李艳秋
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 供职机构：安徽医科大学基础医学院微生物学教研室更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCMV截短UL83基因真核表达重组体的构建、转染及其免疫效力研究被引量：2
- 2006年
- 为了构建人巨细胞病毒（HCMV）截短UL83基因真核表达重组体，实现其在Hep-2细胞中的稳定表达，研究该截短UL83基因真核表达重组体免疫效力，采用基因重组的方法，将HCMVAD169株截短UL83基因定向克隆到带有绿色荧光蛋白（GFP）作为报告基因的真核表达载体pEGFP-C1上，构建真核重组表达质粒pEGFP-C1-UL83；脂质体转染至Hep-2细胞中，G418筛选获得稳定表达pp65细胞表达系。经基因测序屁示，重组体中截短UL83基因完全正确。RT-PCR和Westem blot检测证实其可在Hep-2细胞中稳定表达。用该重组体和其表达产物在HCMV先天性感染小鼠模型上进行免疫保护试验显示，母鼠血清可检测到特异性抗HCMVpp65抗体，效价为：1：2．51～1：50．79；子鼠脑组织内未分离出病毒，亦未检测出病毒pp65蛋白抗原表达。初步结果表明，pEGFP-C1-UL83具有较好的免疫原性，可作为DNA疫苗刺激机体产生有效抗体。并具有阻止病毒垂直传播的保护性作用。
- 高荣保李艳秋王明丽
- 关键词：绿色荧光蛋白转染HEP-2细胞DNA疫苗
- HCMV AD169株感染复数(MOI)的确定被引量：2
- 2001年
- 目的 通过蚀斑形成试验测定人巨细胞病毒(HCMV)AD16 9株的蚀斑 (PFU)确定其感染复数 (MOI)并纯化病毒。方法 HCMVAD16 9株接种 7～ 8代HF细胞单层 ,37℃吸附 ,0 0 0 7琼脂糖覆盖层 ,1周后加第 2层覆盖 ,2周后用 0 0 0 0 5结晶紫染色 5min ,记数 ,计算PFU及MOI;染色前 ,镜下挑取蚀斑保藏并鉴定。结果 蚀斑经 0 0 0 0 5结晶紫染色在HF细胞单层上呈紫色 ,很易识别 ,散在均匀分布 ,着色深 ,与周围区域界限明显 ,MOI =3 41× 10 4 。结论 探索出HCMVAD16 9株感染复数 (MOI)
- 韩俊王明丽姜永忠詹以森李艳秋余莉
- 关键词：巨细胞病毒属提纯HCMV
- 人巨细胞病毒cDNA文库的构建、鉴定及pp65阳性克隆筛选被引量：3
- 2004年
- 为进一步进行人巨细胞病毒 (HCMV)后基因组功能的研究 ,以及为疫苗分子和早期诊断试剂的研制提供有效工具 ,从HCMVAD1 69株感染 96h的HF细胞中提取HCMV的mRNA ,逆转录合成cDNA片段 ,重组入λgt1 1EcoRI酶切位点之间 ,包装蛋白包装 ,构建HCMVAD1 69株基因组cDNA表达文库。结果表明 ,初始HCMVcDNA文库容量为 3 6× 1 0 6,重组率为 96% ;HCMV鼠多克隆抗血清筛选出 1 68个HCMV阳性克隆 ;地高辛标记pp65特异性寡核苷酸探针原位噬斑杂交筛选出 3 4个pp65阳性克隆 ,再经PCR扩增 ,筛选出 2个pp65阳性克隆 ;pp65PCR扩增产物进一步被Southernblotting证实 ;3 端测序比较 ,同源性为 98%。为进一步克隆。
- 韩俊李艳秋姜永中余莉王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒PP65CDNA表达文库
- 人巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其体外中和活性鉴定
- 2002年
- 目的 制备具有中和人巨细胞病毒 (HCMV)感染作用的单克隆抗体并对其进行生物学活性鉴定。方法 用HCMV抗原免疫Balb/c小鼠 5、6次后 ,取致敏的脾脏B淋巴细胞和HGPRT SP2 /0小鼠骨髓瘤细胞进行融合 ,在HAT选择培养基中培养 2周 ,间接ELISA法筛选克隆。挑取分泌抗体的杂交瘤株 ,再用间接ELISA进行鉴定 ,最终获得抗HCMV的阳性杂交瘤细胞株 ,用Ouchterlony法鉴定McAb的亚类。小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞 ,取腹水经盐析法提纯IgG。Lowry法测定蛋白质浓度 ,在第 6代HF细胞株及原代培养新生乳鼠脑神经细胞上进行微量中和实验。结果 获得了 4株杂交瘤细胞株 ,制备的F9McAbs盐析后蛋白质浓度为 11 2g/L ,血清学试验证明该McAbs能和HCMV抗原进行特异性结合 ,制备的IgG具有高度特异性。且体外实验已证实 ,该McAb具有中和抗体的性质。结论 通过杂交瘤技术制备的HCMV单克隆抗体能在体外中和HCMV致病变效应 。
