徐浩文
- 作品数：16 被引量：71H指数：5
- 供职机构：河南医科大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脂多糖诱导帕金森病模型中炎症因子的机制被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨脂多糖诱导帕金森病大鼠模型过程中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶等细胞毒性因子的作用。方法:实验于2003-07/2004-07在中山大学附属第一医院神经科实验室进行,取35只雄性SD大鼠随机分为4组:7,14,30d组,每组10只,对照组5只。对照组不做任何处理,3个不同时间点组立体定位注射脂多糖(20μg,质量浓度5g/L)入大鼠黑质。于注射后不同时间点观察大鼠行为学改变,并采用免疫组织化学及原位杂交等方法动态观察酪氨酸羟化酶神经元、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶等的表达。结果:29只动物进入结果分析。①行为学改变:脂多糖术后7d仅表现为轻度的旋转,每30min旋转(85±13)r,至14d时旋转次数增多,每30min旋转(121±17)r,30d时达高峰,每30min旋转(295±21)r。②7,14,30d组术侧黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数量较正常组明显下降(P<0.001),30d组下降达高峰;正常组仅有少量或无肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶的表达,术后7d各阳性神经元表达较正常组显著增多(P<0.05),术后14d表达至高峰,术后30d较14d明显下降但仍高于正常对照组,其中诱导型一氧化氮合酶阳性神经元表达于术后30d仍维持较高水平。③各组均检测到酪氨酸羟化酶mRNA表达,7,14。
- 叶钦勇徐评议刘焯霖徐浩文朱蔚文谢安木杨海华
- 关键词：帕金森病脂多糖类酪氨酸羟化酶白细胞介素1Β一氧化氮合酶
- 两种帕金森病模型黑质一氧化氮合酶mRNA的表达及灵芝孢子油的调控作用被引量：4
- 2007年
- 目的:对比研究1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)小鼠模型和6-羟基多巴(6-OHDA)大鼠模型黑质区诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平的变化,探讨灵芝孢子油对两种帕金森病模型黑质区iNOSmRNA表达的调节作用。方法:分别建立MPTP小鼠模型,C57BL小鼠分为MPTP组、灵芝孢子油+MPTP组、正常对照组。MPTP组皮下注射MPTP共6d,灵芝孢子油+MPTP组在注射MPTP前2d开始鼻饲灵芝孢子油,连续8d,MPTP组喂食生理盐水做对照,2周后断头取中脑腹侧组织。6-OHDA大鼠模型,SD大鼠分为6-OHDA组、灵芝孢子油+6-OHDA组、正常对照组。用脑部立体定向法将6-OHDA注射到SD大鼠一侧黑质致密部建立大鼠帕金森病模型,灵芝孢子油组在造模前3d开始给药,连续10d。6-OHDA组喂食生理盐水做对照。造模后第13天取各组大鼠中脑腹侧组织,用荧光半定量RT-PCR法检测各组中脑腹侧iNOS mRNA表达量。结果:MPTP模型中,MPTP组的iNOS mRNA表达量比正常对照组增高,灵芝孢子油组iNOS mRNA表达量比正常对照组减少,组间两两比较差异有显著性。6-OHDA模型中,6-OHDA组的iNOS mRNA表达量比正常对照组略增多,灵芝孢子油组iNOS mRNA的表达量无明显改变。两处理组组间比较无明显差异。结论:MPTP模型黑质区iNOS mRNA表达量明显增高,提示iNOS mRNA的过度表达可能与MPTP的发病机制有关,灵芝孢子油能有效下调iNOS mRNA的高表达。
- 朱蔚文刘焯霖徐浩文陈玲
- 关键词：帕金森病1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶羟多巴胺一氧化氮合酶灵芝孢子油
