杨佳佳
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 青少年抑郁症患者照顾者躯体症状及影响因素的研究
- 背景:随着我国抑郁症（MDD）发病率不断增长,心身皆处于发展中的青少年的抑郁发病情况堪忧,其背后存在着的庞大照顾者人群正饱受精神与物质的双重负担,照顾者的健康问题日益凸显。目前的研究主要关注照顾者的心理状况,对青少年抑郁...
- 杨佳佳
- 关键词：青少年抑郁症照顾者躯体症状
- HBV-DNA实时荧光定量PCR检测试剂盒性能验证
- 目的：基于ISO15189：2012要求,对一种国产HBV-DNA实时荧光定量PCR检测试剂盒的性能参数进行验证,以评价其是否可应用于临床检测.结果：试剂盒正确度符合要求(＜靶值对数值±0.4).低值和高值的批内精密度C...
- 杨佳佳张彦懿刘华伟黄江渝
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量PCR试剂盒
- 转录因子Twist基因慢病毒质粒构建及其促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化被引量：4
- 2014年
- 目的 :构建转录因子Twist基因的慢病毒质粒,其高表达促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)。方法 :pcDNA3/myc-tagged-Twist质粒扩增并亚克隆至载体pLVX-puro中构建成pLVX-puromyc-tagged-Twist慢病毒质粒。将其转染人胚肾细胞HEK293T,收取病毒上清感染乳腺癌MCF-7细胞。免疫荧光法和蛋白质印迹法(Western blot)检测转录因子Twist蛋白、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)的表达。Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒酶切及测序结果完全正确;相对于对照细胞(MCF-7-Vector细胞),转染Twist基因的MCF-7细胞(MCF-7-Twist细胞)Twist蛋白、间质标志蛋白Vimentin表达水平明显升高,上皮标志蛋白E-cadherin表达水平明显降低(P<0.05),侵袭能力显著增强(P<0.05)。结论:pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒构建成功,转录因子Twist通过MCF-7细胞上皮间质转化促进了乳腺肿瘤侵袭能力增强。
- 胡萍杨佳佳黄翼曾宗跃唐曦黄杰涛柳满然
- 关键词：TWIST慢病毒MCF-7上皮间质转化
- 高表达ITGB1促进人乳腺上皮MCF10A细胞EMT及迁移被引量：2
- 2016年
- 目的探讨ITGB1基因过表达对人乳腺上皮MCF10A细胞迁移和侵袭的影响。方法构建重组质粒p BABEpuro-myc-ITGB1,在人胚肾上皮细胞系293T细胞中包装反转录病毒,转染人乳腺上皮MCF10A细胞系,构建ITGB1基因过表达的稳定细胞系;实验设空白对照组(MCF10A)、阴性对照组(MCF10A-vector)和ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1);经嘌呤霉素筛选后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测ITGB1 mRNA及蛋白的表达;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞株迁移和侵袭能力;蛋白质印迹法进一步检测上皮间质转换(EMT)相关蛋白E-cadherin、vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK、p-FAK和FAK蛋白的表达。结果成功构建ITGB1基因稳定过表达人乳腺上皮MCF10A细胞系;ITGB1基因过表达组(MCF10A-ITGB1)与空白对照组(MCF10A)和阴性对照组(MCF10A-vector)细胞相比,迁移能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)显著增强;EMT相关蛋白E-cadherin显著下调(P<0.05),vimentin、fibronectin、N-cadherin以及ITGB1下游ILK,p-FAK蛋白显著上调(P<0.05)。结论在人乳腺上皮MCF10A细胞中,过表达ITGB1基因诱导细胞EMT并促进其迁移和侵袭。
- 郎磊周明莉杨佳佳杜燕娥文思阳柳满然
- 关键词：细胞迁移细胞侵袭
- 丙型肝炎病毒-核糖核酸定量检测系统的性能验证及评价
- 2020年
- 目的对基于Smart 32核酸提取仪和Roche Cobas z480实时荧光PCR仪的丙型肝炎病毒(HCV)-核糖核酸(RNA)定量检测系统进行性能验证。方法依据中国合格评定国家认可委员会(CNAS)-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》的方案,采用标准物质及临床样本,对检测系统的正确度、精密度、线性范围、抗干扰能力、检出限、最低定量限进行验证,同时计算各性能参数与制造商声明比较。结果精密度验证结果显示,高、低浓度水平样本的重复性精密度变异系数(CV)值分别为1.54%、3.61%,中间精密度CV值分别为2.16%、4.42%,均小于厂家声明的5%。正确度:低、中值两个浓度水平标准物质的均值与靶值的误差分别为0.06和0.08,均<±0.4。线性范围:经拟合分析,证实在50~1.2×107 IU/mL呈良好线性(R2=0.9955>0.97)。抗干扰能力验证:结果显示,含30 mg/dL胆红素、3.2 g/dL甘油三酯、30 g/dL血红蛋白、6 g/dL白蛋白的干扰物质对样本检测结果无影响,且对甘油三酯和血红蛋白的抗干扰能力略高于厂家声明。检出限20 IU/mL,最低定量限50 IU/mL也与制造商声明一致。结论HCV-RNA定量检测系统正确度、精密度、线性范围、抗干扰能力、检出限、最低定量限各项性能指标与制造商声明一致,满足国际标准化组织(ISO)15189要求,可用于临床检测。
- 张彦懿杨佳佳骆贞红刘华伟黄江渝
- 关键词：丙型肝炎病毒核酸定量
- Twist基因逆转录病毒载体的构建及其诱导正常乳腺上皮细胞发生上皮间质转化被引量：3
- 2013年
- 目的构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响。方法酶切pcDNA3/mycTwist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-myc-Twist。通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞。通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达。免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达。Transwell^(?)法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell^(?)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.01)。结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭。
- 杨佳佳胡萍周明莉黄杰涛柳满然
- 关键词：TWIST逆转录病毒
- Twist通过调节下游信号网络促进人乳腺上皮细胞EMT转化及细胞迁移
- 目的：研究Twist对乳腺上皮细胞EMT转化、细胞迁移和侵袭能力的影响及其下游信号网络的调控。 方法：(1)酶切pcDNA3/myc-Twist获得myc-Twist，克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro质粒中，构...
