陈新国
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：新疆农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 牛促卵泡激素基因克隆筛选和序列分析
- 1992年
- 从牛垂体中分离出总mRNA,经逆转录酶及大肠杆菌DNA聚合酶合成双链cDNA,经T4DNA聚合酶切成平末端后与Sma I酶切的pUC19连接,转化JM83,构建了脑垂体mRNA的cDNA文库。用标记的牛促卵泡激素基因的寡核苷酸片段进行杂交,从文库中筛选到几个阳性克隆,其中一个含有全长的牛促卵泡激素基因编码序列。利用PCR扩增技术从cDNA中扩增出了387bp的牛促卵泡激素基因,序列分析表明,10号克隆中的牛促卵泡激素基因含有起始密码ATG及终止密码TAA,所编码的氨基酸序列与天然牛促卵泡激寡素的氨基酸序列相同。
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- 关键词：促卵泡激素CDNA克隆
- 牛生长激素cDNA的表达与检测被引量：1
- 1997年
- 利用低融点琼脂糖凝胶电泳，回收牛生长激素cDNA全序列，克隆于原核表达载体pT7－7中T7启动子下游，转化大肠杆菌E．coliDH5a经分离，酶切分析，获得6个牛生长激素重组质粒pTGH1-6，选取其中两质粒pTGH1-2，转化E．coliK83／pGP1－2，42℃诱导30min，收集，破裂菌体，SDS－PAGE电泳检测，于22KD处有一特异性蛋白带，经ShamadzuCS930扫描测定，其表达量为全菌体蛋白的22％，Western—blot检测为阳性。
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- 关键词：生长激素
- 猪脑垂体基因文库构建和促卵泡激素基因克隆的筛选
- 1991年
- 用甘油分级梯度离心法纯化噬菌体入EMBL_4,将纯化的EMBL_4DNA用BamHI/SaLI双酶切。用蛋白酶K及SDS法提取猪大分子DNA,Sau 3A部分酶切,将15-20Kb的“目的”DNA片段与载体连接,体外包装成噬菌体,构建了猪的基因文库。所得重组子值为1.38×10~6pfu,超过了建库要求的理论值,将基因文库DNA分成十份,用^(32)P标记合成的促卵泡激素基因寡核酸探针进行分子杂交,筛选出强杂交组分,进一步从强杂交组分中筛选出了几个阳性克隆。
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- 关键词：基因文库促卵泡激素
- 牛促卵泡激素α亚基cDNA的克隆与序列分析被引量：13
- 1998年
- 从牛脑垂体中提取总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，反转录获得ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增获得长为３８０ｂｐ的牛促卵泡激素α亚基ｃＤＮＡ片段，将它克隆于ｐＵＣ１９中，进行序列分析，结果表明：所克隆的α亚基基因编码区序列与Ｅｒｗｉｎ所发表的序列基本相同，仅编码第２４位赖氨酸的密码有差异，同时将所获基因的核苷酸序列及相应氨基酸序列与人、啮齿类的同类基因相比较，具有很高的同源性．
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- 关键词：促卵泡激素Α亚基CDNA
- 黄地老虎颗粒体病毒启动基因功能研究
- 1995年
- 黄地老虎颗粒体病毒（ＡＳＧＶ）０．９ｋｂ的启动基因片段，经ＢＡＬ３１核酸外切酶修饰，ＤＮＡ聚合酶１大片段补平，克隆到大肠杆菌启动子探测质粒ＰＫＫ２３２－８ＳｍａⅠ位点，得到抗氯霉素转化子，其中一株可抗氯霉素１５００μｇ／ｎｄ。核苷酸序列分析证实，其长度为５７１ｂｐ，５’端被删除２５８ｂｐ，３’端被删除１５０ｂｐ，启动功能没变，删除后的５７１ｂｐ内含相似于杆状病毒蛋白基因启动子的１４ｂＰ保守序列（ＴＡＡＡＴＴＡＡＧＴ－ＴＡＡＴ）和增强子的核心序列－ＡＣＴＣ－，－ＧＣＴＣ－。
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- 关键词：黄地老虎颗粒体病毒
- 新疆鸡传染性法氏囊病病毒生物学特性的研究被引量：3
- 1999年
- 应用鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）从新疆地区分离到３株细胞适应株，对其进行了理化特性和血清学特性的鉴定。结果表明３个毒株能抵抗氯仿，耐热（５６℃１小时）、（７０℃１小时或８０℃１小时）、耐酸（ｐＨ２）、对碱（ｐＨ１２）敏感。但与国内已报道的毒株相比，对热（７０℃）和碱（ｐＨ１２，３７℃１小时）的抵抗力则更强些，在这些条件下均不能完全灭活。血清中和试验表明均为ＩＢＤＶ血清Ｉ型。交叉中和试验表明，分离的３株毒株有１株和另外２株是不同的血清亚型，确证了新疆也存在ＩＢＤＶ血清亚型。３株病毒在ＣＥＦ上连续传代已基本致弱，其细胞培养液接种鸡能产生相应的免疫抗体。
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- 关键词：生物学特性IBDIBDV
- 利用生物技术生产牛促卵激素的研究被引量：14
- 1995年
- 从牛脑垂体中分离出mRNA,经反转录酶合成cDNA.利用PCR基因扩增技术,从cDNA中成功地扩增了牛促卵泡激素(bFSH)的β-亚基DNA.经序列分析证明所编码的氨基酸序列与天然bFSH的氨基酸序列相同.采用PCR扩增突变技术,去除真核信号肽,插入PGEX-2T表达载体,得到40 ku高效表达的融合蛋白,表达量占湿菌体的20％以上.用超声波破碎提取重组bFSH融合蛋白,凝血酶切除GST,得到14ku bFSH纯品,Western Blot检测呈阳性结果.用小鼠和幼兔做生物学活性检测,有一定的活性.
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- 关键词：CDNA合成PCR扩增促卵泡激素生物技术
