于春梅
- 作品数：10 被引量：76H指数：7
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家水禽产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目山东省农业重大应用技术创新课题更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭黄病毒感染逆转录半套式PCR检测方法的建立被引量：15
- 2012年
- 根据GenBank发布的黄病毒Bagaza毒株的NS3基因的保守序列设计了3条引物,建立了一种适用于鸭黄病毒的半套式PCR快速检测方法。采用该方法对鸭黄病毒山东分离株进行检测,结果半套式PCR对2株分离株均能扩增出277bp的特异性条带,而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒的扩增结果均为阴性;经检测该方法第1次扩增的敏感性为1×105拷贝/μL,第2次扩增的敏感性为1×102拷贝/μL,第2次扩增的敏感性比第1次高103倍;该方法对山东省各地采集的24份疑似病料可检出22份阳性。表明本试验所建立的套式PCR方法可用于鸭黄病毒感染的临床诊断和流行病学调查。
- 唐熠刁有祥高绪慧于春梅张大丙岳澄滨
- 关键词：鸭黄病毒
- 探针检测鸭黄病毒的地高辛标记DNA的制备与应用被引量：17
- 2012年
- 利用RT-PCR方法扩增鸭黄病毒的NS3基因406bp的特异性片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备核酸探针。特异性试验结果表明,该探针仅与鸭黄病毒的核酸特异性杂交,而与鸭瘟病毒、H9N2禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒的核酸杂交均为阴性。敏感性试验表明,该探针对鸭黄病毒的RNA最低检出限量为100μg/L。对疑似黄病毒感染鸭的肝脏、肺脏、脾脏、输卵管、卵泡膜和泄殖腔棉拭子进行检测,以卵泡膜的检出率最高。该研究为鸭黄病毒感染的诊断和流行病学调查提供了一种可靠的方法。
- 高绪慧刁有祥唐熠于春梅张大丙岳澄滨
- 关键词：地高辛核酸探针
- 鸭坦布苏病毒山东株的分离鉴定及其特性被引量：11
- 2014年
- 采用鸭胚尿囊腔接种、盲传的方法从山东某地区以瘫痪为主要特征的雏鸭脑组织中分离到1株病毒,并对分离病毒的生物学特性和理化特性进行了研究。结果显示,该病毒与GenBank上已发表的坦布苏病毒核苷酸同源性均高于98%,最高可达99.7%;病毒的ELD50为10-3.17/0.2mL,接种9日龄鸭胚,68h左右鸭胚死亡,胚体出血,肝脏肿大出血,尿囊膜增厚;病毒对胰蛋白酶、酸、氯仿和热敏感,0.5%的胰蛋白酶、pH<5和4.8%的氯仿条件下可将其灭活,56℃水浴20min或60℃水浴15 min可将其灭活,37℃处理24h毒力由10-3.17/0.2 mL下降至10-1.8/0.2mL;Mg2+不能提高病毒在50℃60min的稳定性;病毒未经酸碱处理不具有凝集鸡、鸭、鸽等红细胞的特性。接种7日龄雏鸭,48h后陆续发病,表现为病毒性脑炎;剖检变化为雏鸭脑水肿,脑部毛细血管充血、肝脏出血、腺胃出血、肺出血水肿,临床表现与自然发病相同。结果表明,该病毒分离株为坦布苏病毒。
- 葛平萍刁有祥唐熠刘鑫高绪慧于春梅曲俊姿
- B亚型禽偏肺病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：8
- 2014年
- 根据GenBank登录的B亚型禽偏肺病毒（JN224985．1）F基因序列设计1对特异性引物，经RT—PCR扩增出214bp的目的片段。回收目的片段并与pMD18-T载体连接后转化到基因工程菌DH5a中，提取重组质粒，经PCR、酶切及测序鉴定后，筛选出阳性质粒作为模板，建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线，并做敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明，标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，产物T值在83．0～83．7℃之间，灵敏度为7．9×10^2拷贝／μL，特异性和重复性较好。本试验建立了检测B亚型禽偏肺病毒的sYBRGreenI荧光定量PCR方法，为该病的早期诊断以及感染程度的定量分析奠定了基础。
- 王丽荣刁有祥唐熠鞠小军于春梅
- 关键词：SYBR
- 坦布苏病毒的分离鉴定及荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
- 坦布苏病毒感染是由坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）引起的一种以蛋鸭产蛋量下降和雏鸭神经症状为主要特征的传染性疾病。主要表现为发生迅速、流行范围广、传播速度快、发病率和死亡率都较高，严重威胁我国养鸭业的发...
