廖庆娇
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：武汉大学生命科学学院病毒学研究所更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒NS2蛋白在Huh-7细胞中抑制NF-κB活性
- 2004年
- 将丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS2基因的全长序列插入到真核表达载体pCDNA3.1(-)CMV启动子下游,构建成重组质粒pCNS2.用脂质体LipoVecTM转染Huh-7细胞,转染细胞内可检出NS2的mRNA和蛋白质,表明构建的pCNS2可在Huh-7细胞内成功表达;把不同剂量的pCNS2质粒DNA与报告质粒pNF-κ B-Luc共转染Huh-7细胞,48h后检测荧光素酶活性,结果显示与pCNS2共转染的细胞中pNF-κ B-Luc表达出的荧光素酶的活性比对照细胞降低了约2～4倍,并呈明显的剂量相关性.表明HCV NS2对NF-κ B激活转录活性有明显的抑制作用.这可能与HCV慢性持续性感染的致病性有一定的相关性.
- 阳帆叶林柏刘静杨小骏廖庆娇佘应龙叶力
- 关键词：丙型肝炎病毒真核表达载体
- HCV5A基因在Hela细胞中的稳定表达及对细胞生长的抑制现象被引量：2
- 2004年
- 应用PCR技术从含有HCV(HepatitisCvirus)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV1-3011中获得NS5A全长基因片断,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中。通过酶切、PCR及测序鉴定NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中,再利用脂质体介导转染Hela细胞,48h后传代并利用pcDNA3.1(-)质粒上的neo抗性基因加入G-418进行筛选。大约两周后,获得稳定表达的细胞株。经RT-PCR及westernblot验证,证实HCV的NS5A基因在Hela细胞中已经获得了表达。在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Hela细胞与pcDNA3.1(-)转染的细胞相比,生长速度明显变慢,其倍增时间约为35-36h,比对照组细胞增加了约50%,而转染pcDNA3.1(-)的细胞的倍增时间与正常Hela细胞则无明显差别,都为23-24h。从而证明HCV的NS5A蛋白具有抑制Hela细胞生长的作用。
- 杨小骏叶林柏郜金荣刘静阳帆叶力佘应龙廖庆娇吴正辉郑义
- 关键词：丙型肝炎病毒HCVPCR技术HELA细胞细胞生长
