陈晓武
- 作品数：53 被引量：126H指数：7
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 牙鲆肝脏抗菌肽-2的基因序列和表达分析
- 牙鲆是我国重要的海水养殖鱼类之一，属近海温水性底栖鱼类。近年来，牙鲆的海水养殖和淡水驯化均发展迅速。本研究对LEAP-2基因在牙鲆的不同发育时期和成鱼不同组织中的表达进行了研究，为了解牙鲆免疫功能和免疫机制积累了一些资料...
- 李倩施志仪陈晓武江山
- 关键词：牙鲆基因序列基因表达免疫功能
- 文献传递
- 三角帆蚌alpha-2巨球蛋白cDNA全长的克隆及表达特征被引量：10
- 2008年
- alpha-2巨球蛋白是河蚌体内重要的天然免疫因子,参与广泛的免疫防御和调节。通过RACE法克隆了三角帆蚌α2M全长cDNA序列,提交Genbank,获得核苷酸序列登陆号:DQ993157.1。同时,采用生物信息学方法对alpha-2巨球蛋白进行了系统分析。该基因cDNA全长5124bp,其中编码区4836bp,5′端非编码区35bp,3′端非编码区为253bp(含polyA尾31bp),该基因能编码1611个氨基酸,其中前23个氨基酸残基为信号肽序列,成熟蛋白分子量为177571.8u,等电点为5.49。蛋白的不稳定系数为39.53,表明该蛋白是稳定的。在此基础上,以18S作为内标,利用半定量RT-PCR法检测α2M基因在三角帆蚌不同组织和不同生理状态下的表达情况。结果表明,alpha-2巨球蛋白仅在血细胞中有表达,而在外套膜、闭壳肌、肠和性腺中没有表达。经注射大肠杆菌和嗜水气单胞菌12h后,三角帆蚌体内α2M的表达水平都有一定量的升高,证明α2M是三角帆蚌基础免疫系统中的组成部分。本研究丰富了软体动物免疫学研究内容,为三角帆蚌抗病机理提供理论资料。
- 施志仪杨显祥陈晓武李勇
- 关键词：三角帆蚌基因表达
- 中华鳖胃肠道5-羟色胺和胃泌素内分泌细胞的免疫细胞化学研究被引量：5
- 2006年
- 采用ABC免疫细胞化学法,对中华鳖(Trionyx sinensis)胃肠道5-羟色胺(5-HT)细胞和胃泌素(Gas)细胞的分布和形态进行了观测,并比较了冬眠期和活跃期的分布差异。结果显示,5-HT细胞在胃和肠道各段均有分布,在胃分布于胃腺,在肠则分布于黏膜上皮。在胃的前部和中部,5-HT细胞位于胃腺各部,而在胃的后部,5-HT细胞则主要集中于胃腺的上部和胃小凹底部。在肠道中,由前向后5-HT细胞的分布呈递减趋势,且大部分细胞呈上窄下宽的锥体形、梨形等,顶端伸达肠腔,为开放型内分泌细胞,少数细胞为封闭型。前、中部胃腺中,Gas细胞的分布数量较多,且位于腺细胞之间,一般为开放型。后部胃腺中Gas细胞数量减少。胃黏膜上皮和肠道中未见Gas细胞的分布。与活跃期相比,冬眠期Gas细胞的分布情况变化不大,但5-HT细胞的分布数量显著减少。
- 苏泽红陈晓武柳金雄陈秋生
- 关键词：中华鳖胃肠道5-羟色胺胃泌素免疫细胞化学
- 牙鲆弹性蛋白酶cDNA全长和蛋白质结构分析(英文)
- 2009年
- 为研究牙鲆丝氨酸蛋白酶家族的功能和及其家族的分子进化规律,从本实验室已构建的牙鲆肝胰脏cDNA文库进行了部分测序,从而筛选出一个弹性蛋白酶新成员:弹性蛋白酶5。在此基础上,结合Genbank数据库中已经提交的胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶,对三者蛋白质进行了序列分析和三维结构的比较。牙鲆弹性蛋白酶cDNA包含一个完整的读码框(提交Genbank的登录号为EU873084)。其编码区平均GC含量为54%,推测编码的蛋白质包含296个氨基酸,分子量为29.04KD,等电点为6.14。蛋白序列比较表明它和牙鲆弹性蛋白酶3相似性最高。通过同源建模得到弹性蛋白酶5的三维结构和牛胰凝乳蛋白酶结构相似,包含了2个α螺旋、13个β折叠和13个转角结构。牙鲆弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶中底物结合区的3个关键氨基酸有明显的区别,这些氨基酸的变化改变了底物结合位点开口的大小,胰凝乳蛋白酶2的三个关键氨基酸和牛胰凝乳蛋白酶相同,该区域能接受结构较大的芳香族氨基酸;胰蛋白酶3能更好的结合阳性氨基酸Lys或Arg;而弹性蛋白酶开口很小,只能结合小的残基。上述结果证明了牙鲆丝氨酸蛋白酶家族中的弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶底物结合位点的结构差异决定了其对底物选择的特异性。
