杨绍青
- 作品数：114 被引量：257H指数：8
- 供职机构：中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程医药卫生更多>>
- 基于模块优化强化大肠杆菌合成乳糖-N-新四糖的研究
- 2024年
- 乳糖-N-新四糖(lacto-N-neotetraose,LNnT)作为人乳寡糖核心组分之一,在婴幼儿成长发育过程中发挥着重要作用。为寻找高效的LNnT生物合成方法,探究模块优化对大肠杆菌合成LNnT产量的影响,以大肠杆菌BL21(DE3)ΔlacZ为出发菌株,根据合成路径中的关键代谢物质将LNnT合成路径划分为:外源酶所在路径的模块A,UDP-半乳糖合成路径的模块B和UDP-N-乙酰氨基葡萄糖合成路径的模块C。利用不同拷贝数质粒初步优化模块A、B和C的表达强度,当大肠杆菌BL21(DE3)ΔlacZ共表达重组质粒pRSF-lgtA-A.act和pET-galE时,LNnT产量最高,达0.87 g/L。通过CRISPR/Cas9技术敲除setA和ugd强化模块A和模块B,获得的重组菌株E20合成LNnT产量达1.16 g/L。摇瓶发酵条件优化后,重组菌株E20合成LNnT产量达1.28 g/L。在5 L发酵罐中,LNnT分批补料发酵产量达15.53 g/L,发酵过程最高生产强度为0.43 g/(L·h)。模块优化强化大肠杆菌高效合成LNnT有望为人乳寡糖的高效生物合成提供理论基础,进而推进婴幼儿配方食品产业的革新。
- 刘丹梁山泉闫巧娟杨绍青李树森江正强
- 关键词：大肠杆菌生物合成
- 地杆菌α-L-岩藻糖苷酶的分子改造及其在合成2’-岩藻糖基乳糖中的应用被引量：6
- 2021年
- 对地杆菌α-L-岩藻糖苷酶进行分子改造,以提高其酶法合成2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)的转化效率。利用易错聚合酶链式反应构建了α-L-岩藻糖苷酶的突变体文库,筛选得到一个合成2’-FL转化率提高的突变酶(mPbFuc29A1)。酶学性质研究结果表明mPbFuc29A1的最适pH值和温度分别为pH 5.0和40℃,最适温度较野生型PbFuc29A1提高了5℃;突变酶水解2’-FL的比活力提高到3倍,但是水解4-硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4-nitrophenyl-α-L-fucopyranoside,pNP-FUC)和3’-岩藻糖基乳糖(3’-fucosyllactose,3’-FL)的比活力分别降低了22.8%和52.5%。以pNP-FUC和乳糖为底物,采用mPbFuc29A1酶法催化合成2’-FL和3’-FL,转化率分别为23.6%和56.4%,其中2’-FL的转化率较PbFuc29A1提高了9.1%。通过序列及定点突变分析发现mPbFuc29A1的氨基酸序列中有2个位点发生突变(Asp21Val和Glu266Lys),其中位于loop区的Glu266Lys可能是mPbFuc29A1底物特异性和转糖苷产物组成发生改变的关键。优良的酶学特性使mPbFuc29A1在2’-FL合成中具有较大的应用潜力。
- 史然张登娅谷懿寰江正强杨绍青
- 关键词：Α-L-岩藻糖苷酶定向进化底物特异性
- 一种类芽孢杆菌L‑天冬酰胺酶及其编码基因和应用
- 本发明涉及一种类芽孢杆菌L‑天冬酰胺酶及其编码基因与应用。该L‑天冬酰胺酶为类芽孢杆菌来源的Rhizobium etli型L‑天冬酰胺酶，具体为序列表序列2或4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明提供的蛋白质作为L‑天冬...
- 江正强杨绍青史然刘瑜穆青
- 一种产壳聚糖酶的重组菌的构建方法及其应用
- 本发明公开一种产壳聚糖酶的重组菌的构建方法及其应用。本发明将枯草芽孢杆菌壳聚糖酶基因和透明颤菌血红蛋白基因在毕赤酵母中共表达，重组菌株经高密度发酵策略高效制备壳聚糖酶。利用该方法制备壳聚糖酶的酶活力高达50000U/mL...
