唐余燕
- 作品数：15 被引量：21H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者Th细胞分化的影响
- 2015年
- 目的探讨Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者Th细胞分化的影响。方法重组慢病毒载体p GC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体p GC-FU分别转染29例CHB患者外周血CD4+T细胞,分离培养5 d的细胞培养液上清,应用ELISA检测Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4的表达水平;收集培养5 d的CD4+T细胞,应用实时定量PCR检测转录因子T-bet、GATA3m RNA的表达水平。结果 1与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平明显升高(P=0.003)。2与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组Th2型细胞因子IL-4的表达水平明显降低(P=0.007)。3与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组IFN-γ/IL-4比值明显增大(P=0.001)。4与p GC-FU转染组比较,p GC-FU-Runx3转染组T-bet、GATA3 m RNA的表达水平无显著性差异(P均>0.05),但p GC-FU-Runx3转染组T-bet/GATA3比值较p GC-FU转染组明显增大(P=0.005)。结论 Runx3过表达可促进CHB患者Th1型细胞因子的分泌,抑制Th2型细胞因子分泌,促使CHB患者外周血Th细胞向Th1细胞分化,使其Th1/Th2失平衡得到改善。
- 张毅余永胜王洁玲唐余燕汤正好江红奚敏臧国庆
- 关键词：CD4+T细胞RUNX3TH1细胞TH2细胞
- 胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞成熟及在T淋巴细胞增殖中的作用
- 2013年
- 目的:观察融合蛋白胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)-HBcAg18-27-Tapasin体外诱导HBV转基因小鼠髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟和对T淋巴细胞增殖的作用.方法:体外分离、培养HBV转基因小鼠及近交系C57BL/6小鼠髓源性DC,加入重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白介素(interleukin,IL)-4培养5d,再加入实验组10μg/mL CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组10μg/mL CTP-HBcAg18-27、10μg/mL HBcAg18-27-Tapasin及空白组RPMI1640完全培养液.流式细胞术测定DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达,ELISA法测定DC培养上清液中的IL-12p70的水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测T淋巴细胞增殖反应,流式细胞仪检测增殖的T淋巴细胞内的细胞因子.结果:体外成功诱导小鼠髓源性DC;CTP-HBcAg18-27-Tapasin能明显上调DC表面分子CD80、CD83、MHC-1的表达;并且CTP-HBcAg18-27-Tapasin组诱导DC分泌的IL-12p70水平及诱导DC增殖T淋巴细胞增殖能力明显高于对照组及空白组[IL-12p70转基因小鼠(F=205.85,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=406.20,P=0.000)];流式细胞仪检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平也高于对照组[转基因小鼠(F=155.45,P=0.000);C57BL/6小鼠(F=392.90,P=0.000)],同时HBV转基因小鼠DC表面分子及在T淋巴细胞增殖中的作用要比C57BL/6小鼠低.结论:分子伴侣Tapasin修饰胞内化抗原肽能促进HBV转基因小鼠髓源性DC的分化、成熟,并能增强DC刺激T淋巴细胞增殖能力及诱导CTL的产生.
- 唐余燕余永胜卓萌臧国庆汤正好陈小华
- 关键词：TAPASINT淋巴细胞
- 抗TNFα单链抗体复制缺陷型腺病毒载体的构建及表达
- 2013年
- 目的:构建pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv重组腺病毒载体,通过病毒包装、纯化及滴定,获得高纯度高感染性的病毒液,并对TNFα-scFv进行表达、鉴定.方法:以携带TNFα-scFv基因的载体PUC57-Amp为模板,扩增TNFα-scFv目的基因,构建穿梭质粒pDONR221-TNFα-scFv,测序证实质粒含有目的基因.与骨架质粒pAd-CMV-V5-DEST腺病毒骨架载体进行同源重组,形成表达克隆pAd/CMV/V5-DEST-TNFα-scFv.表达克隆转染293细胞,包装重组腺病毒,并鉴定和病毒滴定.结果:TNFα-scFv基因成功克隆到腺病毒载体中,转染293细胞后成功包装出重组腺病毒,病毒滴度为2.5×1011TCID50/mL,Western blot检测到TNFα-scFv基因在293细胞中高水平表达.结论:成功构建了带有TNFα-scFv基因的重组腺病毒载体,为进一步研究提供实验基础.
