李小鸥
- 作品数：27 被引量：42H指数：5
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金武汉市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T591),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化。对纯化后的蛋白进行Western印迹分析。构建TACE信号肽+前肽结构域(T648)的真核表达质粒(pEGFP-N1/T648),将其瞬时转染HeLa细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达观察pEGFP-N1/T648转染后在细胞中分布情况。建立小鼠内毒素血症模型组,前肽重组蛋白治疗组和PBS对照组,通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞mTNF-α的表达,并取肝,肺,肾组织行HE染色,观察纯化的前肽蛋白对炎症的抑制作用。结果成功构建了pEGFP-N1/T648真核表达载体,在体外转染HeLa细胞,可见荧光主要分布在细胞膜上。流式细胞技术证明重组前肽蛋白可明显对抗LPS诱发的sTNF-α分泌增加,使小鼠腹腔巨噬细胞膜表面mTNF-α增加,常规病理切片HE染色显示该蛋白可降低LPS诱发的小鼠肝,肾,肺组织的炎症反应。结论TACE前肽重组蛋白降低了sTNF-α的分泌,对炎症有明显的抑制作用,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛周玉杨渝珍王宏伟
- 关键词：肿瘤坏死因子Α抑制剂
- 肿瘤坏死因子前体转换酶前肽结构域对TACE活性调节作用被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)的前肽结构域在TACE成熟过程中所起的作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,利用DNA重组技术分别构造含信号肽结构域+前肽结构域、全长结构域及缺失前肽结构域的真核表达重组体,根据其碱基数目分别命名为pIRES2-EGFP/T648、pIRES2-EGFP/T2472、pIRES2-EGFP/T57-T1824;真核转染U937细胞;LPS刺激转染细胞后,用ELISA法及流式细胞技术检测TNF-α。结果:pIRES2-EGFP/T648的真核表达能显著抑制TACE的活性,减少sTNF-α分泌,抑制率达61.09%;pIRES2-EGFP/T57-T1824的真核表达对sTNF-α的分泌无影响;pIRES2-EGFP/T2472的真核表达能显著增加sTNF-α分泌。结论:前肽结构域在TACE的成熟过程中起了双重作用,TACE抑制剂的研制和开发为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法。
- 李小鸥阎媛黄巍杨渝珍王宏伟
- 早产儿血清维生素D、炎性因子和呼吸衰竭的关系研究被引量：5
- 2021年
- 目的探讨维生素D、维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,DBP)和炎性因子与早产儿急性呼吸衰竭的关系。方法选取2018年9月~2019年3月,武汉大学人民医院新生儿科重症监护病房(neonatal intensive care unit,NICU)收治的92例早产儿,胎龄<34周,体重<2.0kg。根据早产儿入院后是否发生呼吸衰竭(neonatal respiratory failure,NRF)分为呼吸衰竭组(NRF组)和对照组。所有患儿均在出生24h内静脉取血并采用双抗体夹心酶联免疫分析法(ELISA)检测维生素D、DBP和炎性因子(PCT、IL-6和TNF-α)水平。结果与对照组比较,NRF组患儿25OHD 3、DBP水平均降低(P<0.05),PCT和IL-6水平明显升高(P<0.05);且NRF组25OHD 3总缺乏率为80%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示NRF组25OHD 3与PCT、IL-6水平呈负相关;早产儿出生时25OHD 3升高是NRF的保护因素;新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)、新生儿肺炎、新生儿败血症合并炎性因子水平升高均是NRF的危险因素;DBP与NRF和25OHD 3无相关性。结论早产儿静脉血25OHD 3,DBP有望成为早期预测NRF的临床新指标,对早产儿进行维生素D水平的早期监测具有重要意义。
- 李小鸥谢莉莉何兵方成志
- 关键词：早产儿呼吸衰竭维生素D维生素D结合蛋白
- 细胞因子在小儿病毒性心肌炎中的表达和意义及其药物干预
- 黄星原江端王世红魏丽邓巍何兵牛萍李小鸥夏光
- ①课题来源与背景：湖北省科技厅(2003AA301C21)，病毒性心肌炎(VMC)是由病毒侵犯心脏所引起的疾病，严重者可致猝死。②研究目的与意义：研究细胞因子对VMC的作用，对深入认识VMC的发病机制，探索新的治疗手段具...
