王立荣
- 作品数：28 被引量：138H指数：9
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人生长激素基因在小鼠体内的表达被引量：2
- 1998年
- 本文报道了含人生长激素ｈＧＨｃＤＮＡ的重组真核表达质粒的构建及其直接注射后在小鼠体内的表达水平。构建含ＣＭＶ晚期启动子的重组真核基因表达质粒Ｒｃ／ＣＭＶＧＨｃＤＮＡ，以阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ和Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ分别包裹后直接多点注射于小鼠后肢肌肉组织，并用ＲＴＰＣＲ及免疫放射检测分析法（ＩＲＭＡ）分别在转录水平及蛋白水平检测到了ｈＧＨｃＤＮＡ的表达。其中，单纯质粒直接注射后所检测到的最长表达期限为９０天。与之相比，以阳离子脂质体包裹质粒后再注射的表达效率更高，且Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ的作用强于Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ。结果表明，以高效重组真核表达质粒Ｒｃ／ＣＭＶＧＨｃＤＮＡ直接，或用阳离子脂质体包裹后多点肌注，是使外源目的基因ｈＧＨｃＤＮＡ在小鼠体内表达的简便。
- 郑润马龙刘亮刘敬忠王立荣
- 关键词：生长激素基因转移阳离子脂质体RT-PCR
- 从单个细胞扩增靶基因片段的技术被引量：2
- 2002年
- 目的 建立从人的单个细胞扩增特定靶基因片段进行基因诊断的技术。方法 利用显微操作技术挑取单个纤维母细胞 ,各置于 0 2ml簿壁反应管的裂解液中 ,合成针对抑癌基因P53第5～ 9外显子 (e)的引物 ,运用 1 5mer高度随机引物或一个特异引物进行单个细胞的整个基因组DNA或特异靶片段的预扩增 ,再以其为模板进行巢式聚合酶链反应 (PCR)扩增P53基因第e5～ 9的 1 90 0bp片段及含第 5 ,6外显子的 580bp片段。并用ABI 377测序仪测定其序列。结果 运用稀释至 0 0 1ng的基因组DNA扩增 1 90 0bp片段 ,优化PCR的条件。分别从 30个单个纤维母细胞扩增上述 1 90 0bp片段 ,1 0个获得 1 90 0bp片段 ,成功率为 33 %。扩增 580bp片段 ,则阳性率可达 60 %。序列分析证明确为人P53基因第 5 ,6外显子序列。结论 运用本实验室建立的技术可从人的单个细胞扩增特定靶基因片段 ,并测定其序列 。
- 刘敬忠王立荣
- 关键词：巢式聚合酶链反应基因扩增单细胞基因诊断
- 变性高效液相色谱法检测中国南方和东南亚人群常见缺失与突变型α-地中海贫血被引量：2
- 2011年
- 目的针对中国南方和东南亚人群α-地中海贫血常见缺失与点突变类型，建立一种简便、准确与快速的两管PCR结合变性高效液相色谱检测方法。方法双重聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）结合变性高效液相色谱（denaturinghighperformanceliquidchromatography，DHPLC）分析，联合改进型一管PCR结合DHPLC方法，对160份临床标本中α珠蛋白基因的3种常见点突变与3种缺失进行检测。结果用一管双重PCR—DHPLC和改进型一管PCR—DHPLC分析法分别检测了α珠蛋白基因常见的3种点突变与3种缺失，检测结果与临床现行方法相符。结论改进的检测方法可同时检测中国南方和东南亚人群α-地中海贫血的常见缺失与点突变，具有准确、快速、半自动化及经济等特点，适用于规模化的临床筛查与检测。
- 贾兴元卫小静唐宁王立荣韩瀚郑梅玲蔡稔肖白刘敬忠
- 关键词：Α-地中海贫血变性高效液相色谱聚合酶链反应分子诊断
