孙毅凡
- 作品数：14 被引量：174H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项广东省自然科学基金更多>>
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- 佛波酯诱导THP-1细胞分化条件的优化及自噬模型的建立被引量：5
- 2013年
- 目的 探讨佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导THP-1细胞（人类单核/巨噬细胞）分化的最优条件，建立相关自噬模型，为基于细胞自噬模型的研究奠定实验基础。 方法 采用PMA诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞；用表达融合蛋白pcDNA3.1-YFP-LC3质粒转染THP-1细胞，YFP为黄绿色荧光蛋白，以示踪自噬体的形成。采用倒置显微镜观察不同浓度（0、10、20、50、100、200 ng/ml）、不同时间（0、24、48、60 h）PMA分化细胞形态学变化；采用荧光显微镜示踪不同条件下LC3点聚集的增强；实时荧光定量聚合酶链式反应（reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction ，RT-qPCR）检测自噬相关基因mRNA的表达。采用SPSS 17.0软件进行统计分析。mRNA相对含量2-ΔΔCt用“x±s”表示。经比较Ct值法分析基因表达差异。Earle’s balanced salts solution（EBSS，又称饥饿培养基），诱导细胞自噬相关基因mRNA表达量变化的比较采用t检验分析，以P0.05为差异有统计学意义。 结果 PMA浓度为100 ng/ml、诱导时间为24～48 h时，THP-1细胞分化成巨噬细胞的形态学状态较理想。饥饿培养基EBSS处理分化的THP-1细胞，能增加自噬体YFP-LC3点聚集，其自噬相关基因LC3、Atg5、Atg7、Beclin1的mRNA表达水平显著增加 （2-ΔΔCt均值分别为1.35±0.16、1.18±0.39、1.44±0.12、1.08±0.09，t值分别为4.00、2.90、5.16、3.57，P值均＜0.05）。 结论 PMA在浓度为100 ng/ml、24～48 h时诱导THP-1分化为巨噬细胞状态较理想；成功构建了THP-1源性细胞自噬模型。
- 陈亮孙毅凡陈涛李海成江振友周琳钟球
- 关键词：白血病单核细胞细胞系自噬
- 热灭活和紫外线照射灭活结核分枝杆菌的实验效果分析被引量：5
- 2013年
- 我国卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中结核分枝杆菌被列为第二类病原微生物（危害程度为Ⅲ级）,属高致病性病原微生物[1]。实验室研究课题中,大部分涉及到结核分枝杆菌的操作,实验室生物安全是首先要解决的问题。至今,已有一些关于实验室工作人员患结核病的报道,其中呼吸道吸入感染是实验室感染的最主要类型[2]。
- 赖赛麟李海成王威孙毅凡郭卉欣陈涛江勇钱明江振友周琳钟球
- 关键词：实验室生物安全结核分枝杆菌紫外线照射病原微生物
- 澳门地区产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析被引量：4
- 2011年
