外,应用western blot的方法对细菌展示结果进行了验证。本研究利用细菌展示技术以及流式细胞仪快速的筛选了PCV2b Cap蛋白上的抗原优势区域,cap（1~7）片段均包含抗原表位,并且cap6是Cap蛋白上的抗原优势区域,cap6-2可能是抗原优势表位。
- 徐文娟张瑛杰李青青吴强于向纺郭笑辰尹杰超任桂萍李德山
- 关键词：猪圆环病毒CAP蛋白多克隆抗体抗原表位
- 长期注射成纤维细胞生长因子21对二乙基亚硝胺诱发肝癌的预防作用被引量：7
- 2016年
- 研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 d注射一次DEN,直至试验结束。给药结束后,取各组大鼠血清样本测定肝功,统计各组大鼠肝癌发生率,比较各组大鼠肝脏内氧化应激水平。结果表明,FGF21治疗组肝功显著低于模型对照组,接近正常水平。通过分析各组大鼠肝脏变化发现,FGF21治疗组大鼠肝癌发生率为18.1%,而注射生理盐水的模型对照组肝癌发生率为60.0%。FGF21治疗组肝脏内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量显著低于模型对照组,接近正常对照组;FGF21治疗组肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)活性与正常对照组持平,显著高于模型对照组。Real-time PCR结果显示,FGF21治疗组肝脏的抗氧化酶基因(G6pdh,GCL-c,Gpx-1,Sod2)表达水平显著高于模型对照组。结果表明,长期注射FGF21可通过抑制肝脏内氧化应激水平预防DEN诱导的肝癌。
- 李德山张瑛杰徐鹏飞袁清艳任桂萍刘铭瑶刘芝航
- 关键词：成纤维细胞生长因子21二乙基亚硝胺肝癌氧化应激
- 抗IBDV鸡源重组抗体治疗鸡传染性法氏囊病
- 建立稳定表达抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)鸡源重组全长抗体的细胞系,将其表达的抗IBDV鸡源重组全长抗体应用在治疗鸡传染性法氏囊病(IBD)中.将构建的鸡源重组全长抗体的真核表达质粒转染到哺乳动物细胞CHO-K1-SV...
- 郭笑辰张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞任桂萍李德山
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒单链抗体库的构建及其中和抗体的筛选被引量：4
- 2014年
- 为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的细菌展示单链抗体（scFv）库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA，采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列，插入含有（Gly4Ser）3 linker的pTlinker载体中，再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2 蛋白为诱饵，通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv，其氨基酸同源性为82.16 %～87.27 %。将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b（＋）中，构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv。将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达，该5株scFv相对分子质量均约为28 ku。此外，利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体，检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力。而且通过体外中和试验结果表明，仅有一株scFv具有病毒中和活性，可以有效阻断IBDV（B87 株）对鸡胚成纤维细胞（DF1）的感染。该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础。
- 周兵李天鹤李宁徐黎明郭茉马蕾张瑛杰叶贤龙赵景壮衣春霖韩晓辉丁良君李德山
- 关键词：IBDV单链抗体中和活性
- 抗IBDV鸡源重组抗体治疗鸡传染性法氏囊病
- 建立稳定表达抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)鸡源重组全长抗体的细胞系,将其表达的抗IBDV鸡源重组全长抗体应用在治疗鸡传染性法氏囊病(IBD)中。将构建的鸡源重组全长抗体的真核表达质粒转染到哺乳动物细胞CHO-K1-SV...
- 郭笑辰张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞任桂萍李德山
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用
- 本发明公布了两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用。发明提供了两种单链抗体（即scFv抗体），scFv抗体具有与IBDV结构蛋白2（VP2）蛋白及多种IBDV毒株特异性结合的能力，可...
- 尹杰超周兵李天鹤李德山张瑛杰张立夏
- 文献传递
