孙海
- 作品数：14 被引量：54H指数：6
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人肺腺癌细胞系SPC-A1多西他赛耐药细胞系的建立及其特性被引量：6
- 2007年
- 背景与目的:多西他赛是近年来应用于临床的一种有效的化疗药物,其独特的作用机制使其具有良好的应用前景,然而,耐药性影响了其临床应用。本研究拟通过体外诱导耐药建立肺癌SPC-A1的多西他赛耐药细胞系,以便于进一步研究其耐药机制及耐药逆转。方法:通过体外逐步增加多西他赛浓度的方法诱导建立肺癌SPC-A1的多西他赛耐药细胞系。MTT比色法检测该耐药细胞的多药耐药特性;流式细胞术检测其细胞周期和细胞内罗丹明蓄积;细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算倍增时间;染色体核型分析对比耐药和亲本细胞株在遗传学上的变化。结果:MTT显示SPC-A1/Docetaxel对多西他赛、紫杉醇、顺铂、卡铂、吉西他滨、长春瑞滨、表柔比星、依托泊苷的耐药指数分别为13.20、2.18、1.12、1.39、1.38、0.93、10.14、2.12。流式细胞术检测其细胞周期显示:与亲代细胞比较SPC-A1/Docetaxel处于G1期的细胞增加,S期的细胞减少,G2期的细胞无明显变化。流式细胞仪检测SPC-A1和SPC-A1/Docetaxel细胞内罗丹明蓄积荧光强度分别为1382.26±0.32和806.34±0.49,耐药细胞内罗丹明蓄积较亲本细胞明显减少。SPC-A1和SPC-A1/Docetaxel细胞的倍增时间分别为27.4、35.1h。染色体核型分析两者遗传学无明显变化。结论:经体外诱导耐药建立的SPC-A1/Docetaxel表现出对多西他赛较高的耐药性,并呈多药耐药特性,耐药细胞系SPC-A1/Docetaxel与亲本细胞SPC-A1的生物学特性有明显差异,可用于对多西他赛的耐药机制和逆转耐药研究。
- 孙海耿建金洁陈龙邦
- 关键词：多西他赛肺腺癌耐药
- 凋亡抵抗在人肺腺癌SPC-A1/多西紫杉醇细胞系耐药机制中的作用被引量：6
- 2008年
- 目的:比较人肺腺癌细胞SPC-A1与耐多西紫杉醇细胞系SPC-A1/多西紫杉醇(Docetaxel)经多西紫杉醇诱导后凋亡的差异,研究抗凋亡机制在肺腺癌多西紫杉醇耐药中的作用。方法:以AnnexinV/PI双染法检测SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞经不同浓度多西紫杉醇诱导后的凋亡率,免疫组化法及RT-PCR法分别检测SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞bcl-2、bax在蛋白和mRNA水平的表达。结果:SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞的自然凋亡率分别为(7.5±1.1)%和(4.7±0.7)%;经5、10和20μg/L的多西紫杉醇作用48 h后,SPC-A1/Docetaxel细胞的凋亡率分别为(7.8±2.1)%、(11.3±3.1)%和(25.6±4.5)%,SPC-A1细胞的凋亡率分别为(23.7±4.5)%、(44.2±5.0)%和(40.9±2.8)%;各组SPC-A1/Docetaxel细胞的早期凋亡率均显著低于SPC-A1细胞(P<0.05)。免疫组化结果显示,SPC-A1/Docetaxel细胞中bcl-2蛋白表达较SPC-A1细胞明显升高(P<0.05),而bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与SPC-A1细胞相比,SPC-A1/Docetaxel细胞的bcl-2 mRNA表达升高(P<0.05),而bax mRNA表达降低(P<0.05)。结论:抗凋亡是肺腺癌SPC-A1/Docetaxel细胞多药耐药的机制之一,且与抗凋亡因子bcl-2表达上调和促凋亡因子bax表达下调相关。
- 刘小北孙海陈龙邦
- 关键词：肺腺癌多西紫杉醇凋亡耐药BAX
- 应用基因芯片技术筛选人肺腺癌SPC-A1多西他赛耐药差异表达基因被引量：3
- 2007年
- 背景与目的多西他赛是近年来应用于临床的一种有效的化疗药物,其独特的作用机制使其具有良好的应用前景,然而耐药性影响其更广泛的应用。本研究的目的是应用基因芯片比较人肺腺癌多西他赛耐药细胞系SPC-A1/Docetaxel与其亲本株基因表达的差异,筛选与耐药相关的基因。方法分别提取SPC-A1/Docetaxel与其亲本株SPC-A1的总RNA并纯化mRNA,将等量 mRNA逆转录合成cDNA,在Affy-metrix HG-U133A2.0基因芯片上杂交,扫描荧光信号图像,用Affymetrix Gene Chip Operating Software Ver-sion1.0软件进行数字化处理和分析,进一步采用RT-PCR验证部分差异表达基因。结果SPC-A1/Do-cetaxel与SPC-A1差异表达基因一共有934条,其中上调428条,下调506条。差异表达的基因涉及ABC运载体、凋亡、微管蛋白、信号传导、酶等多方面。RT-RCR验证显示,SPC-A1/Docetaxel细胞ABCB1、ABCC4、ABCG2、BCL-2、TUBB2A、TUBB2C、TUBB3的表达明显高于SPC-A1,而SPC-A1/Docetaxel细胞BAX的表达明显低于SPC-A1。结论这些差异表达的基因可能与人肺腺癌细胞的多西他赛耐药性相关。
- 孙海耿建陈龙邦
- 关键词：多西他赛基因芯片
- 肿瘤患者血清中Neu5Aca2-6Gal糖链序列的多糖分子表达的研究
- 目的:研究SNA识别的Neu5hca2-6Gal糖链序列的多糖分子在鼻咽癌、肺癌、肝癌和结直肠癌患者血清中的表达规律。
方法:应用SNA(接骨木凝集素)亲和层析法从正常人血清中获得SNA识别的Neu5Aca2-...
