吴剑宏
- 作品数：19 被引量：68H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腰椎间盘退变的MRI诊断分级及其临床应用进展被引量：28
- 2010年
- 腰椎间盘退变疾病是一种常见的疾病。目前临床上常用大体观查、组织学技术、X线平片、椎间盘造影、CT以及MRI等多种指标来描述椎间盘的退变[1]。近年来,随着MRI技术的不断改进：如定量MRI技术的应用以及软件的开发,MRI已成为诊断椎间盘退行性改变最精确的检查手段之一,鉴于其在椎间盘退变疾病的诊断中具有的特殊优势,笔者就腰椎间盘退变的MRI诊断分级及其临床应用进展综述如下。
- 吴剑宏阮狄克
- 关键词：腰椎间盘退变MRI技术椎间盘退行性改变组织学技术椎间盘造影X线平片
- 犬同种异体椎间盘复合髓核细胞移植初探被引量：1
- 2012年
- 目的：探讨同种异体椎间盘复合髓核细胞移植的转归，观察转人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应。方法：常规分离8周龄比格犬髓核细胞，将PKH-26标记的传2代髓核细胞（NPc）和转hTERT基因髓核细胞（hTERT—NPc）分别注射入冷冻保存的同种异体椎间盘内构建组织工程化同种异体椎间盘。选择12月龄同种犬18只随机分为3组，分别植入hTERT—NPc组织工程化的同种异体椎间盘（A组）、NPc组织工程化的同种异体椎间盘（B组）以及未组织工程化的同种异体椎间盘（C组）。每只犬于术后4、8、12周行正侧位X线片及MRI检查，观察移植椎间盘同宿主椎体愈合情况、移植椎间盘高度和信号变化情况：手术后12周麻醉状态下处死实验动物取L1～L7段脊柱标本进行生物力学测试，取移植椎间盘进行组织学观察。结果：X线及MRI检查结果显示3组移植椎间盘与宿主椎体均实现了良好的骨性融合，其中C组椎间盘术后出现了呈进展趋势的退行性改变，至移植后12周，其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于A、B两组（P〈0．05）。生物力学显示术后12周时，C组移植椎间盘在屈伸和旋转方向的活动度显著性大于A、B两组（P〈0．05），A组与B组无显著性差异（P〉0．05）。激光共聚焦显微镜观察到A、B组移植椎间盘髓核区域内有红色荧光细胞；光学显微镜下观察A、B两组移植椎间盘结构保持较好，外形类似软骨细胞的髓核细胞数量较多，排列较为规则；C组髓核形态保持欠佳，结构较为紊乱，髓核细胞数量明显减少，细胞形态欠饱满，退行性改变明显。RT—PCR分析显示术后12周时A组髓核内可检测到hTERTmRNA的阳性表达。结论：犬同种异体椎间盘移植后可在宿主体内存活，通过复合NPc可延缓椎间盘移植后的退行性改�
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：椎间盘退变椎间盘移植同种异体人端粒酶逆转录酶髓核细胞
- 重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因转染对人髓核细胞功能的影响被引量：2
- 2012年
- 目的:研究重组腺相关病毒介导人端粒酶逆转录酶基因(recombinant adenoassociated virus vector-me-diated human telomerase reverse transcriptase,rAAV-hTERT)转染对体外培养人髓核细胞功能的影响。方法:利用机械与酶消化的方法获得均一性的人椎间盘髓核细胞,将构建好的rAAV-hTERT转染P2代体外单层培养的髓核细胞。用重组腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adenoassociated virus vector-mediatedenhanced green fluorescent protein,rAAV-EGFP)作为标记基因观察细胞转染效率,按感染复数(multiplicity ofinfection,MOI)103、104、105病毒基因组拷贝数/细胞(vector genomes/cell,v.g/cell)设组,流式细胞仪检测,筛选病毒转染的最佳MOI;设立rAAV-hTERT转染组、AAV空病毒转染组及空白细胞对照组,用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reareaction,RT-PCR)及免疫印迹(Western-blot)方法检测rAAV-hTERT转染后hTERT基因在髓核细胞内的表达,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)及酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)检测髓核细胞合成Ⅱ型胶原及蛋白多糖能力的变化。