研究了4种不同脱涩类型柿(Diospyros kaki Thunb.)果实和叶片中的可溶性单宁含量、乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性和ADH最适反应温度,以了解ADH在脱涩过程中的作用。结果表明:不完全甜柿和完全甜柿果实发育前期,可溶性单宁含量逐渐降低,ADH活性逐渐增高,到果实基本完成脱涩后,ADH活性又开始降低,在不完全甜柿中变化较大;涩柿和不完全涩柿在果实近熟期,可溶性单宁含量有所下降,但不能完成脱涩,且ADH活性较低。叶片发育过程中,可溶性单宁含量的变化与ADH没有相关性。ADH的最适反应温度在25℃左右。ADH与柿果实脱涩有一定关系。
以磨盘柿(Diospyroskaki Thunb.)果皮为试材,提取乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase)并进行纯化。经过30%~70%硫酸铵沉淀分离、SephadexG-25脱盐柱脱盐、DEAESepharose Fast Flow离子交换层析纯化后,研究温度、pH、金属离子、底物对乙醇脱氢酶活性的影响。结果表明,纯化后乙醇脱氢酶纯化倍数为41.80倍,活性回收率为44.73%。将乙醇脱氢酶酶液分别置于20、30、40、45、50、55和60℃温育后测定,其最适反应温度为45℃;在pH5.0、7.0、8.0、9.0、10.0和11.0下乙醇脱氢酶的最适PH为10.0;在甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和戊醇为反应底物时,最适底物为丁醇;金属离子中,K^+0和Na^+对活性略有增强的作用,二价金属离子除Mg2+几乎没有影响之外,Zn2+、Mn2+和Ca^2+对酶活性有一定的抑制作用,Cu^2+和Fe^3+则完全抑制了酶的活性。在25℃,pH10.0的条件下ADH氧化乙醇的米氏动力学参数Km值为8.33mmol/L,最大反应速度Vmax为0.021μmol/min。乙醇脱氢酶的活性受温度、pH、金属离子、底物的影响较大,并且只有在合适的条件下,酶活性才能达到最大值。