- 【目的】了解澳门地区医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌的临床分布特点和基因型特征。【方法】收集2007年12月至2008年2月期间从澳门地区两家医院的临床患者中分离到的大肠埃希菌158株,用表型确定试验确定产ESBL大肠埃希菌。应用PCR方法分别扩增产酶菌株的CTX-M-3、CTX-M-9、TEM和SHV等常见的β-内酰胺酶基因,并结合临床分离菌株的分布特点对PCR扩增结果作进一步的分析。【结果】澳门地区临床分离的158株大肠埃希菌中,有54株产ESBL,产酶率为34.2%。PCR扩增结果显示,所有产酶菌株均携带TEM基因;其中有47株(87%)同时携带CTX-M-9、TEM两个基因;没有菌株携带CTX-M-3和SHV基因。产ESBL大肠埃希菌广泛分布于临床各科室,其中普外科占40.7%,内科占27.8%,心脏科占16.7%。标本分布较为集中,尿液占55.6%,分泌物或脓液标本占22.2%,血液和呼吸道标本各占11.1%。【结论】澳门地区医院感染中,产ESBL大肠埃希菌在临床各科室分布广泛,主要分离自尿液、分泌物或脓液标本;所有菌株均携带TEM基因,并有87%的菌株同时携带CTX-M-9基因。
- 林艳芳江振友陈琛施珊珊孙毅凡吴莎
- 关键词：大肠埃希菌超广谱Β-内酰胺酶基因型
- 参苓散调节小鼠肠道菌群作用的实验研究被引量：22
- 2011年
- 目的观察参苓散对小鼠肠道菌群的影响。方法 48只雄性昆明鼠,随机分为4组,即低、中、高3个剂量组和对照组,连续给予参苓散14 d,实验前后检测肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌的数量。结果中剂量组的小鼠肠道内双歧杆菌显著增加,肠杆菌减少,乳杆菌和肠球菌无显著变化;高剂量组的小鼠肠道内的双歧杆菌和乳酸杆菌的数量显著增多,肠杆菌的数量显著降低,肠球菌无变化。结论参苓散具有调节小鼠肠道菌群及促进双歧杆菌、乳杆菌增殖的功效。
- 施珊珊江振友宋克玉陈琛严群超孙毅凡吴莎
- 关键词：肠道菌群
- 海洋放线菌素X2对CVB3感染ECV304细胞VCAM-1表达的影响
- 2012年
- 目的研究柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CVB3)感染ECV304细胞后,血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesionmolecule,VCAM-1)的表达变化及海洋放线菌素X2对CVB3感染ECV304细胞VCAM-1表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的海洋放线菌素X2作用病毒后的抑制情况;采用RT-PCR和FCM分别测定CVB3感染的ECV304细胞在海洋放线菌素X2作用前后不同时间点的VCAM-1的mRNA和蛋白的表达水平。结果海洋放线菌素X2在病毒吸附前对CVB3的SI为63.88。正常状态下ECV304细胞基本无VCAM-1 mRNA表达,CVB3感染ECV304细胞促进VCAM-1 mRNA表达,感染12 h达到最高峰,6～54 h时VCAM-1 mRNA水平,与细胞对照组相比CVB3感染组差异有统计学意义(P<0.05)。CVB3感染ECV304细胞后,VCAM-1蛋白表达在12～48 h显著高于正常ECV304细胞对照组(P<0.05)。海洋放线菌素X2干预后,于12～54 h降低ECV304细胞VCAM-1 mRNA的水平,12～24 h降低VCAM-1蛋白的表达,与CVB3感染组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论海洋放线菌素X2在病毒吸附前对CVB3具有抗病毒作用,并可下调CVB3诱导的ECV304细胞VCAM-1的mRNA水平和蛋白的表达。
- 戴国奎吴莎施珊珊孙毅凡江振友周琳
- 关键词：海洋放线菌柯萨奇病毒血管细胞黏附分子
- 结核分枝杆菌rv3803C、rv3846基因的克隆、表达、纯化与鉴定
- 目的:克隆结核分枝杆菌rv3803c和rv3846基因,并在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv3803c和Rv3846基因片段,克隆至pGEX-6P-1表...
