陈俊华
- 作品数：6 被引量：25H指数：4
- 供职机构：扬州大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金高等学校科技创新工程重大项目江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及鉴定被引量：2
- 2007年
- 应用淋巴细胞杂交瘤技术,以纯化的原核表达产物His-ChIFN-γ作为免疫原,以纯化的GST-ChIFN-γ作为检测原,制备抗鸡γ-干扰素(ChIFN-γ)mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和ECL法鉴定单克隆抗体(mAb)的生物学特性。获得4株可稳定分泌抗ChIFN-γmAb的杂交瘤细胞株1G10、2C3、3E5、3E3,其腹水ELISA效价为2×104~8.2×105;Ig亚类分别为IgG1、IgG1、IgG1和IgG2a。Dot-ELISA和ECL试验结果均表明:4株mAb只与表达ChIFN-γ的重组大肠杆菌反应,而与未表达ChIFN-γ的菌株不反应,表明4株mAb均特异性针对ChIFN-γ。鸡脾脏淋巴细胞经PMA刺激后,经固定、破膜,用mAb 2C3标记,利用流式细胞术可成功地检测到表达ChIFN-γ的T淋巴细胞。mAb为家禽的免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节等研究提供依据。
- 戴华郑佳玉胡茂志陈俊华潘志明焦新安
- 关键词：Γ-干扰素单克隆抗体流式细胞术
- 新城疫病毒F基因在大肠杆菌中的高效表达及其免疫原性分析被引量：4
- 2009年
- 应用PCR技术,以含有新城疫病毒F48E8株全长融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pVAX1-F为模板,扩增出594bp大小的F基因的部分片段。经克隆筛选和测序后,构建成重组原核表达质粒pGEX-6P-1-F。重组质粒转化表达菌BL21,获得重组菌BL21(pGEX-6P-1-F)。经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,F基因在原核表达体系中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的23%。Western blotting结果显示,在相对分子质量46ku位置有特异性条带。动物实验结果表明,F蛋白免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体效价显著高于空白对照组(P<0.05),说明原核表达系统表达的F蛋白具有良好的免疫原性。
- 游猛潘志明耿士忠文科陈俊华张磊方强蔡雯婷焦新安
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白原核表达免疫原性
- 制备单克隆抗体的一种新的免疫方法被引量：5
- 1997年
- 制备单克隆抗体的一种新的免疫方法＊严华１童鲲１申厚风１张跃１陈俊华１诸葛末伊２单秋３制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的第一步也是最重要的一步是免疫动物。常规免疫法的缺点是免疫原用量大、免疫程序长、容易引起非特异性免疫反应等［１，２］。为克服这些缺点，已有报...
- 严华童鲲申厚风申厚风陈俊华张跃单秋
- 关键词：单克隆抗体免疫方法
- 鸡α干扰素基因的原核表达及其活性测定被引量：5
- 2009年
- 应用RT-PCR技术,从被刺激诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因cDNA,经克隆和测序后,构建原核表达重组质粒pGEX-proChIFN-α(全长序列)和pET-ChIFN-α(不含信号肽序列),并分别转化相应的表达菌。重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,ChIFN-α基因均获得表达,重组蛋白大小分别为45ku、26ku左右,表达的蛋白以包涵体形式存在。表达产物经变性、提纯、复性,重组蛋白的含量约为1mg/mL。复性后的ChIFN-α能够在鸡胚成纤维细胞上抑制H5N1禽流感病毒的复制;用水泡性口炎病毒检测结果表明,重组ChIFN-α具有较高的抗病毒作用,其生物学活性达到2×106u/mg。
- 戴华郑佳玉陈俊华潘志明焦新安
- 关键词：原核表达抗病毒活性
- 鸡白细胞介素4基因的克隆及其原核表达被引量：8
- 2008年
- 应用RT-PCR技术,从被诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡白细胞介素-4(ChIL-4)基因cDNA,经克隆筛选和测序后,构建出重组质粒pGEX-6P-ChIL-4和pET-ChIL-4,分别转化相应的受体菌,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,结果表明ChIL-4基因在上述载体中均获得表达,融合蛋白大小分别为38ku和18ku,Westernblot结果也显示,在相对分子质量38ku和18ku位置有特异性条带。这为重组ChIL-4的规模化生产、疫苗佐剂的研制及其单克隆抗体的制备奠定了基础。
- 戴华郑佳玉陈俊华孙林潘志明焦新安
- 关键词：CDNA克隆
