周忠涛
- 作品数：13 被引量：27H指数：3
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- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析被引量：11
- 2014年
- 从江苏某猪繁殖与呼吸综合征（ PRRS）发病猪场采集的血清样本中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（ PRRSV）毒株,对该毒株的生物学特性进行了鉴定,并对其Nsp2和ORF5序列进行测定和序列比对分析。利用细胞传代的方法对PRRSV检测阳性,PPV和PRV检测阴性的猪血清进行病毒分离。通过RT-PCR、CPE和IFA对PRRSV分离毒株进行鉴定,并测定其TCID50。测序获得Nsp2和ORF5基因,并利用DNAStar软件进行序列同源性和进化分析。成功分离获得1株PRRSV毒株,该毒株能够在Marc-145细胞上增殖并产生细胞病变,免疫荧光检测可观察到特异性荧光,TCID50为105.5。 Nsp2序列分析表明,该分离株具有HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的基因特征,同时495-516位也存在缺失。分离株ORF5基因与其他参考毒株氨基酸同源性为57.1%-99.5%,与NJ-1106的同源性最高,为99.5%。系统进化树分析表明,该分离株属于北美型,与WUH4、NJ-1106等HP-PRRSV毒株属于同一分支。本试验分离得到一株HP-PRRSV变异毒株,为分析我国PRRSV的遗传变异和防控奠定了基础。
- 王小敏何孔旺周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌张雪寒郭容利李彬于洋
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- PCV2、P1和TTV混合感染的流行病学调查被引量：3
- 2013年
- 【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为64.81%,P1感染率为12.96%,TTV1感染率为33.33%,TTV2感染率为51.85%,其中8份样品表现为PCV2和P1的混合感染,42份样品表现为PCV2和TTV的混合感染,4份样品表现为PCV2、P1和TTV的混合感染,分别占样品总数的7.41%、38.89%和3.7%。【结论】猪群中PCV2和TTV的感染比较普遍,P1的感染率较低,PCV2和TTV的混合感染率较高,混合感染种类复杂,加重了疫病防控的难度。
- 王小敏何孔旺王东田周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪圆环病毒2型密码子优化的ORF2基因的重组病毒样粒子
- 本发明涉及猪圆环病毒（PCV）2型密码子优化的ORF2基因重组杆状病毒病毒样粒子，属于生物制药领域。将所有PCV2 ORF2序列进行比对分析，得到人工合成的密码子优化的PCV2 ORF2序列，命名为YHsfORF2。将Y...
- 王小敏何孔旺汪伟周忠涛俞正玉倪艳秀温立斌张雪寒郭容利吕立新李彬周俊明茅爱华叶青周萍沈江萍
- 文献传递
- 2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较（英文）被引量：2
- 2015年
- [目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和Taq Man探针,构建分别包含PCV2 ORF1和ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立2种检测PCV2的分别基于PCV2 ORF1和ORF2的Taq Man荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数R均在0.99以上,扩增效率均在90%~110%;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强,以猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为模板时均无扩增;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101copies/μl,ORF2方法可达1.0×102copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较,结果表明,其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致,有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测,证明这8份样品中确实存在P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。
- 周忠涛王小敏汪伟茅爱华温立斌倪艳秀何孔旺
- 关键词：TAQORF2
- 猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的流行病学调查被引量：5
- 2012年
- 研究2009-2010年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)混合感染的情况。采用PCR和RT-PCR方法对采集自我国安徽、江苏、山东、浙江等7省的227份组织和血清样品进行PCV2和PRRSV检测。PCV2a感染率为15.9%,PCV2b感染率为44.5%,PRRSV感染率为45.8%,其中17份样品表现为PCV2a和PRRSV的混合感染,50份样品表现为PCV2b和PRRSV的混合感染,10份样品表现为PCV2a,PCV2b和PRRSV的混合感染,分别占样品总数的7.5%,22.0%和4.4%。猪群中PCV2和PRRSV的感染比较普遍,混合感染率也较高,加重了疫病防控的难度。