- SYBR-GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析技术在α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断中的应用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR(SYBR-PCR)结合融解曲线分析(D.C)技术进行α-珠蛋白生成障碍性贫血(α-地贫)基因诊断的价值。方法对22个家系中的37份样品采用4管SYBR-PCR结合D.C进行--SEA、-α3.7,-α4.2及非缺失型(αα)4个等位基因型的检测,进而作出基因诊断。同时运用单管多重PCR(mPCR)结合凝胶电泳技术进行基因检测加以对照确认。结果22个家系中6个家系检出有--SEA或-α3.7携带者,其中东南亚型缺失携带者(--SEA/αα)7例,右侧缺失携带者(-α3.7/αα)3例,东南亚型缺失与右侧缺失双重杂合子(--SEA/-α3.7)1例。2例为胎儿产前诊断。其中1例为Bart′s水肿胎儿(--SEA/--SEA),另1例为东南亚型缺失携带者(--SEA/αα)。用mPCR凝胶电泳技术得出的基因诊断结果与上述结果一致。结论SYBR-PCR结合D.C技术在α-地贫的基因诊断、携带者检出及产前诊断方面具有实用价值。
- 闫梅梁燕王立荣王战勇肖白刘敬忠
- 关键词：实时荧光聚合酶链反应基因诊断产前诊断
- 用SYBR-GreenⅠ实时荧光PER结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血被引量：7
- 2007年
- 目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Greenl进行两个实时荧光聚合酶链反应（real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green 1，SYBR-PCR），检测左缺（-α^4.2）、右缺（-α^3.7）等位基因，同时进行融解曲线（dissociation calve，DC）和Tm（melting temperature）值分析。PCR产物重组到pCR2．1，重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度，确定两种等位基因型（-α^4.2，-α^3.7）的检测下限，并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α^4.2和-α^3.7的PCR产物长度分别为1．65kb、1．9kb，Tm分别为（81．5±0．5）℃、（82．5±0．5）℃，检测下限分别为9×10^2个拷贝、4．3×10^2个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Greenl实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α^4.2、-α^3.7、αα（包括α^Tα）及--^SEA4种等位基因，从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高，不需荧光标记探针，成本低，易质控，防污染，高通量等优点，适于临床推广应用。
- 闫梅王立荣王战勇周艳梁燕肖白刘敬忠
- 关键词：实时聚合酶链反应Α-地中海贫血
- 运用单管多重聚合酶链反应检测海南黎族人群中三种缺失型α-珠蛋白生成障碍性贫血基因被引量：11
- 2004年
- 目的 建立单管多重聚合酶链反应 (mPCR)技术并将其运用于筛查海南黎族人群中 3种最常见的缺失型α 珠蛋白生成障碍性贫血基因 (α 地中海贫血基因 ,简称α 地贫基因 )。方法 在研究成功检测 3种α 地贫基因 ,即 SEA、-α3 .7、-α4.2 的 3个PCR反应的基础上 ,建立并优化单管mPCR反应的条件 ,检测了 4 0例已知基因型的α 地贫患者基因 ,并筛查、诊断了 116份海南黎族人血标本。结果 运用新建立的单管mPCR检测 4 0例α 地贫患者DNA ,所得基因型与运用 3个分别的PCR技术及Southern印迹杂交技术所得到的结果一致。在 116份海南黎族人中 ,检出 -α3 .7和 -α4.2缺失型基因的携带频率高达 38.0 % ,且 -α4.2 稍高于 -α3 .7。但在该组标本中没测到 SEA。结论 单管mPCR技术准确率及灵敏度都很高 ,且简便易行。海南黎族人群 -α3 .7和 -α4.2 携带频率居国内最高。
