芦银华
- 作品数：56 被引量：579H指数：14
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科技兴农重点攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种新的参与抗生素生物合成调控的基因及其用途
- 本发明涉及一种新的参与抗生素生物合成调控的基因及其用途。鉴定了一个新的参与链霉菌抗生素生物合成的负调控基因，该基因的存在抑制了链霉菌中抗生素的合成，而该基因的缺失可以使链霉菌中抗生素的产量大量增加。本发明还提供了高产抗生...
- 芦银华何娟梅姜卫红杨晟党福军覃重军
- DNA组装新方法的研究进展被引量：2
- 2013年
- 2010年,蕈状支原体Mycoplasma mycoides的人工合成,迎来了合成生物学的崭新时代。这种突破性的进展主要得益于酵母自身强大的DNA体内重组能力。近几年来,除了利用体内重组的DNA大片段拼接技术,基于连接或聚合思想的不同尺度的DNA体外组装方法也相继出现,如Biobrick\Bglbrick、SLIC与Gibson等温一步法等,这些方法的应用加快了合成生物学功能元件库、生物合成途径乃至微生物染色体的人工构建。事实上,目前所建立的各种DNA组装方法,均是由DNA分子拼接理念(包括两分子衔接思想与多片段组装模式)衍生而来。文中将在介绍DNA组装基本理念的基础上,对体内、体外主要的DNA组装方法进行简要梳理,希望为不同类型的合成生物学功能器件及生物合成途径的构造提供参考与借鉴。
- 李雷芦银华姜卫红
- 关键词：合成生物学生物合成途径
- 表达鸡传染性支气管炎病毒SD/97/01株S1蛋白的重组杆状病毒的构建被引量：7
- 2002年
- 采用BAC TO BAC 杆状病毒表达载体系统构建了表达鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)呼吸型毒株SD/ 97/ 0 1S1蛋白的重组杆状病毒 .含SD/ 97/ 0 1株S1基因的重组质粒pMDSD970 1S1用BamHI和SalI双酶切后 ,回收目的片段并克隆到杆状病毒转座载体pFASTBAC HTa中多角体基因启动子的下游 ,筛选出重组转座质粒pFASTSD970 1S1并转化大肠杆菌DH10 BAC 后 ,获得重组穿梭质粒rBacmidSD970 1S1.用重组穿梭质粒DNA转染昆虫Sf9细胞 ,获得了含SD/ 97/ 0 1S1基因的重组杆状病毒rAcSD970 1S1.重组病毒感染Sf9细胞后 ,用SDS PAGE、Westernblot和IFA对细胞表达产物进行检测和分析 .结果表明 :构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达SD/ 97/ 0 1的S1蛋白 ,该蛋白具有天然蛋白的抗原性 .
- 戴亚斌陈德胜丁铲潘杰彦刘兴友芦银华刘梅陈溥言蔡宝祥
- 关键词：传染性支气管炎病毒S1基因S1蛋白基因重组
- 16省市区禽源性大肠杆菌O_(18)和O_(78)的外膜蛋白型被引量：23
- 1999年
- 经对我国 １６ 个省、市、自治区分离到的 １１０ 个禽病原性大肠杆菌 Ｏ１ ８ 和 Ｏ７ ８ 分离株的外膜蛋白型（ Ｏ Ｍ Ｐ型）的测定，结果表明，这些分离株共产生了 ４ 个 Ｏ Ｍ Ｐ 型，５６ 个 Ｏ１ ８ 分离株可分为 ３ 个 Ｏ Ｍ Ｐ型，５４ 个 Ｏ７８ 分离株出现了 ４ 个 Ｏ Ｍ Ｐ型，其 Ｏ Ｍ Ｐ１～３ 型为二者所共有。
- 高崧滕峰芦银华何叶峰张如宽刘秀梵
- 关键词：大肠杆菌分离株外膜蛋白型
- 猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因原核表达载体的构建及表达
- 2005年
- 用PK-15细胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法扩增核衣壳蛋白(Cap蛋白)全基因,克隆到pET-32a载体中,构建了表达载体pETORF2,转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,结果显示表达的蛋白大小与设计不符。同样的方法,又构建了表达载体pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符。对Cap蛋白编码基因进行改造,在不改变原氨基酸序列的基础上,把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子,根据此序列,设计了4条长引物,参照SOE的原理,用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段,并克隆到pET-32a载体中,成功构建了重组表达载体pETP1P4。SDS-PAGE电泳结果表明,表达的蛋白分子量与设计相符。