- 王小敏何孔旺张文文周忠涛茅爱华俞正玉温立斌倪艳秀张雪寒郭容利吕立新李彬周俊明
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型共感染
- 猪圆环病毒2型2010 AHCY 株的分离鉴定及遗传变异分析被引量：1
- 2013年
- 旨为分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,对其生物学特性进行鉴定,测定其TCID50,并进行全基因组比对分析。利用细胞传代的方法对PCR检测为PCV1阴性、PCV2阳性的病料进行病毒分离,分离毒株接种PK15细胞,通过PCR检测和间接免疫荧光进行鉴定。并对分离株的TCID50和全基因组序列进行了测定与分析。成功分离得到猪圆环病毒2型,命名为2010AHCY株,其基因组全长为1 767 bp,在PK15细胞上的TCID50为104.23。全基因组序列分析表明,该分离株与其他参考毒株核苷酸同源性为93.2%～99.9%,与HM038030 PCV2d的同源性最高,为99.9%。系统进化树分析表明,分离株2010AHCY属于PCV2d基因型,与PCV2b基因型亲缘关系较近。为分析华东地区PCV2分子流行病学、遗传变异和PMWS的防治奠定了基础。
- 王小敏何孔旺王东田周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌张雪寒郭容利李彬
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪圆环病毒2型201105ZJ分离株的遗传变异分析（英文）
- 2014年
- [目的]了解我国部分地区猪圆环病毒2型（PCV2）的遗传变异特性。[方法]使用细胞传代的方法对 PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料进行病毒分离，并通过 PCR、IFA进行初步鉴定，并特异性扩增出该分离病毒的全基因组，并进行同源性和系统进化树分析。[结果]该研究成功分离出1株 PCV2毒株，并命名为201105ZJ株；该分离株能在 PK15细胞上增殖，特异性 PCR检测可扩增出特异性片段，经 PCV2阳性血清作用后，呈现特异性免疫荧光，其 TCID50偏低，为102.67；基因组全长1768bp，与13株参考毒株的序列同源性介于94.1%～96.8%；与 AF055392PCV2a的同源性最高，为96.8%；分离株201105ZJ 和AF055392属于基因型 PCV2a，与 PCV2c基因型亲缘关系较远。[结论]该研究中201105ZJ分离株的遗传变异特征对于疫苗的研发、PCV2致病机理的研究和华东地区 PCVAD的防控提供了理论依据。
- 王小敏何孔旺汪伟周忠涛杨光远茅爱华俞正玉倪艳秀
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 表达 PCV2密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒
- 本发明涉及一种PCV2密码子优化ORF1和ORF2串联基因的重组病毒，属于生物制药领域。人工合成密码子优化的PCV2ORF1和ORF2基因，命名为YHsfORF1-2。将YHsfORF1-2克隆入杆状病毒表达载体pFas...
- 王小敏何孔旺汪伟周忠涛俞正玉倪艳秀温立斌张雪寒郭容利吕立新李彬周俊明茅爱华叶青周萍沈江萍
- 文献传递
- 我国部分地区猪圆环病毒2型的亚型鉴定和分离株增殖特性研究
- 猪圆环病毒（Porcinecircovirus，PCV）是圆环病毒科圆环病毒属成员，其病毒粒子无囊膜，基因组是由一条单股、负链、环状的DNA组成。PCV有PCV1和PCV2两个基因型，PCV1对猪是非致病性的，PCV2是...
- 周忠涛
- 关键词：猪圆环病毒2型亚型鉴定PK15细胞
- 文献传递
- 猪TTV2 ORF1基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2014年
- 为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTV2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-g1,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。表达产物通过镍离子亲和层析柱进行纯化,用Western blot进行鉴定。将纯化的重组蛋白质免疫新西兰大白兔制备猪TTV2多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价。PCR扩增获得大小为1 227 bp的片段,重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;重组蛋白质分子量为5.2×104,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度可达95%以上,具有较好的抗原性;制备的多克隆抗体特异性高,抗体效价达1∶12 800。重组蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达,为建立TTV2间接ELISA检测方法提供了优质的包被抗原。
- 张文文王小敏肖琦周忠涛汪伟温立斌李彬郭容利张雪寒周俊明倪艳秀吕立新俞正玉茅爱华胡屹屹刘永杰何孔旺
- 关键词：ORF1基因原核表达多克隆抗体