- 江正强马帅杨绍青刘翊昊闫巧娟
- 解淀粉芽孢杆菌发酵的3种水豆豉的营养成分、溶栓及抗氧化活性被引量：3
- 2021年
- 用产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌CAUNDJ118制备黄豆、黑豆和双青豆3种水豆豉,对其营养成分、溶栓及抗氧化活性进行研究,结果表明:发酵后,3种水豆豉的总酚、总异黄酮类物质含量增加1.7~2.5倍,多肽及氨基酸态氮含量增加3.9~11.6倍。纤溶活性达86.5~102.5 FU/g干重,抗凝血活性IC50为0.27~0.36 mg/mL。DPPH自由基清除能力、ABTS清除能力和FRAP还原能力分别为6.8~15.5μmol TE/g干重,41.4~46.6μmol TE/g干重,8.7~13.6μmol Fe2+相当量/g干重。解淀粉芽孢杆菌CAUNDJ118发酵的3种水豆豉中,黑豆水豆豉具有最高的营养物质含量、溶栓及抗氧化活性,口感良好,豉香浓郁,具备开发成改善心脑血管疾病用功能食品的潜力。
- 骆珅刘宏杨绍青闫巧娟吴珊江正强
- 关键词：水豆豉抗氧化活性解淀粉芽孢杆菌
- 一种β-葡萄糖苷酶及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种β-葡萄糖苷酶及其编码基因与应用。本发明提供的β-葡萄糖苷酶是如下1)或2)的蛋白质：1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)将序列表中序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和...
- 江正强华承伟杨绍青闫巧娟李一男
- 黄杆菌褐藻胶裂解酶的高效表达及其在褐藻寡糖制备中的应用被引量：8
- 2021年
- 研究黄杆菌褐藻胶裂解酶基因(rFlAlyA)在枯草芽孢杆菌中的高效表达,高密度发酵48 h最高酶活力为2550 U/mL,蛋白质量浓度达4.5 mg/mL。经(NH4)2SO4沉淀和SP强阳离子交换柱纯化后得到电泳级纯酶,分子质量约为30 kDa。褐藻胶裂解酶rFlAlyA最适pH值为7.5,在pH 4.0~11.0范围内可保持80%以上酶活力;最适温度为50℃,在50℃及以下可保持80%以上酶活力。底物特异性分析表明,rFlAlyA特异性降解聚甘露糖醛酸片段,最短链底物为甘露糖醛酸三糖。rFlAlyA在最适条件下酶解褐藻酸钠4 h后还原糖质量浓度达33 mg/mL,底物转化率为70.1%,电喷雾电离-质谱分析酶解产物的聚合度(degree of polymerization,DP)为1~8,离子色谱分析显示DP=3时相对含量最高,为34.0%。结果表明,经枯草芽孢杆菌高效表达的rFlAlyA可用于制备褐藻寡糖。
- 江君刘军杨绍青马帅闫巧娟江正强
- 关键词：褐藻胶裂解酶黄杆菌枯草芽孢杆菌高密度发酵
- 一种制备α-淀粉酶的方法及其专用菌株与相关蛋白
- 本发明公开了一种制备α-淀粉酶的方法及其专用菌株与相关蛋白。本发明提供的菌株樟绒枝霉（Malbranchea cinnamomea）S168，其保藏号为CGMCC NO.6022。本发明还提供了樟绒枝霉（Malbranc...
- 江正强韩鹏杨绍青闫巧娟周鹏
- 文献传递
- 伞枝犁头霉发酵蔗糖产α-酮戊二酸条件的优化被引量：2
- 2013年
- 研究伞枝犁头霉D1利用蔗糖生产α-酮戊二酸的发酵条件优化。结果表明:1)最佳发酵培养基组成为:蔗糖40g/L,NaNO31g/L,KH2PO41.36g/L,MgSO4.7H2O 0.2g/L,FeSO4.7H2O 0.01g/L,NaCl 2g/L,玉米浆0.5g/L,CaCO340g/L,叶酸2g/L。2)最佳培养条件为:250mL摇瓶装液25%,培养温度37℃和转速200r/min。在此条件下培养84h,伞枝犁头霉产α-酮戊二酸量最大达14.0g/L,产酸速率为0.17g/(L.h),对蔗糖的转化率为34.9%。伞枝犁头霉D1能够有效利用蔗糖发酵产α-酮戊二酸,具有较好的科研价值和工业应用前景。
- 闫巧娟徐忠义蔡威杨绍青张建志江正强
- 关键词：蔗糖发酵条件
- 米黑根毛霉菌株及其在制备β-葡聚糖酶和凝乳酶中的应用
- 本发明公开了一种米黑根毛霉菌株及其在制备β-葡聚糖酶和凝乳酶中的应用。本发明提供的米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)CAU432，其保藏编号为CGMCC No.4967。本发明所提供的菌株米黑根毛霉CAU4...
- 江正强唐艳斌崔健闫巧娟杨绍青
- 文献传递
