仲蕾
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：江苏省自然科学基金国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- URI基因稳定表达对肝癌SMMC-7721细胞增殖能力的影响
- 2013年
- 目的:瞬转以及筛选出能够稳定表达URI(RPB5-mediating protein)基因的SMMC-7721细胞株,以其为模型研究URI基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响。方法:首先,抽提URI的重组质粒并转染到SMMC-7721细胞中,在G418药物的筛选下选出能够稳定表达URI基因的细胞株,RT-PCR法和酶切检测该稳定细胞中URI基因的表达效率以确认URI是否稳定表达,MTT法和克隆形成实验检测URI基因对SMMC-7721细胞增殖的影响。结果:成功建立URI基因过表达的稳定细胞株。与SMMC-7721细胞对照组比较,其URI mRNA表达水平显著上调,能稳定表达URI细胞株的增殖,克隆形成率明显升高。结论:pFLAG-CMV-4-URI重组质粒能使URI在肝癌SMMC-7721细胞内稳定表达,过表达URI基因有可能帮助细胞通过G2/M期检验点来提高肝癌细胞SMMC-7721的增殖能力。
- 季辉王琦仲蕾魏文祥
- 关键词：肝癌细胞细胞增殖
- RMP基因干扰对肝癌细胞周期的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因干扰的稳定细胞株,研究RMP基因干扰对正常肝细胞及其肝癌细胞周期的影响。方法:构建RMP基因的短发卡RNA(short-hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGPU6-Neo-RMPi-484。通过脂质体转染的方法转染到SMMC-7721肝癌细胞中,G418筛选出干扰RMP基因的细胞株;RT-PCR检测RMP基因的表达;流式细胞仪PI染色检测细胞周期;RT-PCR检测周期相关基因的表达。结果:成功构建pGPU6-Neo-RMPi真核表达载体,筛选出稳定干扰细胞株,并且发现干扰RMP基因能够明显引起SMMC-7721肝癌细胞的G2/M期阻滞。结论:干扰RMP基因引起SMMC-7721肝癌细胞G2/M期阻滞,可能是通过下调G2/M期检验点相关基因CyclinB、P21和CDK1的表达实现的。
- 郭云兰杨慧翠连晓宁曹锴王晓婷仲蕾魏文祥
- 关键词：肝癌细胞细胞周期
- RMP基因的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的制备RPB5调节蛋白(RMP)抗体并研究RMP在60Coγ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达及功能。方法 RT-PCR检测HT-29、A549、Hep-2、SGC-7901、293T、HeLa、WI-38和SMMC-7721细胞株中RMP的表达;从质粒中PCR扩增得到人RMP基因并克隆至原核表达载体中,诱导表达后经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-RMP/D1,以该蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体;肝癌细胞SMMC-TT21、PFlaG-CMV4-SMMC-7721、PFlaG-CMV4-RMP-SMMC-7721经6 Gy 60 Coγ射线照射后,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的变化。结果RMP在以上细胞系中均有表达,但程度不同;SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人RMP片段。Western blot结果显示,制备的多抗可与RMP蛋白特异性结合;肝癌细胞株经6 Gy 60Coγ射线照射后,流式细胞术结果表明RMP使肝癌细胞SMMC-7721的凋亡减少。结论 RMP在不同细胞株中均有表达且能减少肝癌细胞SMMC-7727的凋亡,为RMP用于肝癌的基因治疗奠定了基础。
- 仲蕾王晓婷郭云兰王琦季辉魏文祥
- 关键词：多克隆抗体凋亡肝癌
- RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用
- 2011年
- 目的:研究RPB5调节蛋白(RMP)在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量60Coγ射线照射肝癌细胞SMMC-7721细胞和正常肝细胞HL-7702细胞,RT-PCR法检测RMP的表达,流式细胞技术检测照射肝癌细胞周期变化及细胞凋亡。应用RNA干扰技术研究RMP在肝癌细胞基因组稳定性中的作用。结果:正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP基因均有不同程度的表达。经60Coγ射线诱导的肝癌细胞及正常肝细胞RMP表达水平明显升高,且有一定剂量依赖性。随着照射剂量增加细胞凋亡明显增多,细胞周期G1期增高,而S期明显降低。RMP被干扰后,电子显微镜观察细胞形态发生明显改变,p21基因表达减弱。结论:RMP具有维持细胞基因组稳定性的潜在作用。RMP的表达与p53、p21等具有一定相关性,可能与后者协同调节细胞凋亡过程。
- 王晓婷李敏连晓宁杨慧翠曹锴郭云兰仲蕾魏文祥
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰放疗基因组稳定性
