杨芬
- 作品数：8 被引量：49H指数：3
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 成人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛素分泌样细胞及其鉴定被引量：2
- 2008年
- 背景:体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样细胞,目前尚无成熟的鉴定方案。转基因诱导要求条件高,程序复杂,化学诱导剂诱导为现阶段较多采用的一类方法。目的:探讨成人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞的条件。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-01/10在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:骨髓来源于青岛大学医学院附属医院内分泌科行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者,对治疗及实验均签署知情同意书。表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子为Peprotech Asia公司产品,B27添加剂为Gibco公司产品,尼克酰胺、2-巯基乙醇、谷氨酰胺、双硫踪为Sigma公司产品。方法:采用Percoll法分离成人骨髓间充质干细胞,加入含体积分数为0.1胎牛血清的LG-DMEM进行培养,胰蛋白酶消化传代。取第3～5代细胞,按1×108L-1密度接种,分3阶段诱导:第1阶段加入含2-巯基乙醇、谷氨酰胺的HG-DMEM,培养2d;第2阶段加入含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27添加剂、谷氨酰胺的HG-DMEM,培养6d;第3阶段加入含尼克酰胺、2-巯基乙醇的HG-DMEM,培养6d。对照组采用单纯的HG-DMEM进行培养。主要观察指标:相差显微镜下观察细胞形态变化,诱导第2阶段行免疫荧光鉴定PDX-1基因的表达,诱导第3阶段行双硫腙染色鉴定胰岛β样细胞团,电化学发光法测定低糖/高糖刺激下胰岛素的分泌情况。结果:未经诱导的骨髓间充质干细胞呈长梭形贴壁生长,诱导后胞逐渐变圆,并聚集成团。诱导8d细胞PDX-1基因呈阳性表达,诱导14d细胞团双硫腙染色呈棕红色。经低糖、高糖刺激后,对照组无胰岛素释放,诱导14d细胞团培养基中胰岛素含量显著升高(t=3.638～9.387,P均<0.01)。结论:2-巯基乙醇、谷氨酰胺、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及尼克酰胺等可在体外诱导成人
- 杨乃龙杨芬徐丽丽
- 关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化
- 两种体外分离成人骨髓间充质干细胞方法的比较被引量：23
- 2008年
- 目的:目前尚缺乏标准的骨髓间充质干细胞分离方法,虽然Percoll密度梯度离心法被认为是较经典的方法,但该方法操作较复杂。比较全骨髓培养法与常用的Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓间充质干细胞的差异,以寻找一种简便、经济、实用的人骨髓间充质干细胞体外分离方法。方法:实验于2006-09/2007-06在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。实验材料:行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓由青岛大学医学院附属医院内分泌科提供,患者对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。实验方法:采用全骨髓培养法与Percoll密度梯度离心法从成人骨髓中分离骨髓间充质干细胞,比较两种方法所获得的贴壁细胞克隆数、细胞形态、细胞表面标志及向脂肪细胞的分化情况。结果:①全骨髓培养法获得的贴壁细胞克隆数明显多于Percoll密度梯度离心法(P<0.05)。两种方法获得的人骨髓间充质干细胞形态无明显差异,均为长梭形,克隆样生长。②免疫荧光显示,全骨髓培养法分离培养的第3代骨髓间充质干细胞CD44阳性表达率和CD34阴性表达率均略低于Percoll密度梯度离心法,但两者之间的差异无统计学意义(t=2.639,P<0.01)。③两种方法获得的第3代骨髓间充质干细胞经地塞米松、胰岛素诱导后均可分化脂肪细胞。结论:与传统的Percoll密度梯度离心法比较,全骨髓培养法获得的骨髓间充质干细胞贴壁较快,传代时间略早,细胞数量多。
- 杨芬杨乃龙
- 关键词：成人骨髓间充质干细胞种子细胞细胞培养
- 骨髓间充质干细胞体外诱导神经干细胞分化的观察被引量：3
- 2008年
- 来源于人胚脑组织的神经干细胞及来源于16岁非造血系统疾病患者的胸骨骨髓间充质干细胞(BMSCs),采用Transwell培养板在体外共同培养(共培养组),观察神经干细胞的形态变化,在共培养第7天用免疫荧光染色检测神经干细胞中神经元细胞特异性标志物特异性烯醇化酶(NSE),并与单纯低糖DMEM培养基培养的神经干细胞(对照组)进行比较。结果显示,共培养组中的NSE阳性细胞达32.7%±11.5%,而对照组未见NSE阳性细胞,两组相比,P<0.05。认为BMSCs在体外可诱导神经干细胞分化为神经元。
- 杨芬杨乃龙林鹏
- 关键词：骨髓间充质干细胞胚胎神经干细胞干细胞分化
- 成人骨髓间充质干细胞体外诱导分化潜能的研究
- 杨乃龙马瑞新王娈孙旭东徐丽丽孙晓娟林鹏杨芬贾秀娟
- 由于骨髓间充质干细胞具有来源广泛、易于培养和自体移植的特点，临床上已经成功地将骨髓间充质干细胞移植到患者体内，用于治疗骨组织缺损和心肌梗死等疾病。随着糖尿病患病率的不断上升，糖尿病的治疗方法也不断推陈出新。干细胞研究的成...
