周丽蓉
- 作品数：12 被引量：43H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 肺炎链球菌3型多糖对支气管哮喘小鼠气道炎症及Treg/Th17细胞的影响被引量：3
- 2013年
- 目的观察肺炎链球菌3型多糖(T3P)对支气管哮喘小鼠气道炎症以及Treg/Th17细胞的影响,探讨T3P对哮喘小鼠的免疫调节作用。方法 BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组和T3P组,每组8只。哮喘组以卵清蛋白(OVA)致敏、气道激发建立哮喘模型,对照组以PBS代替,T3P组在OVA致敏前皮下注射T3P进行干预。观察小鼠肺组织病理改变,对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,ELISA法检测血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)以及BALF中白介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-10、IL-17浓度,实时荧光定量PCR法检测肺组织中转录因子Foxp3和RORγt mRNA表达水平,流式细胞术检测Treg和Th17细胞占CD4^+细胞百分比。结果 T3P组小鼠肺组织炎症反应程度弱于哮喘组,血清OVA-IgE,BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞比例以及IL-4、IL-17浓度均低于哮喘组(P<0.05),IFN-γ、IL-10浓度高于哮喘组(P<0.05),小鼠肺组织Foxp3 mRNA表达水平及Treg占CD4^+细胞百分比均高于哮喘组(P<0.05),RORγt mRNA表达水平和Th17细胞占CD4^+细胞百分比均低于哮喘组(P<0.05)。哮喘组和T3P组小鼠肺组织Foxp3-mRNA/RORγt-mRNA比值及Treg/Th17细胞比例与BALF中嗜酸粒细胞数量呈负相关。结论 T3P可以通过抑制过敏原特异性IgE表达调节Th1/Th2、Treg/Th17细胞平衡,抑制气道炎症。
- 周丽蓉张劼罗永艾
- 关键词：调节性T淋巴细胞TH17细胞炎症
- 鲍曼不动杆菌噬菌体AB3裂解酶基因的表达及其抗菌活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的构建噬菌体AB3裂解酶LysAB3原核表达载体,测定LysAB3对鲍曼不动杆菌的抗菌活性。方法PCR扩增LysAB3基因,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达LysAB3,金属离子螯合亲和层析法纯化重组蛋白。检测LysAB3的抗菌力、裂解谱、作用的最佳pH和温度,以及对细胞壁肽聚糖的降解力。结果扩散法表明LysAB3对40株鲍曼不动杆菌均有抗菌作用,并可降解其肽聚糖。LysAB3作用的最佳pH为7,最佳温度为25℃。经LysAB3作用后的鲍曼不动杆菌,在扫描电镜下可见菌体表面粗糙、皱缩,部分裂解为碎片。结论噬菌体AB3裂解酶LysAB3对鲍曼不动杆菌具有明显的抗菌活性。
- 张劼周丽蓉罗永艾
- 关键词：噬菌体裂解酶鲍曼不动杆菌抗菌活性
- 噬菌体AB3及其脂质体包被液应用于耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌感染的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察噬菌体AB3在耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(CRAB)肺部感染小鼠模型中的疗效、代谢规律、对宿主免疫功能的影响,以及脂质体包被对噬菌体AB3在肺组织内存留时间的影响。方法建立CRAB肺部感染小鼠模型,通过滴鼻、肌内注射及腹腔注射3种途径分别将噬菌体AB3注入小鼠体内,观察其在肺组织内的代谢规律及产生中和抗体的效价,确定最佳给药途径并观察其疗效;通过检测小鼠血清细胞因子的水平,了解噬菌体AB3对宿主免疫功能的影响;通过制备脂质体包被液,进一步延长噬菌体AB3在小鼠肺组织中的存留时间。结果滴鼻途径进入的噬菌体AB3,240 min时仍可测出其滴度,长于另2种给药途径,d 7产生低效价的中和抗体,d 28之后中和抗体效价逐渐下降为0,而另2种给药途径的中和抗体效价从d 7开始逐渐增高;噬菌体AB3滴鼻组小鼠给药5 wk后,血清IFN-γ含量明显高于对照组[(280±33)ng·L^(-1) vs.(224±27)ng·L^(-1),P<0.05];噬菌体AB3治疗组小鼠肺组织结构基本正常,存活率明显高于对照组(90%vs.0,P<0.01);噬菌体AB3脂质体包被液经过滴鼻途径进入小鼠体内,在肺组织中的存留时间可延长至300 min,相比未包被组d 7产生更低效价的中和抗体,d 14后中和抗体效价逐渐下降为0,小鼠存活率明显高于对照组(80%vs.0,P<0.01),而与未包被组存活率相比无显著差异(80%vs.90%,P>0.05)。结论噬菌体AB3不仅可有效治疗CRAB肺部感染,还能增强宿主细胞免疫功能。经鼻途径是最佳的给药途径,脂质体包被液可有效延长噬菌体AB3在肺组织内的存留时间。
- 张劼罗永艾周丽蓉
- 关键词：鲍氏不动杆菌噬菌体脂质体
- 结核分枝杆菌38ku蛋白的制备及其抗原性研究
- 2007年