- 杨佳佳
- 关键词：TWIST乳腺上皮细胞细胞迁移
- HBV-DNA实时荧光定量PCR检测试剂盒性能验证被引量：9
- 2018年
- 目的基于ISO15189:2012要求,对一种国产HBV-DNA实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒的性能参数进行验证,以评价其是否可应用于临床检测。方法依据《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件对试剂盒的正确度、精密度、检测下限、线性范围、特异度和抗干扰能力进行性能验证。结果试剂盒正确度符合要求(<靶值对数值±0.4)。低值和高值的批内精密度CV为4%、0.65%,标准差(s)为0.19、0.04;低值和高值的中间精密度CV为4.75%、1.33%,s为0.17、0.09。HBV-DNA定量的检测下限定为100IU/mL。线性范围为1.00×102~5.00×108 IU/mL。特异度符合要求。血红蛋白浓度不大于28g/dL、总胆红素浓度不大于30mg/dL、三酰甘油浓度不大于3 200mg/dL,对检测结果没有影响(<靶值对数值±0.4)。结论试剂盒的性能参数符合厂家声明,可以应用于临床检测工作。
- 杨佳佳张彦懿刘华伟黄江渝
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量聚合酶链反应试剂盒
- Twist促进乳腺癌细胞BT-549乳腺细胞小球形成及其迁移被引量：2
- 2015年
- 目的探讨Twist基因功能缺失对乳腺肿瘤干细胞样细胞富集及其迁移的影响。方法采用shRNA干扰技术构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株(BT-549-sh Twist细胞株)和阴性对照细胞株BT-549-sh Vec;采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证干扰效率;长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺癌细胞小球(mammosphere);TranswellTM法检测乳腺癌细胞小球的迁移能力。结果采用shRNA干扰技术成功构建Twist基因敲减的BT-549乳腺癌细胞株BT-549-sh Twist细胞株;BT-549-sh Twist细胞株的mammosphere富集能力和迁移能力减弱。结论 Twist促进BT-549乳腺癌乳腺细胞小球形成及其迁移。
- 周明莉唐石伏张海龙杨丽杨佳佳柳满然
- 关键词：TWIST细胞迁移
- 高表达Twist基因促进人乳腺癌细胞MCF-7干细胞样细胞富集和迁移被引量：5
- 2014年
- 目的探讨人乳腺癌细胞系MCF-7中高表达Twist基因对MCF-7干细胞特性细胞的影响。方法构建重组质粒pBABE-puro-myc-Twist,HEK293T细胞包装逆转录病毒,并感染MCF-7细胞,通过筛选获得成功转入Twist的MCF-7/Twist细胞和MCF-7/Vector对照细胞,再通过长程无血清悬浮培养方法富集具有干细胞特性的乳腺细胞小球(Mammosphere),并通过Western blot法检测myc-Twist及Twist诱导后富集的Mammosphere相关CSC蛋白标记的表达,Transwell法检测细胞的迁移能力。结果成功构建逆转录病毒质粒pBABE-puro-myc-Twist;Twist基因在靶细胞内稳定表达;长程无血清悬浮培养富集出具有干细胞特性的Mammosphere;MCF-7/Twist细胞肿瘤干细胞样细胞富集能力增强(P<0.05);myc-Twist、Twist及SOX2、OCT4蛋白在MCF-7/Twist Mammosphere细胞中表达上调;MCF-7/Twist Mammosphere细胞迁移能力增加(P<0.05)。结论 Twist促进MCF-7肿瘤干细胞样细胞富集能力增强,并促进其迁移。
- 周明莉杨佳佳唐石伏杨丽张海龙杜燕娥文思阳柳满然
- 关键词：TWIST人乳腺癌细胞MCF-7