- 美满霉素对脂多糖诱导帕金森病模型多巴胺能神经元保护作用的研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨美满霉素(Mino)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(Mic)激活的抑制作用和对黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法 20只雄性 SD 大鼠随机分为单纯 LPS 干预组和 LPS+Mino 干预组,并设5只作为生理盐水注射对照组,于不同时间点观察大鼠行为学改变,并采用免疫组织化学、原位杂交、Western-blot 等方法观察 Mic 的激活情况以及酪氨酸羟化酶(TH)神经元、mRNA、蛋白的表达水平。结果 LPS+Mino 干预组在 LPS 诱导后7、14 d 的旋转次数均较单纯 LPS 干预组明显减少;两组均以激活型 Mic 为主,LPS+Mino 组"阿米巴样"Mic 数目较单纯 LPS 组明显减少,尚存有少许"分支样"Mic;LPS 术后2组术侧中脑 OX-42蛋白水平较生理盐水注射对照组均明显增高,LPS+Mino 组(0.91±0.04)增加水平明显低于单纯 LPS 组(1.03±0.03,P<0.01);2组术侧中脑 TH阳性神经元数量、mRNA、蛋白水平均较生理盐水注射对照组明显下降,单纯 LPS 组(21.5±4.9,39.9±7.0,0.42±0.03)下降水平显著高于 LPS+Mino 组(53.4±8.4,65.1±9.1,0.63±0.04;P<0.01)。结论 Mino 的干预可显著抑制 LPS 诱导的 Mic 激活,减轻 LPS 对黑质多巴胺能神经元的毒性作用,并延缓 PD 模型的病情进展。
- 叶钦勇杨海华徐评议刘焯霖徐浩文朱蔚文谢安木
- 关键词：脂多糖类神经保护药小神经胶质细胞帕金森病
- 灵芝孢子粉对帕金森病模型鼠黑质酪氨酸羟化酶的影响被引量：16
- 2005年
- 目的研究灵芝孢子对帕金森病(PD)模型鼠脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)的影响,以探讨灵芝孢子对PD的脑保护作用。方法120只SD大鼠随机分为三组,PD组:立体定向注入6-羟多巴(6-OHDA),术后1周腹腔注入阿朴吗啡观察30min大鼠旋转的次数,连续至第四周每分钟大于6次者为成功的PD模型;灵芝孢子组:先用灵芝孢子粉灌胃3d,立体定向注入6-OHDA,继续灌胃4周,直至处死;正常对照组:立体定向注入脑黑质抗坏血酸生理盐水。处死后制作快速冰冻切片用免疫组化检测TH阳性细胞数,用原位杂交法检测THmRNA的阳性细胞数,用Westernblot检测TH的半定量变化,用高效液相色谱检测多巴胺水平的变化。结果免疫组化显示灵芝孢子组术侧鼠脑黑质TH阳性神经元数量为99·7±13·6,PD组为51·0±13·5,灵芝孢子组较PD组显著升高(P<0·05);原位杂交显示灵芝孢子组术侧鼠脑黑质THmRNA阳性神经元数量为180·3±24·3,PD组为72·7±15·0,灵芝孢子组较PD组显著升高(P<0·01);Westernblot检测显示TH蛋白灵芝孢子组较PD组显著增加;高效液相色谱检测术侧鼠脑黑质多巴胺(DA)水平灵芝孢子组为(0·7±0·3)ng/mg蛋白,PD组为(0·4±0·1)ng/mg蛋白,灵芝孢子组较PD组显著升高(P<0·05)。结论灵芝孢子能够提高TH的表达,并提高鼠脑黑质DA的水平,推测对6-OHDA诱导的PD可能有脑保护作用。
- 谢安木刘焯霖朱蔚文叶钦勇徐浩文
- 关键词：灵芝孢子粉帕金森病模型鼠BLOT检测神经元数量脑黑质
- 6-羟基多巴大鼠中脑腹侧部Bcl-2、Bax mRNA表达及灵芝孢子油的调节作用被引量：5
- 2007年
- 目的研究6-羟基多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型中脑腹侧部凋亡调控基因的表达情况,探讨灵芝孢子油对6-OHDA引起的黑质区神经元凋亡的调节作用。方法SD大鼠被分为3组,组1:6-OHDA组、组2:灵芝孢子油+6-OHDA组、组3:正常对照组。通过脑部立体定向法将6-OHDA注射到组1和组2大鼠一侧黑质致密部建立大鼠PD模型。组2在造模前3天开始喂食灵芝孢子油500mg/(kg.d),连续10天,组1喂食生理盐水做对照。造模后10天取中脑腹侧组织,用荧光RT-PCR法检测Bcl-2、BaxmRNA表达量,Westernblot法检测Bcl-2蛋白含量。结果①半定量RT-PCR结果显示组1BaxmRNA的表达量比组3增多,而Bcl-2mRNA的表达量无明显变化,组2BaxmRNA的表达量比组3下降、Bcl-2mRNA的表达量增多,组1组2间比较有差异。②Western结果显示组2BcL-2蛋白相对含量比组1和组3增高,组组间比较差异显著。结论6-OHDA大鼠中脑腹侧部Bax表达增强,灵芝孢子油能有效地降低其表达,并使Bcl-2表达增加。
