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大肠杆菌表达的破伤风C片段的纯化及免疫原性分析: 目的:建立纯化大肠杆菌重组表达的破伤风毒素C片段(tetanus toxin C fragment,TTc)的纯化工艺,验证免疫原性。方法:通过硫酸铵沉淀、疏水层析及离子交换层析三步纯化目的蛋白。腹腔3剂免疫BALB/c...; 陈继军毛晓燕王建锋乔玉玲; 关键词：纯化免疫原性; 文献传递

重组表达A型肉毒毒素重链C端多肽及其在多抗血清中的抗原性研究: 2016年; 目的对A型肉毒毒素重链C端多肽原始基因序列进行密码子优化后转入大肠杆菌系统进行原核表达并纯化,研究其在多抗血清中的抗原性。方法使用http://www.jcat.de/数据库等生物信息学技术对A型肉毒毒素重链C端多肽原始基因序列进行密码子优化后装入原核表达载体p ET-22b(+)中,转入大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)表达并纯化,通过动物实验研究其在多抗血清中的抗原性。结果成功表达并纯化了A型肉毒毒素重链C端多肽,并对其抗原性进行验证。结论 A型肉毒毒素重链C端多肽作为抗肉毒毒素的二代亚单位疫苗组分以及肉毒类毒素的替代品,在制备以及激起中和抗体的方面具有明显的优势。; 卢卫嘉王建锋陈继军秦海燕毛晓燕; 关键词：抗原性

16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用: 目的:建立一种快速,可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法:从肉毒梭菌中提取基因组DNA为模板,通过16S rRNA特异性引物进行PCR,扩增得到16S rDNA序列并测序。将结果通过Clustal和Mega两个软件分...; 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋; 关键词：肉毒梭菌进化树; 文献传递

重组破伤风毒素C片段的纯化及其免疫原性被引量：4: 2011年; 目的建立大肠杆菌表达的重组破伤风毒素C片段(Tetanus toxin C fragment,TTc)的纯化工艺,并检测其免疫原性。方法取超声破碎后的重组菌上清,经硫酸铵沉淀、Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清抗体水平。结果经3步纯化,目的蛋白纯度达96.7%;经还原及非还原SDS-PAGE分析蛋白条带一致,相对分子质量约为50 000,不含多聚体,为单体蛋白;纯化的TTc可刺激小鼠产生免疫应答,但血清抗体水平显著低于破伤风类毒素组(P<0.05)。结论已建立了大肠杆菌表达的重组TTc的纯化工艺,纯化的TTc对小鼠具有免疫原性。; 陈继军毛晓燕王建锋乔玉玲; 关键词：破伤风毒素纯化免疫原性

16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用被引量：3: 2011年; 目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、测序。通过Clustal和Mega软件分析16SrDNA序列,以NJ法和MP法构建进化树,分析其种属特异性。结果 16SrRNA分型结果可判断出LCL063、830110、LCL175为产E型毒素的酪酸梭菌。IWANAI与ALASKA株为E型肉毒梭菌。与传统分型鉴定得到的结果一致。结论 16SrRNA在肉毒梭菌分型鉴定中具有快速、准确的优势,随着核糖体库的不断完善,有望成为细菌分型鉴定的标准依据。; 卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋; 关键词：肉毒梭菌进化树细菌分型技术

抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方的初步筛选被引量：1: 2020年; 目的初步筛选抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方组成。方法以PBS为缓冲体系,聚山梨酯-80(Tween-80)为表面活性剂,乙二胺四乙酸(EDTA)为抗氧化剂及溶液不同pH值为关键因素,实验设计(Design of Experiment,DOE)10组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,分别进行加速稳定性试验[40℃保存0、1、7及14 d],分析单克隆抗体主要质量属性[分子排阻-高效液相色谱(size-exclusive-high performance chromatography,SEC-HPLC)和毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)分析纯度,毛细管等点聚焦(capillary isoelectric focusing,cIEF)分析电荷变异体,动物实验检测抗体效价)]变化,初步确定制剂最适配方。结果单克隆抗体制剂经SEC-HPLC分析,1、2、9及10制剂配方组纯度较好,经CE-SDS分析,1、2、7~10制剂配方组纯度较好;经cIEF分析电荷变异体,2及9制剂配方组保护效果较好;经动物实验检测,1、2、7~10制剂配方组抗体效价较好;初步确定2及9制剂配方组为最适制剂配方。结论初步筛选出2组抗破伤风毒素人源单克隆抗体制剂配方,Tween-80浓度及制剂溶液pH值可能是影响抗体稳定的主要因素。本研究为单克隆抗体制剂的进一步优化提供了方向及依据。; 王建锋叶星南建军安晨宋兰兰毛晓燕; 关键词：单克隆抗体

鼠源E型肉毒毒素免疫噬菌体单链抗体库的构建及筛选被引量：3: 2015年; 目的：构建鼠源E型肉毒毒素（BoNT/E）免疫噬菌体单链抗体库,筛选BoNT/E特异性抗体。方法：从E型肉毒类毒素免疫小鼠的脾细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,分别扩增出小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因;通过重叠延伸PCR将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成scFv基因,重组于噬粒pS100中,电转化大肠杆菌TG_1,合并所有克隆成初级库;随机挑取克隆进行核苷酸序列测定,对初级库序列多样性进行分析;在辅助噬菌体M_（13）K_（07）的拯救下,构建成scFv噬菌体抗体库;用纯化的BoNT/E对鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库进行3轮富集筛选,制备单克隆的噬菌体抗体颗粒进行酶联免疫吸附试验,阳性克隆进行核苷酸序列测定。结果：鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库的库容为7.09×10^7,随机挑取的20个克隆序列各不相同,序列正确率为85%,基本覆盖了IgHV、IgKV、IgLV的优势家族;纯化的BoNT/E作为抗原通过3轮筛选,噬菌体抗体富集了66倍,第3轮筛选后随机挑取90个克隆制备噬菌体抗体颗粒,酶联免疫吸附试验分析有88个呈现阳性反应,序列比对得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。结论：构建了库容量达7.09×10^7的鼠源BoNT/E免疫噬菌体单链抗体库,筛选得到了24个不同序列的BoNT/E特异性抗体。; 秦海艳王建锋熊颖卢卫嘉张超毛晓燕; 关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体

小鼠E型肉毒毒素中毒血清蛋白质组学及组织病理学研究: 目的:以小鼠为动物模型研究E型肉毒毒素中毒主要器官病理变化及血清蛋白变化,为肉毒毒素中毒早期诊断寻找生物标志物及中毒病理学研究奠定基础。方法:腹腔注射清洁级小鼠E型肉毒毒素1个LD,眼眶采集存活小鼠血液,离心分离血清,取...; 王建锋毛晓燕张超卢卫嘉陈继军秦海燕; 关键词：肉毒毒素中毒病理学蛋白质组; 文献传递

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王建锋

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