- 于春梅
- 关键词：雏鸭蛋鸡
- 文献传递
- 坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：27
- 2012年
- 【目的】利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测坦布苏病毒的方法。【方法】针对坦布苏病毒NS5、E基因分别设计了1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin引物,将PCR扩增的片段分别连接到pMD18-T载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中NS5、E基因及内参基因β-actin标准曲线的构建,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性试验。【结果】结果显示标准曲线线性关系R2值均在0.99以上,检测极限约为1.0E+01拷贝数质粒DNA;特异性结果表明只能检测到坦布苏病毒的扩增曲线;批内和批间重复性试验的变异系数均小于0.5%;用已建立的方法对临床样品进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%。【结论】本研究初步建立了基于坦布苏病毒NS5、E基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR的方法,为养鸭场诊断和监测坦布苏病毒提供了一种新的特异、灵敏的检测方法。
- 于春梅刁有祥唐熠崔京腾高绪慧张颖鞠小军武利利
- 关键词：E基因SYBR
- 鸭坦布苏病毒山东株的分离鉴定及特性研究
- 采用鸭胚尿囊腔接种、盲传的方法从山东某地区以瘫痪为主要特征的雏鸭脑组织中分离到一株病毒,并对分离病毒的生物学特性和理化特性进行了研究。结果表明该病毒与GenBank上已发表的坦布苏病毒核苷酸同源性均高于98％,最高可达9...
- 葛平萍刁有祥唐熠刘鑫高绪慧于春梅曲俊姿
- 关键词：生物学特性
- 文献传递
- 鸭坦布苏病毒E基因环介导等温扩增检测方法的建立与应用被引量：10
- 2013年
- 根据GenBank发布的坦布苏病毒Bagaza毒株E基因的保守序列设计1套引物,建立了环介导等温扩增快速检测鸭坦布苏病毒的方法。该检测方法的敏感性可达10拷贝/μL;对鸭坦布苏病毒山东分离株的检测呈阳性,而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、鸭新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒扩增结果均为阴性;应用该方法对山东省各地采集的82份疑似病料进行检测,可检出72份阳性。表明本试验所建立的环介导等温扩增检测方法灵敏性高、特异性强、操作简便快速,可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。
- 欧全宾刁有祥唐熠高绪慧于春梅
- 关键词：E基因环介导等温扩增荧光染料
- 山东地区16株H9N2亚型禽流感病毒HA基因的序列分析被引量：5
- 2012年
- 为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)山东分离株的遗传变异情况,采用RT-PCR技术对16株从山东不同地区分离的H9N2亚型禽流感病毒的HA基因进行扩增、克隆和测序,并对所获得的HA全序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,16个分离株的裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;有7～9个潜在糖基化位点;受体结合位点除198位有变异,其他位点均较保守;234位氨基酸均为L,具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征;16个分离株HA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为96.3%～99.9%和97.1%～99.6%;16个分离株同属于欧亚分支中的A/Duck/Hong Kong/Y280/97亚群。
- 武利利刁有祥鞠小军于春梅崔京腾
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因
- 商品肉鸭免疫抑制病病原体共感染情况调查被引量：7
- 2013年
- 从山东省不同地区采集病、死肉鸭397份以及临床健康肉鸭200份,用特异性核酸探针对样品进行H9N2亚型禽流感病毒(H9N2AIV)、禽偏肺病毒(aMPV)、呼肠孤病毒(DRV)、鸭圆环病毒(DuCV)、传染性法氏囊病病毒(IB-DV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的检测。结果,自然发病肉鸭中H9N2AIV、aMPV、DRV、REV、DuCV、IB-DV检出率分别为57.43%、51.39%、38.54%、39.55%、29.47%、10.58%,且存在多重感染现象,二重和三重感染率分别为26.20%、18.89%,以aMPV和H9N2AIV、REV和DuCV检出率较高;而临床健康肉鸭群中H9N2AIV、aMPV、DRV、REV、DuCV、IBDV检出率均分别为7.00%、19.5%、15.5%、10.5%、24.00%、9.00%,呈阴性的和单一感染的样品分别占40.00%和28.00%;共感染率为32.00%,且主要是二重感染。上述结果表明,商品肉鸭群中普遍存在免疫抑制病病原体共感染的现象,这成为目前肉鸭发病和生长缓慢的重要流行病学因素之一。
- 张颖刁有祥宋晓娜鞠小军于春梅裴苹苹
- 关键词：共感染