- 刘敬忠欧采莹王立荣肖白黄莉嘉周艳陈历昌
- 关键词：聚合酶链反应黎族人群基因缺失常染色体隐性遗传病
- α地中海贫血的基因诊断及产前诊断研究被引量：7
- 2005年
- 目的建立同时检测中国人中最常见的3种α地中海贫血(地贫)基因缺失的单管多重PCR(mPCR)技术,并运用于河北省一个α地贫家系的基因诊断与产前诊断。方法mPCR包含7条引物,运用mPCR、凝胶电泳及DNA测序技术进行α地贫的基因诊断和胎儿羊水细胞DNA的产前基因诊断。结果运用mPCR技术检测了42份α地贫患者DNA标本,证明其能准确、灵敏、快速、简便地诊断出完整的α珠蛋白基因型。查明河北省1例α地贫患儿为--SEA和HbCS双重杂合子,该家系第2胎胎儿羊水细胞DNA检查证明为完全正常胎儿,产后检测与产前诊断结果相符。结论所建立的α地贫基因诊断mPCR技术可用于3种缺失型α地贫的快速诊断和产前诊断。我国北方也有少量散在α地贫患者及家系,应引起重视,以免贻误诊断和治疗。
- 刘敬忠王立荣黄莉嘉肖白周艳
- 关键词：产前诊断基因诊断Α地中海贫血羊水细胞凝胶电泳DNA测序技术
- α-地中海贫血第二代基因诊断试剂盒之研发
- α-地中海贫血第一代基因诊断试剂盒,即多重PCR/Agarose凝胶电泳法,自我们于2001年研发成功并于次年投入市场以来,一直为我国南方广大医疗单位所采用至今,检出了大量地贫基因携带者和患病胎儿,减少了患病胎儿出生。产...
- 刘敬忠王立荣肖白刘全章吴小意
- 两种常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究被引量：9
- 2001年
- 目的 建立简便快速准确可推广使用的检测α 地中海贫血 (α Thal)右侧缺失型 ( α3 .7)和左侧缺失型 ( α4 .2 )的聚合酶链反应 (PCR)方法。方法 自行研究设计两组引物。优化PCR反应条件。PCR反应产物用 1%琼脂糖凝胶电泳分离 ,溴化乙啶染色 ,UVP凝胶成像仪下观察记录电泳图谱。结果 运用引物A′、B′、C3进行PCR ,出现 170 0bp扩增带表示 α3 .7,出现 190 0bp扩增带表示α 珠蛋白基因正常或为野生型。二条扩增带同时出现表示是 α3 .7缺失杂合子。无任何扩增带表示是东南亚型缺失纯合子。运用引物G′、E、F′进行PCR ,根据出现 15 80bp扩增带和 1180bp扩增带可诊断为 α4 .2 ,还可区分杂合子与纯合子。结论 本研究设计的两组引物及优化的PCR条件 ,可以简便准确地检测出α Thal标本中有无 α4 .2 和 α3 .7。
- 刘敬忠周桔王立荣周艳
- 关键词：Α-地中海贫血聚合酶链反应
- β肾上腺素能受体在支气管哮喘发病中的作用(英文)被引量：2
- 2001年
- 目的 观察支气管哮喘不同状态时外周淋巴细胞肾上腺素能受体 (βAR)及β2 ARmRNA水平的变化。方法 用放射配基结合受体分析法 ,放射免疫法 ,逆转录聚合酶链反应 (PT PCR)及原位杂交等方法测定哮喘患者不同状态下 β2 AR密度 ,β2 ARmRNA水平 ,血浆cAMP和cGMP水平。结果 缓解期哮喘患者外周淋巴细胞 βAR的密度较正常人明显升高 ,血浆cAMP水平无显著差异 ,而发作期哮喘患者βAR及血浆cAMP水平均较正常人明显降低 ;缓解期哮喘患者外周淋巴细胞β2 ARmRNA水平与正常人无显著差异。结论 βAR数量、功能及其信使核糖核酸水平与哮喘不同发病状态有关 ,其改变仅为哮喘病程中伴随出现的变化 ,不是其发病的原发因素。
- 高海鹏薛全福林友华王立荣朱广瑾赵琪平陈育智
- 关键词：Β肾上腺素能受体CAMPCGMP信使核糖核酸
