李久宽
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家肉鸡产业技术体系建设专项国家自然科学基金哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的原核表达及兔抗血清的制备被引量：1
- 2011年
- 以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP1基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切处理后与经相同酶切处理的pET-30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及测序鉴定正确的阳性重组子转化BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白His-VP1经IPTG诱导表达后主要以包涵体形式存在。Western blot检测到约97ku的目的蛋白能够与特异性的VP1单克隆抗体反应。将纯化的目的蛋白免疫新西兰白兔后获得了抗VP1蛋白的血清。该血清能够与重组杆状病毒rBacGxVP1感染的sf9细胞发生特异性反应,而且其ELISA抗体效价达到1∶25600。鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的表达与兔抗血清的制备为病毒的检测及VP1功能的研究提供了有效工具。
- 康忠惠王永强王琦李久宽秦立廷高玉龙高宏雷祁小乐林欢王笑梅许修宏
- 关键词：鸡传染性法氏囊病超强毒VP1原核表达
- 鸡传染性贫血病毒LAMP诊断方法的建立与检测
- 鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia，CIA)是由鸡传染性贫血病毒(chicken anemiavirus，CAV)引起的一种危害雏鸡的免疫抑制性疾病。1日龄雏鸡最易感，雏鸡感染的死亡率为1...
- 李久宽
- 关键词：鸡传染性贫血病毒检测试剂
- 文献传递
- 蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：2
- 2011年
- 为分析我国J亚群禽白血病病毒(ALV-J)蛋鸡分离株的进化关系,本研究将山东省某鸡场采集的蛋鸡病料样品接种DF-1细胞系,利用ELISA群特异性抗原检测以及亚群特异性间接免疫荧光方法,分离鉴定得到一株ALV-J,命名为SD1009,并对其进行全基因组测序,将该序列与其他ALV-J代表性病毒株序列进行比较。结果表明:SD1009分离株的gag和pol基因相对保守,与各参考病毒株的同源性为95%～99%,env基因的同源性为91%～95%;在其5'UTR中出现了连续19 bp的插入突变,与TW-3577、SDAU09C3、JS09GY6、JS09GY3蛋鸡分离株的5'UTR基本一致,提示19 bp的插入现象可能是近年来蛋鸡ALV-J的进化趋势;此外,其3'UTR的rTM和DR区出现部分缺失现象,该缺失部分也可能与ALV-J进化相关。
- 王琦王永强康忠惠高玉龙潘伟李久宽秦立廷祁小乐高宏雷王笑梅
- 关键词：J亚群禽白血病病毒蛋鸡全基因组序列分析
- 我国部分地区种鸡禽肺病毒感染的血清学调查被引量：12
- 2012年
- 禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒（Turky rhinotracheitis virus,TRTV）[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是鸡肿头综合征的因素之一。
- 贠炳岭刘在斯吴关李久宽秦立廷祁小乐王永强高宏雷高玉龙王笑梅
- 关键词：血清学调查种鸡鼻气管炎病毒鸡呼吸道疾病鸡肿头综合征产蛋量下降
- 鸡传染性法氏囊病超强毒Gx与疫苗毒Gt在鸡体内的复制研究被引量：1
- 2012年
- 本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行病毒滴度的测定;再利用荧光定量RT-PCR对两类毒株进行病毒量的校准。以相同量的病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒。攻毒试验表明超强毒Gx能造成47.5%的死亡,法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官均严重损伤;而疫苗毒Gt无致死,且未能造成任何病理可见的损伤。病毒的体内复制情况表明超强毒相对于疫苗毒复制更为迅速,病毒载量更高。
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- 关键词：传染性法氏囊病病毒超强毒
- 蛋鸡J亚群禽白血病病毒分离株SD1009株感染性克隆的构建与病毒拯救被引量：2
- 2011年
- 为探究蛋鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,从山东省某鸡场送检的蛋鸡病料中分离鉴定出1株ALV-J,命名为SD1009株,采用PCR方法分3段扩增出SD1009株的前病毒cDNA,PCR产物经克隆酶切后顺次连接,获得1个含有完整ALV-J前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBW-SD1009。全长测序及序列比对分析发现,近年来分离的ALV-J都存在缺失部分rTM和DR区的序列,缺失长度为205bp。通过外源基因嵌合的方式,将205bp嵌合进入,又获得了1个前病毒cDNA的重组质粒,命名为pBW-SD1009A205,将pBW-SD1009和pBW-SD1009A205分别转染DF1细胞,通过间接免疫荧光试验,禽白血病抗原试剂盒检测,反转录酶试剂盒检验,表明拯救出了2株病毒,分别命名为rSD1009和rSD1009A205。本研究成功构建了蛋鸡ALV-J的感染性克隆,并在序列分析的基础上,又构建了第2株补全缺失序列的感染性克隆,结果表明缺失部分rTM和DR区的序列,对病毒的拯救以及病毒的复制动力学无显著影响。
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- 关键词：J亚群禽白血病病毒感染性分子克隆病毒拯救