- 卓萌唐余燕余永胜周丽芹潘庆春王鹏臧国庆汤正好
- 关键词：肿瘤坏死因子Α
- 结核分枝杆菌蛋白抗原的研究进展被引量：1
- 2015年
- 结核分枝杆菌是结核病的病原菌,属分枝杆菌属,是一种生长缓慢、兼性好氧的小杆菌。结核分枝杆菌有4000多个编码基因,可合成生长所需的全部氨基酸、维生素、辅酶因子。结核分枝杆菌的蛋白不仅与致病性有关,而且具有很强的抗原性。这些蛋白质抗原可以诱导机体产生具有特异性的保护性免疫反应。不同种类的结核分枝杆菌蛋白纯度和活性差异比较大,一些能够诱导细胞免疫或体液免疫的蛋白抗原被广泛应用于结核病诊断、新型疫苗研制及治疗等方面。
- 王洁玲唐余燕余永胜
- 关键词：结核分枝杆菌
- 胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin通过激活PI3K/Akt通路抑制HBV转基因小鼠特异性CTL凋亡
- 2014年
- 目的探讨胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白通过激活PI3K/Akt信号通路抑制HBV转基因小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T cell,CTL)凋亡。方法 HBV转基因小鼠随机分组,100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin、50μg CTPHBcAg18-27-Tapasin、50μg CTP-HBcAg18-27及生理盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次。流式细胞仪检测脾细胞中胞内细胞因子水平及细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白PI3K、P-Akt及P-mTOR表达的变化。结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.74±0.20)%,高于对照组50μg CTP-HBcAg-18-27-Tapasin(2.42±0.53)%及50μg CTP-HBcAg18-27(1.70±0.56)%和空白组(0.66±0.71)%(F=741.45,P=0.000);同时,100μg CTPHBcAg18-27-Tapasin融合蛋白有效抑制特异性CTL凋亡(6.29±0.02)%,低于对照组50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin(7.72±0.15)%及50μg CTP-HBcAg18-27(26.30±1.13)%和空白组(58.26±0.23)%(F=5313,P=0.000),并伴随凋亡相关蛋白PI3K、P-Akt及P-mTOR上调(F=52.61、18.32和94.18,P<0.05)。结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin能有效诱导HBV转基因小鼠特异性CTL的表达,抑制其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的激活有关。
- 唐余燕陈小华卓萌宋琳琳汤正好臧国庆余永胜
- 关键词：P13K凋亡
- 胞质转导肽-HBcAg18-27-Tapasin诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞抑制转基因小鼠HBV复制被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨经分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg18-27经CTP转导体内诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对HBV转基因小鼠病毒的抑制作用. 方法 20只HBV转基因小鼠随机分组,100 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin,50μg CTP-HBcAg18-27-Tapasi,50 μg CTP-HBcAg18-27及等渗盐水组经肌肉免疫小鼠,每周一次,共3次.流式细胞仪检测脾细胞中CTL水平,微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测血清中HBsAg水平,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBVDNA水平,肝脏HE染色及免疫组织化学方法检测HBsAg表达.数据用均数±标准差((x-)±s)表示,用SPSS16.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA),组间两两比较采用LSD法. 结果 100μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫转基因小鼠后,能有效上调特异性CTL数量(2.70％±0.20％),其水平高于对照组50 μg CTP-HBcAg18-27-Tapasin (1.66％±0.53％)及50μg CTP-HBcAg18-27 (1.26％±0.56％)和空白组(0.75％±0.71％),F=741.45,P=0.000.肝脏HE染色及免疫组织化学结果显示实验组肝组织中炎性细胞的数量明显增多及HBsAg的表达显著减少,同时对小鼠血清中HBsAg及HBV DNA有明显的抑制作用. 结论 分子伴侣Tapasin修饰抗原肽HBcAg 18-27经CTP转导免疫HBV转基因小鼠后能增加特异性CTL数量,显著降低血清中HBsAg及HBV DNA水平,同时抑制肝脏中HBsAg的表达.