- 关键词：
- 关键词：骨髓间充质干细胞体外诱导诱导分化
- 共培养法神经细胞诱导骨髓间充质干细胞向神经元的分化被引量：15
- 2008年
- 背景：目前神经细胞是否具有直接诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用还未见报道。目的：拟在体外建立入骨髓间充质干细胞和神经细胞的共培养体系，观察共培养条件下神经细胞对骨髓间充质干细胞分化为神经元的影响。设计、时间及地点：分组对照，体外细胞学实验，于2006—12／2007—12在山东省青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料：骨髓间充质干细胞来源于青岛大学医学院附属医院行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓血，神经细胞取材于分娩过程中窒息死亡的新生儿脑组织，传至第3代用于实验。用于细胞共培养的Transwell双层培养皿为Corning Costar公司产品，培养体系孔径小于3.0μm．细胞不会迁徙通过．但上、下层培养液可互通融合。方法：共培养组将神经细胞按1×10^6密度接种于Transwell双层培养皿的底层，上层接种骨髓间充质干细胞，加入LG-DMEM培养基,培养4-5d。对照组上、下层均接种骨髓间充质干细胞。主要观察指标：观察骨髓间充质干细胞的形态变化，免疫荧光染色检测骨髓间充质干细胞中神经元特异性标志物的表达。结果：共培养组骨髓间充质干细胞生长伸展，呈放射状突起．并可相互连接。神经元特异性烯醇化酶阳性率为（32．7±11．5）％．表现神经元细胞的特性。对照组骨髓间充质干细胞形状扁而宽，未形成神经样形态结构，神经元特异性烯醇化酶呈阴性。结论：神经细胞生长过程中提供的微环境对骨髓间充质干细胞分化为神经元具有诱导促进作用。
- 杨乃龙杨芬徐丽丽
- 关键词：骨髓间充质千细胞神经细胞共培养诱导分化
- 体外分离培养MSCs定向诱导为胰岛素分泌细胞
- 目的: 研究成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离培养及向胰岛素分泌细胞的定向诱导分化和鉴定方法，为糖尿病的治疗提供种子细胞来源。
方法: 1.分别采用全骨髓培养法与Percoll密度梯度离心法从成人骨髓中...
- 杨芬
- 关键词：体外分离MSCS胰岛素分泌种子细胞
- 文献传递
- 青岛地区汉族人骨密度数据库的建立与临床应用
- 目的:通过建立青岛地区汉族人群男、女两性骨密度(BHD)数据库,确定本地区男、女两性的峰值骨量(PBHD),探讨适合青岛地区男性与女性人群的骨质疏松症诊断的参考值及干预预警值,最大限度避免因采用白种人群BMD参考值所造成...
- 杨乃龙徐丽丽杨芬孙晓娟
- 文献传递
- 胰岛干细胞来源及诱导分化与分子标记物被引量：6
- 2007年
- 目的:胰岛干细胞移植是治疗糖尿病的一条新途径,可避免胰腺供体匮乏及长期使用免疫抑制剂的问题。本文对有关胰岛干细胞的来源、诱导分化及其分子标记物等研究进展做一综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED 1997-06/2006-06期间的相关文章,检索词为“pancreatic,stem cell,differentiate,marker”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1997-06/2006-06期间的相关文章,检索词为"胰岛干细胞,诱导分化,分子标记物",并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与胰岛干细胞的来源、诱导分化及其分子标记物研究相关。排除标准:重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共收集到82篇相关文献,31篇文献符合纳入标准,排除的51篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的31篇文献中,6篇涉及主要概念,15篇涉及胰岛素分泌细胞的来源及其诱导分化,9篇涉及胰岛干细胞的分子标志,2篇涉及目前存在的问题。资料综合:干细胞是具有自我更新能力的多潜能细胞,分为胚胎干细胞和成体干细胞两大类。胰腺干细胞属于成体干细胞,能在体内分化成导管细胞、胰岛素分泌细胞、外分泌腺胞等特定胰腺组织细胞型,并具有无限分裂和永久自我更新能力。胰岛干细胞的来源、诱导分化及其分子标记物等研究对糖尿病治疗有非常重要的意义。近年研究表明:胰岛素分泌细胞主要来源于胚胎干细胞和成体干细胞,如胰腺导管上皮细胞、巢蛋白阳性胰岛前体细胞、骨髓间充质干细胞、肝脏干细胞等的诱导分化,也可利用基因工程获得。胰岛干细胞的分子标志对基础和临床研究均有重要意义,目前所使用的主要分子标志主要有PDX-1、巢蛋白、角蛋白19、角蛋白20、神经原素3、9.5蛋白基因产物等,可用于胰岛干细胞鉴定
- 杨芬杨乃龙
- 关键词：干细胞移植胰岛细胞分化
