武君
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 供职机构：广东省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GST-FHL2融合蛋白的表达及纯化被引量：2
- 2008年
- 目的高效表达和纯化可溶性GST-FHL2融合蛋白。方法(1)PCR法扩增FHL2 (Four and a half LIM domains 2)基因的编码片段,分别在5'端和3'端加上EcoR I和Xho l酶切位点,并克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;(2)利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-FHL2在大肠杆菌B121(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;(3)超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-FHL2融合蛋白;(4)通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-FHL2的表达。结果(1)成功构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,测序结果证明FHL2与载体的GST在同一读框;(2)0.1 mmol/L的IPTG在23℃的条件下能诱导可溶性GST-FHL2融合蛋白高效表达;(3)在Western blot分析中,GST-FHL2能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-FHL2的分子量相符。结论正确构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-FHL2融合蛋白,经谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性GST-FHL2融合蛋白。
- 沈秀张林吉进武君黄瑞燕刘树楷李妍妍
- 关键词：FHL2谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白原核表达纯化
- HERG基因与心律失常被引量：2
- 2008年
- 人类果蝇相关基因——HERG是从人类海马cDNA文库中鉴定出来,与果蝇EAG基因具有同源性。HERG基因编码延迟整流钾通道的α亚单位,这一类钾通道属电压依赖性通道。实验研究发现HERG基因突变引起其编码的通道结构及功能改变,从而引起心肌细胞动作电位时程改变,临床上表现为心律失常。HERG基因已被证实与心律失常发病有关,尤其是与长QT综合征LQT2的发生有密切关系。现就HERG基因的结构,HERG钾通道的结构、特性及其与心律失常的关系作一综述。
- 沈秀张武君林吉进
- 关键词：HERG心律失常长QT综合征
- 蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12与心脏HERG钾通道相互作用被引量：3
- 2010年
- 目的鉴定HERG钾通道的相互作用蛋白,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的功能调控。方法 (1)应用酵母双杂交技术,构建含有HERG氨基末端的诱饵载体,将转染有诱饵载体的酵母菌AH109与预转染有人类cDNA文库的Y187酵母菌进行双杂交,初步筛选出HERG的相互作用蛋白;(2)应用免疫共沉淀技术进一步验证酵母双杂交所筛选蛋白与HERG之间的相互作用;(3)GSTpull-down分析:应用GST-HERGT-NT融合蛋白和谷光苷肽-琼脂糖4B小球从大鼠心肌裂解物中沉淀蛋白质,应用抗PTPN12抗体对沉淀物进行WesternBlot分析;(4)免疫荧光组织化学分析:应用抗PTPN12和抗HERG的抗体和荧光标记二抗显示PTPN12及HERG的亚细胞定位,应用激光共聚焦显微镜观察。结果 (1)酵母双杂交筛选发现蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(Proteintyrosinephosphatasenonreceptortype12,PTPN12)与HERG氨基末端存在相互作用;(2)免疫共沉淀分析发现抗HERG的抗体能够沉淀HERG和PTPN12复合物;(3)GSTpull-down分析发现GST-HERG-NT能够将PTPN12沉淀,而GST蛋白则不能沉淀PTPN12;(4)免疫荧光组织化学分析发现PTPN12和HERG两个蛋白共定位的地方主要出现在细胞膜。结论 PTPN12与HERG氨基末端相互作用,这一发现将有助于更加透彻地理解HERG通道特性多样性的分子基础和LQTS的发病机理。
- 林吉进刘树楷武君李妍妍
- 关键词：HERG钾通道12蛋白质相互作用酵母双杂交
- KCNA5蛋白与FHL2蛋白的相互作用
- 背景：KCNA5基因(Potassium voltage-gated channel,shaker-related subfamily,member 5)编码的KCNA5 通道（Kv1.5 钾通道）介导了心房的超速激活延...
- 武君
- 关键词：FHL2蛋白质-蛋白质相互作用免疫共沉淀
- 文献传递
- 蛋白质与蛋白质相互作用研究技术被引量：9
- 2008年
- 蛋白质-蛋白质相互作用的研究是蛋白质组学的重要内容,随着研究的深入,促进了研究技术的发展和完善。本文将对研究蛋白质相互作用的技术一酵母双杂交、化学能量共振能量转移、双分子荧光互补技术、荧光能量转移技术、生物分子相互作用分析技术、蛋白质芯片等技术的特点及应用做一综述。
- 武君沈秀张林吉进
- 关键词：蛋白质组学蛋白质-蛋白质相互作用酵母双杂交
- 与HERG钾通道相互作用的FHL2蛋白对该通道功能的调控被引量：1
- 2009年
- 目的筛选与心脏人类果蝇相关基因(HERG)的编码蛋白钾通道存在相互作用的蛋白质,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的调控作用。方法①以带有编码人类心脏HERG钾通道的cDNA为模板,通过PCR方法得到编码人类心脏HERG钾通道氨基末端(404个氨基酸)的DNA片段。将该片段克隆入pGBKT7载体,构建"诱饵"质粒pGBKT7-HERG-NT。②应用酵母双杂交技术筛选人类心脏cDNA文库。③以PCR法扩增4个半LIM结构域(FHL2)基因的开放读框片段(ORF),并克隆入pcDNA3.0载体。④以pcDNA3.0-herg转染HEK293细胞,应用G418筛选得到HEK293/HERG细胞株。以pcDNA3.0-FHL2转染HEK293细胞,筛选得到HEK293/FHL2细胞株后,再将pcDNA3.0-herg转染入该细胞株。⑤应用膜片钳技术,研究FHL2对HERG通道功能的影响。结果①用酵母双杂交技术筛选得到37个阳性克隆,其中含有表达FHL2蛋白的克隆。②膜片钳检测发现,FHL2蛋白在增加HERG电流幅度的同时并调节其激活过程。结论FHL2蛋白能与HERG氨基末端相互作用而影响HERG钾通道的功能。
- 沈秀张林吉进武君黄瑞燕
- 关键词：酵母双杂交HERGFHL2膜片钳技术