- 目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌38ku蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法2003年2月至2004年3月在中国药品生物制品检定所菌苗室以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应(PCR)方法对38ku蛋白基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,在大肠埃希菌中表达38ku蛋白,通过金属离子螯合亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析该重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的38ku蛋白重组质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,经过一步金属离子螯合亲和层析后得到纯度为92.7%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感度和特异度分别为80.5%(33/41)和96.0%(25/26)。结论大肠埃希菌工程菌以包涵体的形式表达38ku蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。
- 周丽蓉徐敬华罗永艾王国治
- 关键词：KU蛋白基因表达抗原性酶联免疫吸附试验
- 结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究被引量：1
- 2008年
- 目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%。结论获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。
- 周丽蓉徐敬华罗永艾王国治
- 关键词：分枝杆菌结核抗原性酶联免疫吸附测定
- 鲍曼不动杆菌噬菌体AB3裂解酶基因的表达及其抗菌活性分析
- 目的构建噬菌体AB3裂解酶LysAB3原核表达载体,测定LysAB3对鲍曼不动杆菌的抗菌活性。方法PCR扩增LysAB3基因,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达LysAB3,金属离...
- 张劫周丽蓉罗永艾
- 文献传递
- 鲍曼不动杆菌噬菌体AB3裂解酶基因的表达及其抗菌活性分析
- 目的 构建噬菌体AB3裂解酶LysAB3原核表达载体,测定LysAB3对鲍曼不动杆菌的抗菌活性.方法 PCR扩增LysAB3基因,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达LysAB3,...
- 张劼周丽蓉罗永艾
- 基因工程改造噬菌体应用于细菌感染的研究进展被引量：1
- 2012年
- 噬菌体作为细菌病毒,在细菌性感染尤其是多重耐药菌感染的治疗方面具有抗生素无法比拟的优势。目前人工改造噬菌体的理论和技术已趋成熟,研究者通过基因工程技术解决了噬菌体特异性高、半衰期短、释放内毒素等问题,使基因工程改造噬菌体具有了较强的临床应用潜力。本文主要就基因工程改造噬菌体在扩大宿主范围、增强抗生素疗效、延缓免疫清除、避免内毒素释放等方面所具有的优势,及其在剂量确定、细菌耐受、宿主安全性等方面可能会出现的问题进行了阐述。
- 张劼罗永艾周丽蓉
- 关键词：基因工程噬菌体细菌感染
- 结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达被引量：2
- 2007年
- 目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。
- 周丽蓉徐敬华罗永艾王国治
- 关键词：结核分枝杆菌CFP10基因克隆
- IDO与Treg在支气管哮喘小鼠中的相互作用及其意义被引量：2
- 2013年
- 目的探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygense,IDO)与CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)之间的相关性及在支气管哮喘发病机制中的作用。方法 BALB/c小鼠用随机数字表法分成对照组和哮喘组,每组8只。哮喘组以鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏,激发小鼠建立哮喘模型,无创肺功能仪检测气道反应性,支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞学分析,ELISA检测BALF中INF-γ、IL-4、IL-10浓度,实时荧光定量PCR检测肺组织IDO和Foxp3 mRNA表达,免疫组织化学方法检测IDO蛋白表达,流式细胞仪检测Treg占CD4+细胞的百分率。结果哮喘组小鼠气道反应性、BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞比例及IL-4浓度明显高于对照组(P<0.01);而INF-γ与IL-10浓度、IDO和Foxp3的mRNA表达、IDO蛋白表达、Treg占CD4+细胞的百分率明显低于对照组(P<0.01);对照组与哮喘组IDO与Foxp3的mRNA表达呈正相关(r=0.819,r=0.807,P<0.05),对照组与哮喘组IDO蛋白表达与Treg占CD4+细胞的百分率呈正相关(r=0.783,r=0.765,P<0.05)。结论哮喘小鼠IDO和Foxp3表达降低,Treg数量减少,且IDO蛋白表达与Treg占CD4+细胞的百分率呈正相关,表明IDO与Treg相互调节,打破免疫耐受,诱导哮喘发生。
- 周丽蓉张劼罗永艾
- 关键词：调节性T细胞
