公共文化服务平台

金凯: 作品数：17 被引量：31H指数：4; 供职机构：重庆大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>

合作作者

利用GFP表达系统检测球孢白僵菌侵染昆虫过程被引量：10: 2008年; 绿色荧光蛋白(GFP)作为一种重要的报告基因,在病原菌和寄主之间的互作研究中具有良好的应用前景。利用草丁膦抗性基因bar为筛选标记,构建了组成性表达绿色荧光蛋白基因egfp的载体pBG,并转入球孢白僵菌获得成功表达。将转化子接种菜青虫进行生物测定表明,组成性表达egfp不影响球孢白僵菌的毒力。进一步利用冰冻切片和荧光显微观察技术监测球孢白僵菌侵染寄主行为,结果显示,通过荧光观察可清楚的检测到病原菌在昆虫体表的附着、菌丝穿透体壁以及菌丝从寄主体内长出等侵染过程。由此表明,GFP可有效用于球孢白僵菌的遗传标记,进行病原菌的鉴别、侵染致病机理及相关功能基因的表达模式研究。; 金凯张永军罗志兵林健文裴炎; 关键词：昆虫病原真菌冰冻切片荧光检测

转基因球孢白僵菌发酵产物对野生菌株的增效作用被引量：6: 2006年; 研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产物,可使野生菌株对桃蚜的致死中浓度降低4倍以上,共毒系数(CTC)达404.6。但发酵产物经121℃处理20min,增效作用完全丧失。用饱和硫酸铵沉淀蛋白质分别将透析后的重溶蛋白质和上清液用于增效作用测定,结果证明增效成分主要是蛋白类物质。将梯度稀释的发酵产物与浓度为1×107孢子/mL的野生菌株孢子悬浮液混合进行生物测定,发现各处理的致死中时与CDEP-1的活性呈负相关,相关系数为-0.8946。由此推断,发酵产物中的增效物质主要是目的基因表达产物CDEP-1。; 张永军金凯罗志兵蒋小东裴炎; 关键词：球孢白僵菌发酵产物

高毒力杀虫真菌基因工程菌株选育的进展与方向被引量：5: 2011年; 病原真菌主要通过体壁侵染昆虫,在害虫防治中具有重要作用。利用昆虫病原真菌研制杀虫真菌农药的主要技术难点是选育高毒力杀虫真菌工程菌,本文综述了高毒力杀虫真菌工程菌构建技术的现状和菌株选育的进展,分析了其中存在的问题。根据昆虫病原真菌致病机制、害虫新靶标发现等方面的研究进展,提出了高毒力杀虫真菌工程菌选育技术的发展方向。; 夏玉先罗义辉金凯; 关键词：菌株选育基因工程毒力

诱导胚状体形成和植物再生的植物双元表达载体及其构建方法和应用: 本发明公开了一种诱导胚状体形成和植物再生的植物双元表达载体，包含BBM基因和FLP-FRT位点特异性重组系统，FLP-FRT位点特异性重组系统包含FLP基因和两个同向FRT位点，BBM基因和FLP基因位于两个同向FRT位...; 邓伟李正国杨迎武罗克明金凯; 文献传递

一种真菌表达载体及其构建和筛选方法: 一种真菌表达载体，所述表达载体为由pEX质粒表达载体和作为筛选标记的酸性海藻糖酶基因构成的组成性表达载体；其中质粒表达载体pEX是将表达载体pBarEx中的Bar基因去掉而成的，筛选标记基因为ATM或ATA等酸性海藻糖酶...; 夏玉先金凯彭国雄; 文献传递

一种真菌表达载体及其构建方法: 本发明涉及一种含有超表达真菌转录调控因子Som1的真菌表达载体。所述表达载体为由绿色荧光蛋白基因gfp、超表达真菌转录调控因子Som1基因和pBarEx质粒表达载体构成的组成性表达载体。本发明真菌表达载体的构建方法巧妙、...; 金凯夏玉先杜彦茹; 文献传递

一种多重基因表达的分析方法: 一种多重基因表达的分析方法，其特征在于：首先提取总RNA，利用各个基因相对应的嵌合引物，反转录获得各个基因的cDNA混合物，所述嵌合引物由含特定酶切位点的通用引物和各基因特异引物组成；然后利用包括所述含有特定酶切位点的通...; 夏玉先金凯郑小莉; 文献传递

球孢白僵菌T-DNA突变体库的构建及高温和高渗敏感型突变体的筛选(英文)被引量：5: 2009年; 【目的】筛选对高温和高渗等逆境胁迫敏感的球孢白僵菌T-DNA随机插入突变体,并克隆相关基因,为研究杀虫真菌适应逆境的分子机理奠定基础。【方法】利用逆境胁迫的方法从球孢白僵菌的T-DNA随机插入突变库中筛选对高温和高渗敏感的突变体,进而利用YADE(Y-shaped adaptor dependent extension)技术克隆相关基因。【结果】筛选得到5个对高温和高渗敏感的突变体。其中2个(212和2550)对高温敏感,在32℃下生长完全受抑;其它3个突变体对高渗胁迫敏感。突变体212的分生孢子对逆境胁迫的抗性也显著降低。与野生菌株相比,分生孢子经紫外线、高温和氧胁迫后,其存活率分别下降了23%、52%和21%。突变体212和2737对桃蚜的致死率(接种浓度为1×107个孢子/mL)分别下降了12%和40%。T-DNA侧翼序列分析显示,突变体212和2737的2个功能未知基因的编码框被T-DNA随机插入阻断,而其它3个突变体的T-DNA插入位点位于非编码区域。【结论】本研究结果表明,利用T-DNA随机插入突变筛选高温与高渗等逆境相关突变体,进而克隆相关基因是一种行之有效的方法。; 罗志兵张永军金凯马金成王芯裴炎; 关键词：球孢白僵菌插入突变高温

.蝗绿僵菌氰化物水合酶基因MaChy的克隆及表达分析被引量：1: 2012年; 采用筛选cDNA文库的方法,首次克隆了蝗绿僵菌氰化物水合酶基因MaChy的全长cDNA序列和DNA序列,序列分析表明,蝗绿僵菌氰化物水合酶基因MaChy不含内含子,开放阅读框(ORF)为1,074bp,编码357个氨基酸,推测蛋白的分子量为39.78kDa,等电点(pI)为5.53;利用在线软件分析表明,该蛋白既不是分泌型蛋白也不是膜蛋白;同源性比对结果表明,该蛋白与其他真菌中的氰化物水合酶蛋白的同源性较高,具有高度保守的催化三联体特征。用qRT-PCR方法分析了该基因在蝗绿僵菌侵染昆虫过程中的表达情况,结果表明,MaChy在蝗绿僵菌侵染穿透昆虫体壁阶段的表达量最高,约为体内阶段表达量的2.5倍,推测该基因可能在蝗绿僵菌穿透昆虫体壁的过程中起重要作用。; 姚秀清金凯夏玉先; 关键词：QRT-PCR