- 邹宁温居一孙海张积仁
- 关键词：鼻咽癌肺癌蛋白表达疗效评价指标
- 文献传递
- 一种新的蒽环类抗生素R_5抗肿瘤活性的初步研究被引量：2
- 2002年
- 为研究中国南海红树内生真菌No .14 0 3的次级代谢物R5的体外抗瘤作用 ,以蒽环类抗生素表阿霉素 (EPI)为阳性对照 ,采用MTT比色法检测R5对MCF 7细胞株的细胞毒性作用 ;AnnexinV FITC/PI双标法流式细胞术测定R5对MCF 7细胞株的诱导凋亡作用 ;透射电镜观察MCF 7细胞超微结构的改变。结果显示 ,R5对MCF 7细胞株有较好的体外抗瘤活性 ,且呈现时间、剂量依赖性 ,R5抑瘤作用与诱导肿瘤细胞凋亡相关 。
- 孙海张积仁
- 关键词：蒽环类抗生素抗肿瘤活性脱噬作用MTT比色法流式细胞术超微结构
- 西妥昔单抗对耐多西他赛肺腺癌细胞株放化疗敏感性的调变作用被引量：7
- 2007年
- 目的:研究西妥昔单抗(Cetuximab,C225)对耐多西他赛(Docetaxel)肺腺癌细胞株SPC-A-1/docetaxel放化疗敏感性的调变作用。方法:克隆形成实验观察C225对SPC-A-1/docetaxel细胞株放疗敏感性的影响;MTT比色法观察C225单独应用以及不同次序联合多西他赛对SPC-A-1/docetaxel细胞株的生长抑制作用;流式细胞术检测C225对SPC-A-1/docetaxel细胞凋亡及细胞生长周期的影响。结果:C225联合放疗可以显著减少SPC-A-1/docetaxel细胞的克隆形成数目,其D_0值以及单纯放疗的D_0值分别为1.73 Gy和2.39 Gy,增敏比为1.38。C225单药即使在高达1 000μg/ml的质量浓度下作用48 h对SPC-A-1/docetaxel细胞无细胞毒和生长抑制作用;在使用多西他赛之后使用C225,多西他赛的IC_(50)值为85.2μg/ml,较单独使用多西他赛时的IC_(50)值128.7μg/ml显著降低。C225单独应用可以诱导SPC-A-1/docetaxel细胞凋亡,并具有时间效应。C225处理(24h)前后G_1期细胞比例分别为(43.80±4.46)%及(60.50±6.57)%(P<0.05)。结论:C225增加了SPC-A-1/do- cetaxel细胞株对放化疗的敏感性,其机制可能与其诱导凋亡及G_1期细胞周期阻滞有关。
- 曾斐孙海陈龙邦
- 关键词：表皮生长因子受体西妥昔单抗化疗敏感性
- Ames实验及彗星实验检测辅酶NADH的抗突变作用被引量：2
- 2005年
- 采用Ames实验及单细胞凝胶电泳(SCGE,彗星实验),对还原型辅酶NADH进行抗突变研究。NADH中、高剂量组在加或不加S9的情况下,均能不同程度地抑制由致突变物引起的TA98、TA100回变菌落数的增加,降低SCGE拖尾细胞率。表明还原型辅酶NADH具有一定的抗突变作用。
- 温居一孙海张积仁
- 关键词：AMES实验彗星实验抗突变作用化疗药物细胞毒药物
- 紫杉类药物耐药机理研究进展
- 紫杉醇和多烯紫杉醇是以微管为作用靶点的的肿瘤化疗药物。自美国FDA1992年批准紫杉醇(Taxol)和1998年批准其半合成的类似物多烯紫杉醇(Docetaxel)上市后,紫杉类药物的临床适应症不断扩展,成为治疗卵巢癌、...
- 孙海耿建陈龙邦
- 文献传递
- 辐射诱导人鼻咽癌细胞CNE1、CNE2多药耐药的研究被引量：7
- 2005年
- 目的研究辐射诱导及逆转药物环孢霉素A(CsA)、干扰素α(IFNα)对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2多药耐药表达的影响。方法通过体外辐射处理诱导鼻咽癌细胞CNE1、CNE2,流式细胞术、RTPCR分析辐射诱导前后Pgp、MRP、TOPⅡ、GSTπ在蛋白、mRNA水平表达的改变。同时,研究CsA、IFNα逆转耐药处理对放疗诱导的多药耐药的影响。结果辐射诱导后CNE1、CNE2细胞Pgp、MRP、GSTπ在蛋白、mRNA水平表达上调,辐射后给予CsA、IFN处理可以逆转辐射诱导的Pgp、MRP蛋白表达上调。结论辐射可以诱导鼻咽癌细胞CNE1、CNE2出现多药耐药,而CsA、IFN可以逆转辐射诱导的多药耐药。
- 孙海刘发全温居一宫卫东邹宁张积仁
- 关键词：多药环孢菌素干扰素Α
- 肝癌的局部治疗被引量：4
- 2004年
- 原发性肝癌(简称肝癌,HCC)的治疗已发展为包括以手术切除为主,辅以介入疗法、化疗、免疫疗法、局部物理疗法和中医疗法等的综合治疗.
- 孙海张积仁
- 关键词：肝癌手术切除经血管介入治疗经皮射频治疗
