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一例副猪嗜血杆菌病的诊断与防治被引量：1: 2009年; 2008年11月，广东省惠州市博罗县某猪场保育猪群表现发热、咳嗽、呼吸困难、消瘦、被毛粗乱、食欲不振、厌食、反应迟钝、疼痛（由尖叫推断）、关节肿胀、跛行、颤抖、共济失调、可视黏膜发绀、侧卧等症状，部分猪死亡，发病率和死亡率都较高，给猪场带来巨大的经济损失。经临床检查、病理剖检以及实验室诊断，确诊为副猪嗜血杆菌病，现将诊断以及疫情控制情况报告如下。; 刘健谭实勇刘镇明罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌病食欲不振关节肿胀经济损失

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：8: 2011年; 本试验采用121℃高压处理副猪嗜血杆菌4型和5型耐热蛋白,混合作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度为10μg/mL,37℃包被2h;封闭液选择含20g/L脱脂奶粉的PBST,封闭30min;血清的稀释度为1∶80;抗原抗体反应时间为45min;酶标二抗稀释度为1∶12000,作用时间为30min;底物显色时间为15min。特异性、重复性和敏感性试验及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,对已知阴阳性血清的临床样本检测结果与国外ELISA试剂盒一致,可用于副猪嗜血杆菌的血清抗体检测和血清流行病学调查。; 郑念广谭实勇何玲夏芳高娟罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌抗体间接酶联免疫吸附试验

猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治被引量：8: 2010年; 通过对某猪场出现的疫情进行流行病学调查、临床症状、病理剖检、细菌分离培养鉴定及荧光定量PCR诊断,确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与副猪嗜血杆菌(HPS)混合感染。现场采集疑似副猪嗜血杆菌病的典型病料,用TSA培养基分离细菌,经菌落形态观察、镜检、卫星现象及PCR检测,确定分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明该分离株对先锋Ⅵ、阿莫西林、壮观霉素、庆大霉素均敏感。采用PRRSV核酸检测试剂盒对病料进行检测结果为阳性。综合判定该场为PRRSV和HPS混合感染。; 谭实勇邓瑞林罗满林; 关键词：PRRSV HPS PCR 药敏试验

副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法的建立及其应用被引量：4: 2011年; 利用ERIC序列设计1对引物,分别对PCR反应的模板量、引物浓度、DNA聚合酶用量、dNTPs浓度、退火温度等影响ERIC-PCR扩增的因素进行了探索和优化,以选择最佳的PCR反应体系及反应条件。结果显示,确定的最适引物浓度为0.166～0.333μmol/L,DNA聚合酶的最适浓度为1.0U/μL,模板最适用量为8ng/μL,dNTPs为200μmol/L。利用所建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分子生物学分型技术,对临床分离菌株的指纹图谱进行了分析,13个分离菌株的ERIC-PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较,可分辨出6种血清型,并与琼脂扩散试验分型方法的结果一致。证实已建立的副猪嗜血杆菌ERIC-PCR分型方法重复性好、可比性高。; 郑念广谭实勇陈瑞爱何玲夏芳罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌

副猪嗜血杆菌环介导等温扩增检测方法的建立被引量：15: 2010年; 本研究旨在建立检测副猪嗜血杆菌(Hps)的新方法。根据GenBank上发表的不同血清型Hps的16S rRNA序列,找出高度保守区域,再针对该区域设计了4条特异性引物,建立了Hps环介导等温扩增法(LAMP)。试验结果表明,LAMP方法在恒温(63℃)条件下特异性强,比PCR方法敏感100倍,鉴于目前副猪嗜血杆菌分离培养和鉴定的复杂性,LAMP操作简单、成本低,整个扩增反应在1 h内即可完成,为检测Hps提供了一个快速简便的分子生物学方法。; 朱杰仪谭实勇曾小娜刘健刘中勇朱道中罗满林; 关键词：副猪嗜血杆菌 RRNA 环介导等温扩增技术

猪圆环病毒2型ORF2重组腺病毒的构建与鉴定及其免疫效果研究被引量：5: 2010年; 为了研究含有猪圆环病毒2型(porcinecircovirus type 2,PCV2)的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,本试验根据GenBank中猪圆环病毒2型基因序列,设计了1对引物,用于猪圆环病毒2型ORF2基因的扩增。将目的基因T/A克隆后,亚克隆至腺病毒转移载体pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ORF2。经PCR方法和限制性内切酶酶切法及测序证明该基因已成功连接后,重组腺病毒转移载体经PmeⅠ酶切线性化,在BJ5183细菌中与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-CMV-ORF2。经PCR方法和PacⅠ酶切方法及测序鉴定表明该重组腺病毒载体已构建成功。PacⅠ酶切线性化pAd-CMV-ORF2,脂质体法转染AD293细胞进行病毒的包装和扩增。PCR及RT-PCR、IFA、Westernblotting检测目的基因及其表达。结果表明,本试验成功构建了重组腺病毒pAd-CMV-ORF2。3次噬斑试验纯化重组腺病毒,测得其TCID50为10-8.75/0.1mL。将重组腺病毒接种SPF级雌性BALB/c小鼠,用ELISA抗体检测试剂盒检测特异性抗体水平。小鼠免疫试验测得其特异性抗体水平较高,为PCV2重组腺病毒基因工程疫苗的进一步研究打下基础。; 刘根梅谭实勇陈瑞爱黄红亮郑念广罗满林; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2 重组腺病毒

副猪嗜血杆菌广东流行株的分离鉴定、优势血清型定型及灭活苗的研制: 副猪嗜血杆菌（Haemopilus parasuis，HPS)是猪上呼吸道的一种共栖菌，它可在特定条件下侵入机体而引起猪的多发性浆膜炎和关节炎(革拉泽氏病Glasser’s disease)。该菌对产房以及保育舍仔猪感染...; 谭实勇; 关键词：副猪嗜血杆菌灭活疫苗

猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治: 通过对某猪场出现的疫情进行流行病学调查、临床症状、病理剖检、细菌分离培养鉴定及荧光定量PCR诊断，确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与副猪嗜血杆菌(HPS)混合感染。现场采集疑似副猪嗜血杆菌病的典型病料，用TSA...; 谭实勇邓瑞林罗满林; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒副猪嗜血杆菌病毒感染药敏试验; 文献传递

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谭实勇