结果:rAAV-EGFP转染细胞后第7天时,MOI为105v.g/cell组转染效率可达73.9%,明显高于MOI 103、104v.g/cell组(P<0.05);rAAV-hTERT转染组在转染后的第7、60、90、120天均可检测到hTERT基因的表达,而其他两组则无表达;转染rAAV-hTERT后120d之前,rAAV-hTERT转染组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原较其他两组均明显增高(P<0.05),而两对照组之间则始终无明显差异(P>0.05)。结论:rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染能有效延长髓核细胞分泌Ⅱ型胶原及蛋白多糖功能。
- 吴剑宏阮狄克王德利张超何勍王超锋张燕辛洪奎顾韬徐成刘玥
- 关键词：髓核细胞腺相关病毒
- 组织工程化同种异体椎间盘移植的动物实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察组织工程技术的运用能否延缓椎间盘移植后的退行性改变。方法将髓核细胞复合至同种异体椎间盘,体外培养后植入犬L4/L5椎间隙作为实验组(A组),对照组(B组)行同种异体椎间盘移植。使用影像学、生物力学及组织学分析评估植入椎间盘的转归并行组间比较。结果移植椎间盘可与宿主椎体实现骨性融合。对照组椎间盘术后退变明显,12周时其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于实验组,稳定性丧失明显;组织学观察发现实验组移植椎间盘结构保持较好,髓核细胞数量较多,排列规则;对照组髓核形态保持欠佳,结构紊乱,髓核细胞数量减少,退行性改变明显。结论通过复合种子细胞实现异体椎间盘的组织工程化可有效延缓椎间盘移植后的退行性改变。
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：椎间盘犬科
- 退变性脊柱侧凸的Lenke-Silva分级及治疗策略
- 吴剑宏阮狄克何勍
- 关键词：退变脊柱侧凸外科治疗
- 人端粒酶逆转录酶基因转染人髓核细胞的安全性研究
- 2012年
- 目的评价人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因转染对人椎间盘髓核细胞"安全性"的影响。方法将构建好的重组腺相关病毒人端粒酶逆转录酶基因(recombinant adeno-associated virus vec-tor-mediated hTERT gene,rAAV-hTERT)按感染复数(multiplicity of infection,MOI)105 v.g每细胞转染体外培养二代髓核细胞。设立rAAV-hTERT转染组,AAV空病毒转染组及未转染组;利用RT-PCR及Western-blot检测转染后hTERT基因的表达;对体外培养120 d的细胞进行染色体核型分析;将3组细胞(100μL,3×107/mL)分别注入裸鼠腋下检测其成瘤性,以人Hela细胞为阳性成瘤实验对照。结果成功检测出rAAV-hTERT转染髓核细胞后hTERT基因的表达;G-带核型分析未见染色体结构异常克隆;3组细胞均未观察到裸鼠体内肿瘤形成。结论 rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染髓核细胞在有限的体外培养过程中是安全的,可为进一步的在体研究提供安全性证据。
- 吴剑宏阮狄克王德利张超何勍王超锋张燕辛洪奎顾韬徐成刘玥
- 关键词：腺病毒科骨髓细胞基因疗法致癌性试验
- 人端粒酶逆转录酶基因转染对犬髓核细胞生物学活性的影响
- 2012年