- 关键词：
- 关键词：病毒性心肌炎治疗病理生理学药物治疗
- 淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌被引量：1
- 2015年
- 目的观察淀粉样前体蛋白(APP)β位点单链抗体(sc Fv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础。方法以APPβ位点sc Fv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pc DNA3.1hyg(^+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(s APPα)的含量,并分别比较两者的变化。结果经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APPβ位点sc Fv基因片段,且与真核表达载体正确相连。转染APP695sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4%、s APPα水平上升23.1%。结论 APPβ位点sc Fv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂。
- 黄巍周丽荣李小鸥孙红霞周婷黄晓刚刘桥
- 关键词：淀粉样前体蛋白单链抗体Β淀粉样肽
- 解整合素金属蛋白酶10基因慢病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的:构建解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒载体,为进一步体内外实验研究提供基础。方法:筛选确定ADAM10基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与LentiLox3.7载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒转导传代心肌细胞(H9C2),通过Western blotting检测心肌细胞ADAM10的蛋白表达。结果:获得的载体插入ADAM10的shRNA核苷酸链序列正确,包装的慢病毒颗粒转导心肌细胞,与对照组比较ADAM10 shRNA转染成功抑制ADAM10蛋白表达。结论:成功构建AD-AM10 shRNA慢病毒载体,为其在扩张型心肌病(DCM)中的生物学功能研究奠定基础。
- 李小鸥黄巍何兵周丽荣
- 关键词：RNA干扰慢病毒扩张型心脏病
- 支气管肺泡灌洗液炎性因子及肺泡表面活性蛋白与新生儿急性呼吸窘迫综合征的关系被引量：6
- 2022年
- 目的观察急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)新生儿支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)炎性因子、肺泡表面活性蛋白(surfactant protein,SP)水平变化,探讨其与新生儿发生ARDS的相关性。方法需机械通气的ARDS新生儿30例为ARDS组,根据氧合指数分为轻度组(氧合指数4.0~<8.0)11例,中度组(氧合指数8.0~<16.0)12例,重度组(氧合指数≥16.0)7例;因其他疾病需机械通气新生儿25例为对照组。比较ARDS组与对照组应用肺表面活性物质、脓毒症、窒息比率及机械通气时间等。ARDS组于呼吸机上机前、上机24 h时、撤机前,对照组于呼吸机上机前收集BALF,采用ELISA法检测BALF白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、SP-A、SP-D水平;比较上机前ARDS组与对照组及ARDS组上机前、上机24 h时、撤机前BALF IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、SP-A、SP-D水平,比较轻、中、重度组上机24 h时BALF IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α、SP-A、SP-D水平。采用Pearson相关分析ARDS新生儿上机24 h时BALF SP-A水平与IL-6、IL-10、IL-17、TNF-α水平的相关性;采用多因素logistic回归分析新生儿发生ARDS的影响因素。结果ARDS组应用肺泡表面活性物质、脓毒症、窒息比率(86.67%、40.00%、46.67%)均高于对照组(20.00%、4.00%、8.00%)(χ^(2)=6.857,P<0.001;χ^(2)=7.329,P<0.001;χ^(2)=8.968,P<0.001),机械通气时间[(4.20±1.50)d]长于对照组[(1.00±0.20)d](t=2.432,P=0.004)。