徐建永
- 作品数：12 被引量：62H指数：5
- 供职机构：广州医科大学卫生职业技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人内皮抑素基因改造、表达、纯化和活性检测
- 目的:对已定点诱变的人内皮抑素(Endostatin)基因进行改造并克隆,以减小其分子量,提高临床应用安全性.初步检测其表达蛋白的生物学活性.方法:用限制性内切酶酶切重组质粒PET-11a/诱变Endostatin,得到...
- 徐建永
- 关键词：人内皮抑素基因改造DNA重组
- 文献传递
- 生物化学与分子生物学实验教学模式的探索被引量：5
- 2007年
- 随着生物化学和分子生物学的快速发展,其理论和技术被广泛应用于医学领域。采用合理的教学手段和科学的教学模式是生物化学与分子生物学实验教学的目标和重点。针对传统实验教学不利于培养学生创新思维,实际操作能力和自主发展的实际问题,从自主性教学模式、双语教学、综合应用能力的培养等几方面进行了探索和尝试,并取得了一定的效果。
- 徐建永刘远莉
- 关键词：生物化学与分子生物学教学模式实验教学
- 肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性被引量：7
- 2005年
- 为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物.
- 王淑静刘岩林雪松付雪徐建永刘兴汉
- 重组人内皮抑素的纯化及抗肿瘤活性研究被引量：6
- 2005年
- [目的]从高效表达的基因工程菌中纯化重组人内皮抑素,对其抗肿瘤活性进行研究。[方法]经异丙基硫代鄄β鄄D鄄半乳糖苷(IPTG)诱导,重组人内皮抑素在大肠杆菌基因工程菌中以包涵体形式高效表达。通过凝胶层析纯化重组内皮抑素蛋白。应用鸡胚绒毛尿囊膜实验(CAM),肺癌细胞MTT试验及细胞迁移抑制实验,裸鼠皮下移植喉癌抑瘤实验、病理组织切片、免疫组化指标的测定等检测研究重组人内皮抑素的抗肿瘤活性。[结果]重组内皮抑素的复性率可达40%。重组内皮抑素在体外直接抑制肺癌细胞的增殖及迁移。用药21天,对裸鼠皮下移植喉癌的抑瘤率达到40.66%,HE染色、免疫组化及CAM实验表明其对肿瘤组织新生血管的生成有较强的抑制作用。[结论]重组人内皮抑素具有抑制肿瘤组织新生血管生成和直接抑制肿瘤细胞生长和迁移的双重抗肿瘤活性。
- 张广美王淑静任明华徐建永刘远莉陶占华李冀宏刘兴汉
- 关键词：内皮抑素蛋白表达蛋白纯化
- 肿瘤抑素相关肽抗肿瘤活性研究被引量：4
- 2005年
- [目的]评价肿瘤抑素相关肽19肽和21肽抗肿瘤活性。[方法]已构建好的19肽和21肽重组质粒在大肠杆菌BL-21(DE3)中表达,经几丁质亲和层析柱纯化出19肽和21肽。用SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳对表达及纯化结果进行初步鉴定,进行19肽、21肽和19肽+21肽的腹水型转移型小鼠H22肝癌实体瘤模型大体抑瘤实验,并做组织病理学切片分析。[结果]经一步亲和层析可获得可溶性19肽和21肽。19肽,21肽,19肽+21肽联合用药组在小鼠抑瘤实验中抑瘤率分别达48.46%,42.86%,53.94%。组织病理学切片结果可见3种给药方式都可促进小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少。
- 王淑静付雪徐建永李冀宏陶占华刘远莉刘兴汉
- 关键词：肿瘤抑素蛋白表达蛋白纯化肿瘤
- 经典PBL与讨论自主型PBL教学方法在生物化学教学中的比较研究被引量：4
- 2013年
- 目的:比较经典PBL与讨论自主型PBL在生物化学教学中的应用。方法:随机选取三个班分别进行传统教学法,经典PBL和讨论自主型PBL教学法,并对教学效果进行比较。结果:三个班学生考核成绩无差异。问卷分析显示两种PBL方式在综合能力等方面无差异,而在对导师评价上有差异。结论:讨论自主型PBL同样有助于提高学习积极性、自主性及综合能力培养,但对临床思维培养和学生评价有待完善。
- 徐建永贺鑫邝雪英邱伯房仲其军
- 关键词：PBL生物化学教学
- 重组人成骨生长肽的表达、纯化和活性的研究被引量：14
- 2004年
- 将人工合成的人成骨生长肽基因 (hOGPgene) ,与质粒pTYB2 重组 ,转化大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3) .经异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,融合蛋白在E .coli中得到表达 .菌体经超声破碎 ,一步亲和层析纯化得到重组人成骨生长肽 (recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide ,rhOGP) .体外实验证明 :rhOGP对成纤维细胞 (NIH3T3)的增殖有促进作用 .体内实验证明 :rhOGP加速兔移植骨成活 ,使血清中碱性磷酸酶活性增高 ,骨钙素增高 .重组人成骨生长肽促进成骨 。