- 陈晓武施志仪
- 关键词：牙鲆弹性蛋白酶同源建模
- 雌性双峰驼生殖道粘膜免疫组织和细胞的结构与分布被引量：2
- 2001年
- 应用光镜和透射电镜观察 12峰雌性双峰驼生殖道粘膜免疫组织和细胞的结构与分布。结果显示 ,输卵管、子宫和阴道的粘膜上皮以及子宫腺上皮内普遍分布着上皮内淋巴细胞 (IEL) ,尤其在子宫颈后段和阴道前段的上皮中可见淋巴细胞浸润现象。从输卵管伞到阴道 ,固有膜内分布有数量不等的固有层淋巴细胞 (LPL)、浆细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞 ,在子宫角、子宫体和子宫颈固有膜中还出现淋巴小结 ,小结内含有一种成群分布的强嗜伊红细胞 ,细胞大而有突起。子宫颈粘膜上皮和腺上皮内还见嗜中性粒细胞 ,这些细胞有时充满于子宫颈腺腔内。在子宫 (尤其子宫角 )固有膜深层和浅肌层分布着成群的肥大细胞 ,肥大细胞在孕驼子宫内明显减少。母驼生殖道粘膜形成的众多皱襞和腺体大大增加了上皮表面积 ,进而增大了粘膜免疫组织和细胞的数量。结果提示 。
- 陈秋生苏泽红陈晓武
- 关键词：双峰驼雌性生殖道粘膜免疫组织免疫细胞
- 牙鲆生长抑素基因的表达及细胞定位被引量：2
- 2012年
- 采用RACE和荧光定量PCR技术克隆牙鲆生长抑素(SS)基因cDNA序列并且分析了其在仔鱼期的表达规律,同时通过免疫细胞化学染色,对牙鲆胃肠道和脑垂体等器官的生长抑素分泌细胞进行定位。最终获取包含完整编码区的牙鲆SS基因cDNA序列,其编码区长为381 bp,推测编码的蛋白质为126个氨基酸,其前23个氨基酸为信号肽,分子量为14.3 ku,理论等电点为8.33。牙鲆仔鱼不同发育时期的SS基因表达量比较结果表明,出膜后仔鱼体内SS基因表达不断增加,到变态发育期变化不大,变态后期又开始显著增加。免疫组织化学染色结果表明,SS细胞存在于胃、胰腺和脑垂体中。在胃中,生长抑素分泌细胞主要分布于胃上皮层;在胰腺中,生长抑素分泌细胞零散地分布,血管周围较多;在脑垂体中细胞密度高,集中在腺垂体的周边区域。
- 陈晓武施志仪江山李倩
- 关键词：牙鲆生长抑素免疫组化
- 内脏团插核术刺激对三角帆蚌血细胞的影响被引量：8
- 2010年
- 为了探讨三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)血细胞的类型及内脏团插核手术刺激对血细胞形态结构和数量的影响,研究利用相差显微镜、光学显微镜、透射电子显微镜和流式细胞仪对三角帆蚌血细胞进行了形态学研究。流式细胞术光散射图谱显示血细胞被分两类,一类为颗粒度高的大细胞,另外一类为颗粒度低的小细胞;相差显微镜观察显示,血细胞可分为胞体暗、折光性差和胞体明亮、折光性强的两类;Giemsa和H.E染色显示细胞分为胞质染色不均一、胞内颗粒明显和胞质染色均一、胞内颗粒不明显的两类;透射电镜超薄切片观察显示,颗粒明显的细胞胞质内线粒体、高尔基体等细胞器较丰富,颗粒不明显的细胞胞质内细胞器较少;负染结果表明血细胞主要分为表面不光滑、突起明显和细胞表面光滑、突起较不明显的两类。综合上述实验结果可见,三角帆蚌血细胞分为颗粒明显的细胞和颗粒不明显的透明细胞两大类。内脏团插核术刺激后,血细胞的形态和比例均发生显著变化。血细胞形态更多样,伪足状突起更明显,细胞内囊泡状物质增多,血细胞密度显著增高(P<0.01),颗粒细胞数量相对增加,透明细胞数量相对减少,并且手术刺激后两类细胞所占比例的变化在相差显微镜观测中差异极显著(P<0.01)。研究表明,作为三角帆蚌免疫系统重要组成部分的血细胞,在插核手术后,其类型、形态结构和数量均产生明显变化,这是机体对外界刺激产生的免疫防御反应,其中颗粒细胞担负着主要的免疫功能。
- 何秀娟施志仪陈晓武程千千
- 关键词：三角帆蚌血细胞