- 朱蔚文刘焯霖徐浩文叶钦勇陈玲
- 关键词：灵芝孢子油BCL-2BAX
- 灵芝孢子油对MPTP处理小鼠行为学及黑质区病理变化的影响被引量：21
- 2005年
- 目的研究灵芝孢子油对MPTP帕金森病(PD)小鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨灵芝孢子油治疗帕金森病的可能性。方法C57BL小鼠分为正常对照组、MPTP组、灵芝孢子油+MPTP组。MPTP组皮下注射MPTP(30mg/kg×6d)及喂食生理盐水,灵芝孢子油+MPTP组在注射MPTP前2d开始鼻饲灵芝孢子油1.5g/kg·d,连续8d。2周后用高效液相色谱法检测小鼠纹状体多巴胺(DA)及其代谢物含量,免疫组织化学法检测SNpc酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,Westernblot法对中脑TH蛋白进行半定量测定。结果(1)爬杆实验中肢体出现刻板抖动行为的小鼠数目比例灵芝孢子油+MPTP组较MPTP组显著减少(12.5%vs68.7%)。(2)DA及其代谢物含量在两组间有差异,灵芝孢子油+MPTP组各项指标均高于MPTP组。(3)灵芝孢子油+MPTP组小鼠在SNpc的TH阳性细胞、中脑TH蛋白含量均较MPTP组明显增多。结论灵芝孢子油能明显改善MPTP小鼠模型行为学,增加纹状体DA及其代谢物含量,减少黑质DA能神经元的损伤,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用。
- 朱蔚文刘焯霖徐浩文褚文政叶钦勇谢安木陈玲黎锦如
- 关键词：灵芝孢子油MPTP多巴胺酪氨酸羟化酶
- 脂多糖诱导小胶质细胞激活与多巴胺能神经元毒性作用关系的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(Mic)激活规律与黑质多巴胺(DA)能神经元变性的关系。方法分别于LPS注入大鼠脑黑质后7d、14d、30d观察大鼠行为学改变,并采用免疫组织化学及原位杂交等方法观察Mic的激活情况以及酪氨酸羟化酶(TH)神经元的表达。结果行为学改变表现为7d仅引起轻度的旋转行为〔(85±13)圈/30min〕,至14d时旋转次数增多〔(121±17)圈/30min〕,30d时达高峰〔(295±21)圈/30min〕;7dMic部分激活,14d时大部分激活,30d时Mic已全部活化;TH阳性细胞数7d时轻度减少〔(135.22±12.11)PU〕,14d时进一步减少〔(21.54±4.89)PU〕,30d时已罕见〔(11.31±2.56)PU〕。THmRNA的表达规律与其一致,分别为(60.69±8.47)PU、(39.87±7.03)PU、(14.23±3.51)PU。结论Mic的激活是构成PD炎症损伤机制的重要环节。
- 叶钦勇徐评议刘焯霖徐浩文朱蔚文谢安木杨海华
- 关键词：小胶质细胞激活脂多糖诱导行为学改变神经元变性脑黑质
- 灵芝孢子油干预治疗6-羟多巴帕金森病大鼠模型的实验研究被引量：11
- 2005年
- 【目的】研究灵芝孢子油对6-羟多巴(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型行为学及病理改变的影响,探讨该药对黑质多巴胺能神经元的保护作用。【方法】100只SD大鼠随机分为正常对照组20只、6-OHDA组40只、灵芝孢子油+6-OHDA组40只。通过脑部立体定向法将6-OHDA注射到SD大鼠一侧黑质致密部建立6-OHDA大鼠PD模型,灵芝孢子油+6-OHDA组在造模前3d开始给灵芝孢子油每天500mg/kg,连续10d。6-OHDA组喂食生理盐水做对照。造模后每周给予阿朴吗啡观察大鼠旋转行为的变化,4周后用高效液相色谱法检测大鼠纹状体多巴胺及其代谢物含量,免疫组织化学法检测黑质致密部酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量,westernblot法对TH蛋白进行半定量测定。【结果】①灵芝孢子油+6-OHDA组出现旋转行为的大鼠比例为10%,6-OHDA组为45%,两组比较有显著性差异。②纹状体多巴胺及其代谢物含量在两组间存在差异,多巴胺手术侧含量/手术对侧含量在灵芝孢子油+6-OHDA组为(60.12±7.5)%,在6-OHDA组为(38.58±7.26)%。③在黑质致密带区灵芝孢子油+6-OHDA组的TH免疫阳性细胞及TH蛋白表达量均较6-OHDA组显著增多。【结论】灵芝孢子油能明显改善6-OHDA大鼠模型行为学,增加纹状体多巴胺及其代谢物含量并提高黑质多巴胺能神经元的残存率,提示灵芝孢子油可能具有减缓PD病变进程的神经保护作用。