- 余琼周凌云林雪松徐建永王淑静刘兴汉
- 关键词：成骨生长肽融合蛋白活性成骨
- 大麻受体激动剂WIN对白血病K562细胞增殖和诱导凋亡作用的研究
- 2014年
- 目的探讨大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)对白血病K562细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分成对照组和不同剂量大麻受体激动剂WIN用药组。CCK-8测定WIN对K562细胞增殖的影响;DAPI染色观察细胞核形态变化;JC-1分析线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化;Western印迹法分析Bax、Bcl-2及C-myc蛋白的表达。结果与对照组相比较,5、10、20μmol/L的WIN处理K562细胞24、48 h后,增殖抑制作用明显且具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。DAPI染色和线粒体膜电位检测结果显示,K562细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率升高。WIN处理24 h后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性均增加(P<0.05)。Western印迹法显示,Bax蛋白表达增加,C-myc、Bcl-2蛋白表达下降。结论大麻受体激动剂WIN能抑制白血病K562细胞增殖,并诱导凋亡,其机制可能通过上调Bax蛋白表达,下调C-myc、Bcl-2蛋白表达,以及促使线粒体跨膜电位下降,激活Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白而实现。
- 徐建永许达才洪跃辉陈新美赵青
- 关键词：K562细胞凋亡增殖
- 重组人成骨生长肽治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验观察被引量：6
- 2004年
- 目的探讨重组人成骨生长肽(recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide,rhOGP)对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,经rhOGP治疗12周后,测定骨密度(BMD)、血清中的酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)。结果rhOGP治疗组碱性磷酸酶(233.77±42.07)U/L、骨钙素(1.95±0.15)μg/L和骨密度明显高于骨质疏松模型组(156.23±23.38)U/L、(1.33±0.24)μg/L(P<0.01),而酸性磷酸酶(19.27±4.24)U/L,明显低于骨质疏松模型组(29.98±3.08)U/L(P<0.05)。结论rhOGP能刺激成骨细胞的活性,增加骨密度,提高骨量,对去卵巢大鼠所引起的骨质疏松有效,有可能成为治疗骨质疏松症的有效药物。
- 余琼周凌云刘兴汉徐建永王淑静周宏博林雪松
- 关键词：去卵巢骨质疏松
- 重组人内皮抑素的结构改造及抗肿瘤活性变化被引量：18
- 2005年
- 内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑素的抑瘤率分别为 4 0 6 6 %和5 1 0 5 % ,诱变内皮抑素抑瘤率比野生内皮抑素提高了近 11个百分点 .病理切片HE染色诱变组肿瘤的血管生成比野生组明显减少 ,坏死灶增多 .免疫组化试验中 ,诱变组在微血管密度MVD(P <0 0 5 )、血管内皮生长因子VEGF(P <0 0 5 )、增殖细胞核抗原PCNA(P >0 0 5 )三个指标上均比野生组减小 .体外细胞实验中 ,MTT结果表明 ,野生组内皮抑素半数抑制浓度IC50 =185 μg ml,诱变组内皮抑素IC50 =2 7μg ml,诱变组抑瘤活性是野生组的 6倍 .细胞迁移抑制实验表明 ,野生组与诱变组内皮抑素均对肿瘤细胞迁移有抑制作用 ,野生组迁移抑制率为 6 8 95 % ;诱变组迁移抑制率为89 94 % .上述结果说明 ,内皮抑素除抑制血管生成外 ,对肿瘤细胞的生长和迁移也有一定的抑制作用 .诱变内皮抑素通过RGDRGD序列与整合素结合而提高了抗肿瘤活性 .
- 任明华王淑静林雪松徐建永陶站华赵炜明刘兴汉
- 关键词：内皮抑素定点突变RGD序列抗肿瘤活性