- 目的观察2型重组腺相关病毒-人端粒酶逆转录酶(recombinant adeno-associated virus type-2human telomerase reverse transcriptase,rAAV2-hTERT)病毒载体转染对犬髓核细胞生物学活性的影响。方法实验组常规分离犬髓核细胞,rAAV2-hTERT病毒载体以1×105v.g/cell的复合感染转染犬髓核细胞。在转染后5、10、15、30 d及60 d分别以反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot方法检测髓核细胞中hTERT mRNA及蛋白的表达;利用实时定量PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分别检测髓核细胞蛋白多糖(proteoglycan,PG)、Ⅰ型和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2)mRNA及蛋白表达量。所有检测均与2型重组腺相关病毒-增强绿色荧光蛋白(recombinant adeno-associated virus type-2 enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染的髓核细胞(对照组)进行对比。结果 rAAV2可成功转染犬髓核细胞,在转染后5、10、15、30 d以及60 d,均可于基因和蛋白水平检测到hTERT基因在髓核细胞内的表达;而在所有观察时间点内,对照组未能检测到hTERT基因表达。RT-PCR显示在转染后的10～60 d,实验组PG、COL2 mRNA的表达量明显高于对照组细胞的mRNA表达,实验组与对照组在COL1 mRNA表达上无明显差别。ELISA测定蛋白多糖及COL2表达量提示:在转染后10 d,实验组髓核细胞PG、COL2的表达量显著增加;在转染后的10～60 d,实验组髓核细胞PG、COL2的表达量均明显高于对照组。结论使用rAAV2-hTERT病毒转染可成功实现体外培养条件下髓核细胞增殖能力及细胞外基质表达的上调,这将有可能为椎间盘退行性疾病的生物治疗提供更为理想的种子细胞选择。
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：髓核细胞人端粒酶逆转录酶基因转染
- 犬正常腰椎间盘的动态增强MRI特征被引量：1
- 2014年
- 目的:研究犬正常腰椎间盘的动态增强MRI特点。方法:选取2岁龄健康杂种犬6只,麻醉后,对腰椎进行常规MRI T1WI、T2WI及X线片检查,排除退变或畸形腰椎间盘。MRI常规扫描结束后,静脉注射对比增强剂(钆喷酸葡胺),并在注射增强剂后2min、5min、10min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h行T1WI扫描。动态扫描结束后,选取每个腰椎间盘的上下椎体、上下终板、上下周围髓核及中央髓核为感兴趣区,分别测量增强前及注射增强剂后各时间点腰椎各感兴趣区的信号强度值,计算增强率,绘制时间-信号曲线及峰值出现时间,观察感兴趣区的信号变化特点。结果:注射对比增强剂后5min、1h、1h、1.5h,正常犬腰椎椎体、终板区域、周围髓核、中央髓核分别达到第1个峰值,信号增强率分别为(172.7±14.6)%、(197.6±39.5)%、(234.2±56.3)%、(253.5±37.3)%。注射对比增强剂后3.5h各区域信号强度达到达到第2个峰值,信号增强率分别为(122.5±18.2)%、(164.7±36.0)%、(200.6±23.6)%、(220.9±15.2)%。各感兴趣区的第2个峰值均低于第1个峰值,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:犬正常腰椎间盘的动态增强MRI表现具有"终板延迟"现象及"双峰"特征。
- 韩志华陈春吴剑宏黄敏华任爱军郭勇何勍阮狄克
- 关键词：动态增强MRI椎间盘终板
- 脐带华通胶间充质干细胞在制备细胞移植材料中的应用
- 本发明涉及脐带华通胶间充质干细胞在制备医用生物材料中的应用。这种医用生物材料可以用于人椎间盘细胞移植，也可用作椎间盘组织工程的种子细胞。它是以新鲜人脐带为材料制备华通胶间充质干细胞，以实施椎间盘摘除术时被摘除的椎间盘标本...
- 阮狄克张燕李海峰吴剑宏张超王德利何勍王超峰辛洪奎
- 文献传递
- 腰椎间盘退变的MRI诊断分级及其临床应用进展
- 目的：综述目前腰椎间盘退变的MRI诊断分级及其临床应用进展，为腰椎间盘退变疾病分级的基础及临床研究提供参考。方法：回顾分析MRI在诊断腰椎间盘退变疾病中的优势及MRI技术在椎间盘疾病诊断研究领域的新技术和新方法，对目前较...
- 吴剑宏阮狄克