- 朱蔚文刘焯霖徐浩文谢安木叶钦勇陈玲
- 关键词：灵芝孢子油干预治疗纹状体多巴胺模型行为学黑质致密部免疫阳性细胞
- 过表达Nurr1基因的骨髓间充质干细胞的诱导及移植治疗帕金森病的研究被引量：4
- 2005年
- 目的:探讨Nurr1基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,rMSCs)脑内移植对帕金森病(parkinsondiseasePD)大鼠的治疗作用。方法:用脂质体转染法转染PcDNA3.1(+)-Nurr1入rMSCs并稳定表达.然后移植大鼠PD模型纹状体内;观察行为学变化并用免疫组化、RT-PCR等方法检测移植细胞的Nurr1、DAT和TH表达;利用高效液相色谱检测多巴胺(DA)、二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量。结果:Nurr1-rMSCs组和rMSCs组移植治疗8周内PD大鼠旋转行为均得到一定的改善(P<0.05);移植后2～4周Nurr1-rMSCs组较rMSCs组改善程度更为显著(P<0.05),但第8周时二组行为学差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化显示Nurr1-rMSCs能够稳定表达Nurr1且少量细胞表达DAT,但未发现TH阳性细胞。而rMSCs组和对照组则均未发现有Nurr1、DAT、TH表达;RT-PCR检测显示移植后2～8周,Nurr1-rMSCs组移植区有Nurr1和DATmRNA表达,但未发现THmRNA表达;两治疗组DA、DOPAC和HVA含量均较对照组增高(P<0.05)。结论:Nurr1基因转染大鼠骨髓间充质干细胞移植大鼠纹状体可以在一定时期内存活并有效表达,同时可提高纹状体DA含量,改善模型鼠症状,为治疗PD的研究提供了实验依据。
- 徐浩文朱蔚文叶钦勇陈玲刘焯霖徐评议
- 关键词：NURR1骨髓间充质干细胞基因治疗帕金森病
- 经Nurr1基因转染的骨髓间充质干细胞移植对帕金森病大鼠旋转行为及纹状体多种神经因子的影响被引量：6
- 2005年
- 目的:观察对中脑腹侧多巴胺能神经元分化、成熟及存活起重要作用的Nurr1基因修饰大鼠骨髓间充质干细胞脑内移植后,对帕金森病大鼠旋转行为及纹状体多巴胺、二羟苯乙酸及高香草酸含量比值的影响。方法:实验于2003-08/2004-12在中山大学附属第一医院神经病学国家重点实验室进行。取SD雄性大鼠,右侧中脑黑质致密区注入6-羟基多巴(2g/L)3μL制备帕金森病模型,4周后将69只成功帕金森病模型随机分为3组:①对照组24只:右侧纹状体尾状核头部注入生理盐水4.5μL。②骨髓间充质干细胞组24只:相同部位注入培养纯化的骨髓间充质干细胞4.5μL。③转Nurr1基因骨髓间充质干细胞组21只:用脂质体转染法转染PcDNA3.1(+)-Nurr1入大鼠骨髓间充质干细胞并稳定表达,然后移植入模型大鼠脑内,部位和剂量与其他两组相同。观察各组大鼠旋转行为学变化,并用免疫组化、反转录-聚合酶链反应等方法检测移植细胞的Nurr1,DAT和酪氨酸羟化酶表达;利用高效液相色谱检测大鼠脑内多巴胺、二羟苯乙酸和高香草酸含量。结果:59只大鼠进入结果分析。①旋转行为学变化:与对照组相比,移植前1周无明显差异(P>0.05),移植后2～8周,另2组大鼠旋转行为明显改善(P<0.05);转Nurr1基因骨髓间充质干细胞组在移植后2～4周较骨髓间充质干细胞组轻(P<0.05),但至8周时两组无差异(P>0.05)。②Nurr1及DAT和酪氨酸羟化酶阳性表达:免疫组化结果显示转Nurr1基因骨髓间充质干细胞组移植区能够稳定表达Nurr1且少量细胞表达DAT,但未发现酪氨酸羟化酶阳性细胞,其他两组移植区未发现阳性细胞。③Nurr1及DAT和酪氨酸羟化酶mRNA表达:移植后2～8周,聚合酶链反应产物经电泳、3组大鼠术侧纹状体染色后均可见1030bp片段(DAT),241bp片段(Nurr1),438bp片段(β-actin),但未发现酪氨酸羟化酶条带(647bp)。④脑内纹状体多巴胺、二羟苯乙酸�
- 徐浩文朱蔚文叶钦勇刘焯霖徐评议黎锦如
- 关键词：干细胞基因疗法帕金森病