上机前ARDS组BALF IL-6[(198.32±10.23)ng/L]、IL-17[(118.42±73.55)ng/L]、TNF-α[(52.63±9.77)ng/L]水平均高于对照组[(125.61±10.39)、(98.03±54.91)、(42.67±15.31)ng/L](P<0.05),SP-A[(38.96±1.24)ng/L]、SP-D[(9.71±0.07)ng/L]水平均低于对照组[(45.95±1.87)、(12.62±0.05)ng/L](P<0.05),IL-10水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。上机24 h时ARDS组BALF IL-6、IL-17、TNF-α水平均高于上机前、撤机前(P<0.05),SP-A、
- 李小鸥黄红丽方成志
- 关键词：急性呼吸窘迫综合征支气管肺泡灌洗液炎性因子
- 敲低阿霉素心肌病大鼠心肌细胞ADAM10后大鼠心功能的改善及机制被引量：2
- 2018年
- 目的建立阿霉素心肌病动物模型,观察解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)小干涉RNA(siRNA)重组慢病毒对神经钙黏素(N-cadherin)加工水解途径的调控。方法 SD大鼠腹腔注射阿霉素,建立阿霉素心肌病大鼠模型。将ADAM10 siRNA重组慢病毒进行心内注射,分为模型组、重组慢病毒治疗组、空白载体组及正常对照组。分离原代心肌细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,确定感染效率。超声检测各组大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病变情况,Western blot法检测心肌细胞N-cadherin在ADAM10水解后产生的C末端片段1(CTF1)的蛋白水平,免疫组织化学染色检测心肌组织N-cadherin的表达和分布。结果原代培养的感染后心肌细胞可见大量GFP表达,说明慢病毒成功感染心肌细胞;与阿霉素心肌病组相比,ADAM10 siRNA重组慢病毒治疗组死亡率下降,心功能及心肌组织形态明显改善,心肌细胞N-cadherin蛋白水平增加并主要定位于细胞表面、CTF1蛋白水平降低。结论敲低ADAM10水平,增加阿霉素心肌病大鼠心肌细胞N-cadherin的表达、降低CTF1的表达,改善心功能。
- 李小鸥谢莉莉何兵黄巍
- 关键词：阿霉素心肌病慢病毒
- 靶向沉默ADAM10基因对心肌细胞N-cadherin加工的影响被引量：3
- 2012年
- 目的:研究心肌细胞中解整合素金属蛋白酶家族(ADAMs)成员ADAM10在神经型钙黏蛋白(N-cadherin)底物加工过程中的重要性,为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础。方法:将质粒sc-270165 ADAM10 siRNA(r)转染入大鼠心肌细胞(H9c2),建立ADAM10稳定沉默的心肌细胞株。通过Western blotting检测心肌细胞N-cadherin及其C末端片段(CTF)的蛋白表达,流式细胞术检测心肌细胞表面N-cadherin的表达。利用黏附实验检测其对细胞黏附能力的影响。结果:与阴性对照组相比,ADAM10基因沉默组心肌细胞N-cadherin蛋白表达提高,CTF蛋白表达减少;细胞表面N-cadherin的表达增多,心肌细胞黏附能力提高。结论:心肌细胞中ADAM10在N-cadherin的加工水解过程中可能发挥了作用。
- 李小鸥黄巍陈亚隽周丽荣
- 关键词：ADAM10细胞黏附
- 川崎病109例临床特征分析被引量：6
- 2012年
- 目的通过探讨109例川崎病(KD)患儿的临床表现及特征,从而为KD的临床诊断提供参考信息。方法对109例KD患儿的年龄分布、性别、主要症状与体征、实验室检查及治疗结果进行比较分析。结果 KD患儿临床表现为球结合膜充血者占78.9%,口唇皴裂占65.1%,杨梅舌占33.9%,淋巴结肿大占49.5%,皮疹占60.6%,手足硬肿占57.8%,冠状动脉病变25.7%,腹水0.92%。103例KD患儿接受大剂量静脉丙种球蛋白及阿司匹林治疗,其中92例患儿首次丙种球蛋白治疗后病情好转,6例首次丙种球蛋白治疗无效的患儿,再次予以丙种球蛋白治疗,其中5例患儿治疗有效;6例KD患儿确诊后,给予糖皮质激素及阿司匹林治疗,其中5例患儿有不同程度的冠脉损伤。结论 KD好发于5岁以下小儿,特别是婴幼儿,及早诊断并尽快静脉给予丙种球蛋白治疗,可以减少冠脉病变的几率,提高治愈率。
- 何兵孙燕李小鸥金红芳
- 关键词：川崎病冠状动脉损害血管炎
