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张萍萍

作品数：3 被引量：9H指数：2
供职机构：天津医科大学第二医院更多>>
发文基金：天津市卫生局科技基金更多>>
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合作作者

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇原核表达
  • 2篇蛋白
  • 2篇蛋白质
  • 2篇蛋白质类
  • 2篇阴道
  • 2篇原核
  • 2篇原核表达纯化
  • 2篇融合蛋白
  • 2篇融合蛋白质类
  • 2篇念珠
  • 2篇念珠菌
  • 2篇念珠菌病
  • 2篇重组融合蛋白
  • 2篇重组融合蛋白...
  • 2篇外阴
  • 2篇外阴阴道
  • 2篇菌病
  • 2篇假丝酵母
  • 2篇假丝酵母菌
  • 2篇核表达

机构

  • 3篇天津医科大学
  • 1篇天津医科大学...

作者

  • 3篇霍彦
  • 3篇王芳
  • 3篇尹利荣
  • 3篇孙蓓
  • 3篇张萍萍
  • 1篇张钰娟
  • 1篇张步美

传媒

  • 2篇中华妇产科杂...
  • 1篇天津医药

年份

  • 2篇2016
  • 1篇2014
共 3 条 记 录，以下是 1-3
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排序方式：
原核表达纯化的抗菌肽LL-37重组蛋白对小鼠外阴阴道假丝酵母菌病的治疗作用被引量：3
2016年
目的：探讨原核表达纯化的抗菌肽LL-37重组蛋白对小鼠外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）的治疗作用。方法（1）雌性昆明小白鼠30只，经雌激素诱导并阴道内接种白假丝酵母菌悬液，构建VVC小鼠模型。建模成功后，按随机数字表法将小鼠随机分成实验组和对照组各15只，实验组小鼠阴道内灌注LL-37重组蛋白溶液30μl（100μg/ml，即3μg），每天1次，连续5 d；对照组小鼠阴道内灌注等量磷酸盐缓冲液（PBS）。（2）阴道用药结束后24 h，取两组小鼠的阴道灌洗液评估小鼠阴道内假丝酵母菌的载菌量[以菌落形成单位（CFU）表示]及假菌丝和芽生孢子的生成情况；摘取两组小鼠的阴道组织制备匀浆，ELISA法检测匀浆中免疫因子——白细胞介素10（IL-10）、γ干扰素（IFN-γ）的浓度。结果（1）本研究成功构建VVC小鼠模型，对照组小鼠阴道黏膜明显充血、水肿、阴道皱襞消失，实验组经LL-37重组蛋白治疗后阴道黏膜无明显水肿，阴道皱襞可见。（2）实验组小鼠阴道分泌物涂片中白假丝酵母菌的芽生孢子及假菌丝明显少于对照组。实验组小鼠阴道灌洗液中载菌量明显低于对照组[分别为（4.8±1.0）×10^4、（8.5±2.1）×10^4 CFU/ml，P=0.017]；阴道组织匀浆中IFN-γ浓度明显高于对照组[分别为（257±11）、（197±4）pg/ml，P=0.000]，而IL-10浓度明显低于对照组[分别为（287±15）、（379 ±17）pg/ml，P=0.000]，且IFN-γ/IL-10比值明显高于对照组（分别为0.892±0.008、0.496±0.013，P=0.000）。结论原核表达纯化的LL-37重组蛋白可以抑制VVC小鼠阴道内假丝酵母菌的生长，调节阴道内IFN-γ、IL-10的分泌水平，改善阴道局部免疫力，对小鼠VVC有明显的治疗作用。
王芳霍彦尹利荣孙蓓张萍萍
关键词：干扰素ΓINTERLEUKIN-10
人源性防御素HD-5的原核表达及抗真菌作用的初步研究被引量：1
2014年
目的构建pQE-30Xa/HD-5原核表达载体,纯化重组蛋白并进行抗真菌活性的初步鉴定。方法以pcDNA3.1(+)/HD-5为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增编码HD-5成熟肽的基因。构建pQE-30Xa/HD-5重组表达载体,并对重组质粒进行酶切、基因序列分析。将鉴定正确的质粒转化入大肠杆菌M15后进行异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。通过镍柱亲和层析纯化蛋白并进行蛋白复性,蛋白免疫印迹(Western blot)鉴定纯化产物。以KB纸片法初步验证纯化获得的重组蛋白对白色假丝酵母菌的抑菌活性。结果成功克隆了HD-5基因并构建了重组质粒pQE-30Xa/HD-5。重组质粒在大肠杆菌M15中诱导表达出HD-5融合蛋白;Western blot分析结果显示纯化后的融合蛋白与目的蛋白相符;KB纸片法证实纯化后的融合蛋白对白色假丝酵母菌具有一定的抑菌活性。结论成功构建HD-5原核表达载体,经诱导表达后纯化获得具有良好抑菌活性的HD-5融合蛋白。
张萍萍尹利荣王芳孙蓓霍彦
关键词：重组融合蛋白质类防御素-5原核表达
抗菌肽LL-37的原核表达纯化及对假丝酵母菌的抑制作用被引量：5
2016年
目的研究抗菌肽LL-37通过促进阴道上皮细胞免疫因子的分泌抑制假丝酵母菌的作用。方法（1）构建LL-37原核表达载体pET—Duet／LL-37并在大肠埃希菌M15中诱导表达。对所表达的LL-37融合蛋白进行纯化及鉴定，并用K-B纸片法初步验证LL-37纯化蛋白的抗真菌活性。（2）纯化的LL-37蛋白加入到与假丝酵母菌共培养的人阴道上皮细胞[即外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）阴道上皮细胞模型]中，并分为实验组与对照组（不加LL-37纯化蛋白），采用葡萄糖消耗法观察抑菌效果[以吸光度（A）值表示]。采用ELISA方法检测不同时间点干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）水平及IFN-γ／IL-10比值的变化。结果（1）诱导表达的LL-37融合蛋白的浓度为433．92μg／ml，纯度达96％。K-B纸片法初步证实了LL-37纯化蛋白具有一定的抗真菌活性。（2）LL-37重组蛋白可明显抑制假丝酵母菌生长，实验组各时间点A值明显高于对照组（分别为：12h：3．008±0．003、2．967±0．003；24h：2．941±0．003、2．601±0．003；48h：2．893±0．004、2．409±0．003），分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．01），并且随时间进展的下降趋势较对照组缓慢。两组IFN-γ、IL-10分泌水平均呈现先升后降的趋势，于24h达高峰[实验组分别为：（104．00±1．07）、（108．4±0．7）pg／ml；对照组分别为：（85．17±0．28）、（151．6±0．6）pg／m1]。各时间点比较，实验组IFN-γ水平于24h时明显高于对照组（P〈0．01）；各时间点的IL-10水平均低于对照组（P〈0．01），且IFN-γ／IL-10比值均高于对照组（P〈0．01）。结论（1）LL-37重组蛋白对假丝酵母菌具有明显的抑制作用。（2）LL-37重组蛋白通过影响IFN-γ、IL-10等免疫因子的分泌，调整阴道上皮细胞局部免疫，增强抵抗假丝酵母菌感染的能力。
霍彦王芳孙蓓尹利荣张萍萍张钰娟张步美
关键词：重组融合蛋白质类原核表达
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