- 孙毅凡李海成周杰钱明陈涛江勇赖赛麟江振友钟球
- 关键词：结核分枝杆菌纯化
- 文献传递
- γ干扰素活化的THP-1源巨噬细胞杀伤荧光BCG的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的研究γ干扰素（IFN-γ）活化的THPI源巨噬细胞对BCG的杀伤作用，并探讨其杀伤机制是否与自噬有关。方法Phorbol-12-myristate-13-acetate（PMA，也称佛波酯）诱导THP-1分化成巨噬细胞。牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI（multiplicityofinfection，细菌数与细胞数的比例）10：1感染未活化（Control组）、IFN7活化（IFN-γ组）、Rapamycin诱导自噬（Rapa组）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬（IFN-γ＋3-MA组）4组不同预处理的巨噬细胞。感染48h后，超纯水裂解细胞，收集裂解液和培养上清混合，相同比例取各组混合液10μl，连续10倍稀释3次涂7H10平板培养基，置37℃生化培养箱培养，第3至4周观察记录菌落数，计算生存率Econtrol组的菌落数为分母，其他组（包括control组）的菌落数为分子相除得到的数值为生存率]。同时在感染过程的不同时间点裂解细胞提取总蛋白，以Westernblot方法检测自噬标志蛋白LC3B的表达，监测细胞自噬水平的变化。实验结果数据以3次重复实验数据的“x±s”形式展示（Westernblot结果除外，只采用其中-个结果数据为代表）。用SPSS17．0软件进行统计分析：巨噬细胞贴壁率比较和凋亡率比较用两独立样本t检验；巨噬细胞活化后不同时间点分泌的TNF-α浓度比较和BCG感染各组巨噬细胞后的生存率比较用One-WayANOVA检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果BCG感染各组巨噬细胞48h后的生存率：Control组为（100％±0％），IFN7组（45Yo±3％），Rapa组（48％±3％），IFN-γ＋3-MA组（91％±2％）。BCG生存率经One-WayANOVA检验，与Control组（未活化组）比较：IFN-γ组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；Rapa组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；IFN-γ＋3MA组BCG生存率无下降（P=0．13），细胞自噬水平无增高。结论BCG感染巨噬细胞�
- 赖赛麟孙毅凡陈涛杨晓周琳钟球
- 关键词：卡介苗细胞系
- 细胞因子在BCG感染THP-1源性巨噬细胞中的自噬作用研究
- 目的: 通过分析比较不同结核感染状态下受试者血清中不同Th亚群相关细胞因子的水平，了解Th1/Th2、Treg/Th17平衡状态在结核感染中的可能变化;探讨TGF-β对BCG感染巨噬细胞自噬的调控作用，为进一步研究...
- 孙毅凡
- 关键词：结核分枝杆菌BCGTGF-ΒTHP-1自噬
- 文献传递
- 中草药对小鼠肠道菌群影响的实验研究被引量：52
- 2011年
- 目的研究党参、茯苓、白术、白芍和陈皮五味中药制成的复方合剂对肠道菌群调节作用。方法将小鼠分为正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组灌服蒸馏水14 d,低剂量组、中剂量组和高剂量组灌服不同剂量的复方合剂14 d,检测实验前后肠道菌群数量。结果灌服后小鼠肠道菌群与灌服前比较,乳杆菌、双歧杆菌数量明显增加,肠球菌数量明显减少,肠杆菌数量差异无统计学意义。结论党参、茯苓、白术、白芍和陈皮五味中药制成的复方合剂对小鼠肠道菌群具有一定的调节作用。
- 陈琛江振友宋克玉施珊珊严群超吴莎孙毅凡
- 关键词：双歧杆菌乳杆菌肠道菌群
- 海洋放线菌素X2下调柯萨奇病毒B3感染ECV304细胞ICAM-1的表达
- 2012年
- 目的:观察海洋放线菌素X2对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染ECV304细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的海洋放线菌素X2作用病毒后的抑制情况;采用RT-PCR和流式细胞术分别测定CVB3感染的ECV304细胞在海洋放线菌素X2作用前后不同时间点的ICAM-1的mRNA和蛋白的表达水平。结果:CVB3感染ECV304细胞后,ICAM-1蛋白表达在12 h～54 h显著高于正常ECV304细胞对照组(P<0.05);海洋放线菌素X2干预后,于12 h～54 h降低ICAM-1蛋白的表达,与CVB3感染组相比差异有统计学意义(P<0.05);海洋放线菌素X2干预后,于24 h～54 h降低ICAM-1mRNA的表达,与CVB3感染组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:海洋放线菌素X2在病毒吸附前对CVB3具有抗病毒作用,并可下调CVB3诱导的ECV304细胞ICAM-1的mRNA和蛋白的表达。
- 施珊珊孙毅凡吴莎江振友周琳
- 关键词：海洋放线菌柯萨奇病毒细胞间黏附分子1
