贺石汉
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：武汉大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划武汉市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组pQE30 tPAr质粒在JM109菌株中的稳定性研究被引量：5
- 2003年
- 将构建好的含有人变异tPA基因的重组pQE30tPAr质粒的JM10 9菌株原始种子库菌种 ,在含Amp的平板培养基划线法连续传代至 10 0代 ,其在固体培养基中生长速度、菌落形态和菌体形态、Amp抗性等方面与原始种子库无明显差异 ;每隔 10代提取质粒DNA用HindⅢ和KpnⅠ限制性内切酶切割检查 ,酶切图谱没有改变 ;DNA测序未见tPAr基因变异 .用原代和第 10 0代培养诱导表达tPAr,表达水平和tPAr活性均无明显差异 .菌体的SDS pAGE图谱也完全相同 .以上结果表明所建立的JM 10
- 贺石汉李宝宗郜金荣叶林柏郑永勋佘应龙吴正辉
- 关键词：基因重组纤溶酶原激活剂传代培养
- 重组人tPA基因在毕赤酵母和大肠杆菌中的克隆与表达
- 在对人tPA蛋白质功能区域分析的基础上,为获得一种新型的,能够逃逸PAI-1抑制的高效溶栓剂,该研究在实验室以前构建成的人组织型纤溶酶原激活剂克隆基因pQE30-tPAr(△K1K2)的基础上,针对P区中和tPA抑制剂P...
- 贺石汉
- 关键词：定点突变大肠杆菌活性
- 文献传递
- 重组tPA及其突变体纤溶活性的比较
- 2004年
- 将重组基因rtPA及其突变体rtPAm分别克隆到原核表达载体pET his上,通过平板筛选,双酶切和PCR鉴定获得阳性克隆子,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导,表达出的两种tPA蛋白都形成不可溶的包涵体.SDS PAGE结果显示两种tPA蛋白分子量为4.0×104左右,表达产量较高.包涵体经尿素变性,透析复性后柱层析纯化,纤溶平板法测定激活纤溶蛋白酶的活性,结果显示rtPAm比活性比rtPA高70%左右.
- 李宝宗郑竑叶林柏郜金荣佘应龙贺石汉吴正辉
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物克隆活性比较
- 乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达被引量：6
- 2003年
- 应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1 203bp.克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr亚型。有24个核苷酸不同,preS基因包含3个起始密码ATG分别为preS1,preS2,和S的翻译起点。然后将preS基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,将Sal I线性化的pPIC9K-preS质粒用电击法导入巴斯德—毕赤酵母GS115His-中。通过MD-G418平板筛选和5AOX1和3AOX1引物PCR鉴定获得稳定重组HBV全长preS基因的His+Mut+酵母工程菌株。此酵母菌株在合适的培养条件和甲醇诱导下高效表达产生全长PreS蛋白并可分泌到培养液中,SDS-PAGE显示培养液中含有分子量约为48kDa的带;微孔ELISIA法证实表达并分泌到培养液中的PreS蛋白能够与HBV抗体阳性血清发生特异性反应。
- 孙明颢叶林伯郜金荣贺石汉吴正辉
- 关键词：乙型肝炎病毒ADR亚型疫苗毕赤酵母表达系统