- 牙鲆碱性磷酸酶cDNA序列分析与蛋白质高级结构预测被引量：8
- 2007年
- 为研究碱性磷酸酶(EC3.1.3.1;alkaline phosphatase,ALP)在牙鲆(Paralichthys Olivaceus)发育和变态中的作用,采用RACE的方法克隆了牙鲆ALP基因cDNA全长,通过生物信息学分析了核苷酸序列并进行蛋白结构预测.结果表明,牙鲆ALPcDNA全长为1811bp,能编码476个氨基酸的蛋白质,分子量为52293.1,等电点为7.67.编码区核苷酸GC含量在ALP同源基因中差异比较大,脊椎动物明显高于非脊椎动物和细菌.分子系统分析显示,牙鲆ALP和青黑斑河豚(Tetraodonnigroviridis)、斑马鱼(Danio rerio)的组织非特异性ALP有较高的同源性,分子进化树和物种进化树是一致的.在蛋白序列中的一些重要的功能位点,包括金属离子结合位点、N糖基化位点和丝氨酸磷酸化位点等表现了较高的保守性.牙鲆ALP和人胎盘ALP(PALP)在蛋白序列上有43%的相似性,其3D结构非常接近.通过氨基酸空间位置比较发现,牙鲆ALP中141和203位半胱氨酸对应于人PALP的121和183位半胱氨酸,推测能形成一个二硫键.在两者酶活性中心,3个金属离子结合的氨基酸残基非常保守,Zn离子周围的9个氨基酸中有2个不同;Mg离子周围的7个氨基酸也只有2个不同,包括一对类似的丝氨酸155和苏氨酸175.
- 陈晓武施志仪
- 关键词：牙鲆碱性磷酸酶蛋白质结构预测生物信息学
- 西伯利亚鲟侧线神经丘发育过程的观察
- 2011年
- 研究对西伯利亚鲟(Acipenser baerii)的胚后幼鱼进行石蜡切片HE染色,同时利用荧光染料DiA[4-(4-Diethylaminostyryl)-1-methylpyridinium iodide]对侧线管中侧线神经丘毛细胞特异性标记的特点,示踪了西伯利亚鲟胚后仔鱼各个时期侧线神经丘分化发育的过程。结果显示,西伯利亚鲟侧线管内侧线神经丘毛细胞如纤毛状,呈竖立紧密排列。出膜3d仔鱼眼眶后神经基板发育分化活动剧烈,出膜10d的仔鱼眼眶后方的神经基板分化出眼眶上下侧线神经丘的两个分支,同时眼眶后神经基板进一步向后分化发育在眼眶后部形成躯干侧线神经丘,但整个侧线神经丘还未完全发育完成,待出膜15d时,眼眶上下和躯干侧线神经丘已基本发育完全,出膜22d的仔鱼侧线神经丘发育基本完成。研究为今后深入研究西伯利亚鲟侧线发育过程中的神经分化发育、细胞迁移奠定了初步形态学基础。
- 程千千施志仪陈晓武宋佳坤轩兴荣
- 关键词：毛细胞发育
- 鳜颌骨重塑发育基因Bmp4的克隆与表达分析被引量：1
- 2020年
- 骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein,Bmp4)在骨骼形态发育、修复与再生中发挥着重要作用。本研究从鳜仔稚鱼上下颌形态发育入手,利用软骨-硬骨双染色技术观察了鳜仔稚鱼上、下颌骨形态发育过程,并采用RACE技术克隆了Bmp4的c DNA序列,原位杂交定位分析了不同发育阶段Bmp4在上下颌骨表达特征。结果表明,鳜仔稚鱼上下颌相对长度呈现连续性变化,即20日龄以前,上颌长于下颌,20日龄,上下颌等长,25日龄,下颌明显长于上颌。鳜下颌齿骨于4日龄首先开始软骨发育,上下颌骨于15日龄开始骨化发育,在发育过程中存在重塑现象,即前期上颌骨与前颌骨长于下颌齿骨,22日龄后两者等长,29日龄后下颌齿骨略长于前颌骨;前颌骨、上颌骨与齿骨在发育过程中形态发生变化。Bmp4 cDNA序列全长为2169 bp,包括683 bp的5’非翻译区(5’UTR)、274 bp的3’非翻译区(3’UTR),以及长1212 bp编码403个氨基酸的的开放阅读框(ORF)组成。原位杂交结果显示:15日龄,Bmp4在前颌骨与上颌骨的杂交信号明显强于下颌齿骨,且信号主要集中于近口裂端;22日龄,所有颌骨均有杂交信号,无显著差别;29日龄,下颌齿骨信号稍强于上颌骨与前颌骨。本研究结果表明鳜仔稚鱼基因Bmp4参与其颌骨重塑调控,颌骨重塑发育与其不同阶段的摄食行为相关。
- 曹晓颖马晨夕夏星张瑞祺陈晓武赵金良
- 关键词：BMP4原位杂交