- 唐余燕陈小华周丽芹卓萌臧国庆汤正好余永胜
- 关键词：转基因小鼠TAPASIN
- 乙型肝炎病毒抗原表位特异性细胞毒性T细胞研究进展被引量：2
- 2017年
- 急性乙型肝炎患者体内有特异性和多克隆性的CTLs，而慢性乙型肝炎患者体内CTLs很少，只能识别单一抗原表位，因此病毒抗原表位特异性CTL免疫应答不足与HBV的慢性化有关。深入了解HBV抗原特异性CTLs的产生及其在病毒清除中的作用能够为新的抗病毒手段提供理论基础。
- 吴姗姗唐余燕王洁玲陈小华张毅汤正好臧国庆余永胜
- 关键词：T淋巴细胞细胞毒性表位免疫治疗
- 胞质转导肽-HBcAg_(18-27)-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性CTL的表达被引量：4
- 2013年
- 目的观察融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBcAg18-27-Tapasin诱导C57BL/6小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的表达。方法 C57BL/6小鼠随机分为实验组CTP-HBcAg18-27-Tapasin、对照组CTP-HBcAg18-27、HBcAg18-27-Tapasin及空白组(生理盐水)。经肌肉免疫小鼠,ELISA检测T淋巴细胞分泌细胞因子;流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞内的细胞因子;CCK-8法检测T淋巴细胞增殖活性。结果实验组能有效刺激小鼠T细胞分泌Th1型细胞因子;FCM检测实验组融合蛋白诱导的CTL水平明显高于其他组;且实验组T淋巴细胞增殖活性明显高于对照组及空白组。结论 CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白免疫C57BL/6小鼠后,能提高T淋巴细胞增殖活性,能有效刺激T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子及增加CTLs的表达。
- 唐余燕陈小华汤正好臧国庆余永胜
- 关键词：TAPASIN细胞毒T淋巴细胞
- CTP-Ub-HBcAg原核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白的表达。方法以质粒pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg中的Ub-HBcAg融合基因为模板设计引物,上游引物带有CTP基因序列,进行PCR扩增,PCR产物克隆到原核表达质粒pMAL-c2x中,菌落PCR阳性克隆测序鉴定,鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并进一步通过直链淀粉树脂亲和层析法纯化融合蛋白,Western blotting鉴定。结果 PCR扩增得到820 bp大小的条带,为CTP-Ub-HBcAg融合序列。该序列被克隆至表达质粒pMAL-c2x中,阳性克隆菌落测序正确,并在DE3中获得诱导表达。Western blotting鉴定为70 KD的CTP-Ub-HBcA融合蛋白。结论构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并成功表达,为进一步研究该融合蛋白的功能提供了实验基础。
- 宋琳琳卓萌唐余燕陈小华余永胜汤正好臧国庆
- 关键词：CTPHBCAG融合蛋白
- 结核分枝杆菌抗原Ag85B优势诱导活动性结核患者Th1型细胞免疫反应研究被引量：2
- 2016年
- 目的观察Ag85B抗原在诱导活动性结核患者细胞免疫应答中的作用。方法选取60例活动性结核患者,分离其外周血单个核淋巴细胞(PBMC),加Ag85B抗原刺激培养72h,ELISA法检测上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10细胞因子浓度,流式细胞术(FCM)检测CD4^+T淋巴细胞内的细胞因子IFN-γ水平,定量PCR及Western blot法检测PBMC细胞转录因子T-bet、GATA-3的表达。结果检测活动性结核患者外周血单个核淋巴细胞(PBMC)培养上清液,Ag85B蛋白实验组Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2浓度明显高于结核菌素(PPD)组(P<0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与PPD组相比,差异无统计学意义(P>0.05),以上两组细胞因子水平均明显高于空白对照组(P<0.05)。流式细胞法检测CD4+T胞内细胞因子IFN-γ水平,Ag85B蛋白实验组高于PPD组及空白对照组(P<0.05)。定量PCR及Western blot法检测,T-bet水平Ag85B组高于PPD组(P<0.05),而GATA-3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核杆菌抗原Ag85B可以通过上调Th1型转录因子T-bet诱导优势Th1型免疫反应,为结核病的预防及治疗提供理论基础。
- 王洁玲唐余燕张毅汤正好臧国庆余永胜
- 关键词：活动性结核