- 姜永忠王明丽李艳秋余莉胡勇毕克菊
- HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达被引量：1
- 2003年
- 目的 研究人巨细胞病毒 (HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况。方法 将 6～ 8周龄BALB/c小鼠分为 6组 ,每组 6只 ,♀♂各半。A组腹腔注射HCMV 1 0ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1 0ml后2d ,分别每天腹腔注射氨基胍 (AG) 2 0 0mg/kg、2 0mg/kg ,D组、E组腹腔注射HCMV 1 0ml后 2d ,分别每天腹腔注射左旋精氨酸 (L Arg) 30 0mg/kg、30mg/kg ,F组为DMEM对照组 ,每天每只 0 2ml。持续 17d。以上各组在孕鼠受孕第19天 ,剖腹取胎鼠 ,观察各组胎鼠生长发育及体重 ,有无皮下出血、淤血等情况 ,同时取胎鼠脑组织 ,作以下检测 :①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量。②RT PCR测iNOSmRNA的转录。结果 HCMV感染各组孕鼠在孕 19d ,其体重明显低于对照组 ,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象。感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组 (P <0 0 0 1) ,以B组尤为明显 ,A、C、E组间无差异显著性。RT PCR在感染各组均扩增出iNOSmRNA特异性条带表达 ,B组信号量最高 ,D组信号最弱。DMEM对照组未检测到iNOS特异性条带。结论 HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达 ,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤?
- 余莉李艳秋张文艳方草晖类延花吴建军金晶王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒感染胎鼠脑组织INOS基因
- HCMV pp65 DNA疫苗诱导小鼠的细胞免疫应答被引量：8
- 2003年
- 目的 构建含HCMV pp65336～ 50 7位氨基酸的重组真核表达质粒 pcDNA3 1 pp65作为HCMVpp65基因疫苗 ,观察其诱导小鼠的细胞免疫应答情况。方法 以 6～ 8周龄♀Balb/c小鼠为动物模型 ,试验组和对照组各 6只。试验组于股四头肌注射pp65DNA疫苗 ,对照组注射空载体pcDNA3 1。 2组小鼠分别在 0d、5d、3周注射该DNA疫苗 2 0 0μg。在末次免疫后 3d ,无菌取小鼠脾细胞 ,并用ConA和重组HCMV pp65336～ 50 7作为抗原刺激 ,吉氏液染色观察T淋巴细胞的形态学变化 ,并计算转化率。MTT法对脾脏的特异性杀伤细胞率和淋巴细胞的增殖指数进行测定 ,间接ELISA定量检测脾细胞上清中IFN γ的含量。结果 pp65336～ 50 7抗原刺激的DNA疫苗免疫鼠脾细胞体积变大 ,胞浆增多 ,核仁增多 ;淋巴细胞增殖试验示pp65336～ 50 7抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞增殖 ;试验组IFN γ较对照组增高 ,其含量为 80 0ng/L。与对照组比较 ,差异均具显著性 (P<0 0 5)。试验组及对照组脾细胞杀伤率分别为 :56 0 5 %±1 3 64 %、9 85 %± 2 0 6 % ,试验组脾细胞CTL活性比对照组增高 (P <0 0 5)。
- 李艳秋余莉方草晖张文艳王明丽
- 关键词：HCMVPP65DNA疫苗小鼠细胞免疫应答巨细胞病毒感染
- 人巨细胞病毒pp65 DNA疫苗的研制及其免疫保护作用的实验研究
- 从HCMV AD169中扩增出pp65(1006-1521nt)抗原优势表位基因,分别克隆至原核和真核表达载体,制备了pp65蛋白质疫苗和pp65 DNA疫苗;观察其诱导Balb/c小鼠产生的体液免疫应答和细胞免疫应答,...
- 李艳秋
- 关键词：人巨细胞病毒DNA疫苗蛋白质疫苗细胞毒性T淋巴细胞
- 文献传递