- 崔立朱建国芦银华谈国蕾陈溥言华修国
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白大肠杆菌
- 三种猪繁殖障碍性病毒混合感染的分子生物学调查被引量：39
- 2004年
- 根据GenBank登录的PRRSVORF7、PCV 2ORF1基因及PRVTK基因的核苷酸序列设计合成引物 ,建立了分别用于检测PRRSV、PRV及PCV 2的RT PCR及PCR方法。应用该方法对 77份可疑病料进行了检测 ,以调查猪群中PCV 2与PRRSV和 (或 )PRV混合感染情况。结果表明 ,2 4份样品表现为PRRSV与PCV 2混合感染 ,占样品总数的 31.2 % ;17份样品检测为PRRSV与PRV混合感染 ;9份样品表现为PCV 2与PRV混合感染 ,占 11.7% ;另外 ,还有一定比例的三重感染 ,共 8个样品 ,占 10 .4 %。结果显示 ,猪群中PRRSV、PRV与PCV
- 许立华王玲芦银华陈溥言
- 关键词：猪繁殖障碍猪生殖与呼吸综合征病毒伪狂犬病病毒
- 猪圆环病毒复合PCR检测方法的建立及初步应用
- 猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)属单股DNA的圆环病毒科(Circoviridae),病毒粒子直径14-17nm,为最小的已知动物病毒之一[1]。根据致病性及基因组序列,PCV可分两种血清型,即...
- 芦银华谈国蕾陈德胜黄伟坚陈溥言华修国
- 文献传递
- 猪伪狂犬病病毒GB株蛋白激酶(PK)基因的克隆及序列分析比较
- 2004年
- 以伪狂犬病病毒GB株细胞培养物为模板,用PCR方法扩增蛋白激酶(PK)基因,对其进行了克隆、序列测定,并与PRVNIA-3株、Ka株和其他α-疱疹病毒进行了同源性比较。结果显示:所扩增的PK基因片段长1396bp,该片段包含一个开放阅读框(ORF),长1005bp,编码由334个氨基酸组成的蛋白质。与NIA-3株及Ka株的核苷酸同源性为98.4%和97.5%,基因编码区氨基酸序列的同源性为98.2%和96.4%。具有真核细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶氨基酸亚结构域特征序列,而且α-疱疹病毒PK基因具有一些特征性的、共有的氨基酸序列。为今后研究PK基因的功能和构建PK缺失株奠定了基础。
- 黄伟坚陈德胜姜焱芦银华张雪莲陈溥言
- 关键词：伪狂犬病毒蛋白激酶PCR扩增
- 猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析被引量：34
- 2003年
- 根据GenBank中猪圆环病毒 2型 (PCV 2 )基因序列 ,设计两对特异性引物 ,用PCR方法从接种疑似PMWS仔猪病料的细胞中分段扩增 2个分离毒株全基因组。将扩增片段克隆入 pGEM Teasy载体 ,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒。对质粒中的插入片段进行测序拼接 ,获得 2株均为 176 8bp的全基因组序列。应用DNAstar序列分析软件 ,对所测PCV 2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行同源性比较 ,并绘制系统发生树 ,结果发现 :所测两毒株之间的核苷酸序列同源性极高 ,可达 99 8% ,亲缘关系密切 ;与PCV 2参考毒株的同源性介于95 3%～ 99 7%之间 ,其中与美国的一株PCV 2同源性最高 ,分别为 99 5 %和 99 7% ,亲缘关系很近 ;与国内两分离株同源性分别为 96 4%和 98 8%～ 98 9% ;与PCV 1参考毒株同源性仅为 77 1%～ 77 5 %。
- 芦银华华修国陈德胜黄伟坚戴亚斌谈国蕾陈溥言
- 关键词：猪圆环病毒PCR
- 天蓝色链霉菌双组分调控系统的研究
- 本报告将重点介绍天蓝色链霉菌中抗生素生物合成相关的正调控因子AfsQ1-Q2的功能与作用机制。研究结果表明：该双组份系统中的调控蛋白AfsQ1可以通过与抗生素合成途径特异性调控基因actll-ORF4，redZ与cdaR...
- 芦银华姜卫红
- 关键词：天蓝色链霉菌双组分系统蛋白调控
- 文献传递
