樊得英
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
- 供职机构：西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室更多>>
- 发文基金：国家民委科研基金甘肃省教育厅科研基金甘肃省中青年科技研究基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 脑心肌炎病毒抗体双抗原夹心ELISA检测方法的建立及初步应用被引量：3
- 2012年
- 目的建立脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)抗体双抗原夹心ELISA检测方法,用于EMCV血清学调查及临床检测。方法采用EMCV基因重组蛋白VP1、VP2和2C作为包被抗原,HRP标记EMCV作为酶标抗原,建立EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法;用内部参考血清对建立的方法进行评价,并与间接ELISA法进行比较;采用所建立的方法对1 475份人血清和1 309份猪血清进行检测。结果建立的双抗原夹心ELISA法的最佳抗原包被浓度为7.5μg/ml,封闭液为10%马血清或2%鱼蛋白胨,酶标抗原稀释度为1∶400。该方法的批内和批间变异系数均小于10%;热稳定性较好;与间接ELISA法检测结果的符合率为93.5%。应用建立的方法检测人血清和猪血清中的EMCV抗体阳性率分别为16.8%和63.4%。结论已建立了EMCV抗体双抗原夹心ELISA检测方法,该方法可靠、稳定、特异、敏感、操作简便,为EMCV抗体的临床检测提供了有效的技术手段。
- 樊得英冯若飞李向茸张海霞凡静静沈心亮马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒抗体酶联免疫吸附测定
- 乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达
- 2012年
- 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP-C1-JEV，旨在研究E蛋白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况，为进一步深入研究提供基础资料。方法通过liT—PCR扩增目的基因，酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGrP—C1-JEV重组表达载体，利用脂质体介导将重组质粒转染BHK-21细胞，观察绿色荧光标记蛋白表达情况，同时提取细胞RNA，检查目的基因转录表达情况，并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGrP—C1-JEV构建成功，转染至BHK-21细胞中，绿色荧光标记蛋白正常表达，表达率较高，RT-PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达，表达蛋白主要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中，且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP-C1-JEV质粒在BHK-21细胞中正常表达，且对细胞生长和形态不产生影响，真核表达抗原具有良好的抗原性，本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础资料。
- 冯若飞张晓媛林贵鸿乔自林凡静静李向茸张海霞樊得英马忠仁
- 关键词：乙型脑炎病毒绿色荧光蛋白真核表达
- 乙型脑炎病毒E基因Ⅰ、Ⅱ抗原域片段的克隆与原核表达被引量：2
- 2011年
- 根据Genebank公布的乙型脑炎病毒E蛋白基因的序列设计并合成一对特异性引物,以pMD18-T-JEV-E质粒为模板,通过PCR扩增E蛋白抗原Ⅰ、Ⅱ基因片段,所得基因纯化后与PGEX-4T-1同时双酶切并重组构建PGEX-JEV-E12质粒,经过测序确定插入编码框正确后经异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,观察不同诱导时间、不同IPTG浓度对表达的影响,优化反应条件,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹进行分析.结果通过测序证明重组质粒正确插入读码框成功,转化至感受态细胞中以包涵体形式表达,37℃时最佳诱导条件的反应条件为IPTG浓度0.6mmol/L,诱导时间为8 h;蛋白免疫印迹显示,重组表达蛋白和单抗、多抗均能进行中和反应,无非特异性表达.表明表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步进行分析E蛋白基因结构与功能的关系、研制新型ELISA诊断试剂和开发基因工程疫苗奠定了基础.
- 冯若飞李向茸韦鹏建樊得英李明生乔自林马忠仁
- 关键词：乙型脑炎病毒克隆
- 猪脑心肌炎病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 为了对猪脑心肌炎病毒(EMCV)进行血清学调查和临床检测,试验根据猪脑心肌炎病毒5'端结构蛋白VP2基因序列设计、合成1对特异性引物,建立检测猪脑心肌炎病毒385 bp片段的RT-PCR检测方法。结果表明:该方法对脑心肌炎标准毒株VR-129B(GenBank登录号为X74312)的检测结果为阳性,对标准毒株的细胞培养物检测的敏感度达0.1TCID50;而对猪乙型脑炎病毒、戊型肝炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒的检测结果为阴性。说明该方法特异性强、灵敏性高,可以用于猪脑心肌炎病毒的检测和早期诊断。
- 冯若飞韦鹏建李向茸樊得英乔自林李明生马忠仁
- 关键词：猪脑心肌炎
- 脑心肌炎病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2014年
- 为了制备脑心肌炎病毒(EMCV)的单克隆抗体,并对其进行鉴定。应用杂交瘤细胞技术,将灭活EMCV免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,HAT选择培养、间接ELISA法筛选和多次克隆化,筛选出稳定分泌抗猪EMCV的杂交瘤细胞株,并对其分泌的单克隆抗体进行了亚型、效价、特异性和细胞株染色体核型的分析。结果获得了1株能分泌抗EMCV单克隆抗体的细胞株,命名为EMCV Y1G9,其分泌的抗体亚型为Ig G2b类;腹水效价可达3.2×104;细胞株的染色体核型分析结果是染色体众数为92±2,单抗的特异性也较好。制备出了具有良好特异性和敏感性的抗EMCV的Mc Ab,为建立EMCV的特异性检测方法及该病的防制奠定了基础。
- 李向茸冯若飞樊得英马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒单克隆抗体
- 脑心肌炎病毒VP1结构蛋白的可溶性表达及鉴定被引量：6
- 2011年
- 为获得可溶性表达的脑心肌炎病毒(EMCV)结构蛋白VP1片段,将EMCV VP1基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,并转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌中。采用不同温度、不同IPTG浓度及不同诱导时间诱导目的蛋白表达,以筛选VP1融合蛋白可溶性表达的最佳条件,并通过Western-blotting检测最佳条件下表达蛋白的免疫活性。PCR、酶切鉴定及测序结果表明,VP1基因已克隆入pGEX-4T-1质粒。经优化,确定VP1融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当D600nm值为0.4～0.6时,以0.25mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达12h。Western-blotting结果显示,诱导表达的蛋白具有免疫活性。
- 李向茸冯若飞凡静静张海霞韦鹏建樊得英马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1基因可溶性表达原核表达
- 未免疫猪乙型脑炎抗体消长规律动态研究被引量：1
- 2010年
- 文章旨在了解未免疫猪群乙型脑炎病毒的感染以及抗体消长规律,2008年6月～10月期间选定甘肃省某猪场40头未进行乙型脑炎免疫的猪,分别采集脐带血、15、30、45、60、75、90、120、150日龄血清,采用间接Elisa检测乙型脑炎抗体含量并绘制曲线.结果有效数据32份,抗体总阳性率为96.88%,抗体平均OD值曲线,出现3个波峰和2个波谷.通过分析,3个波峰分别来源于母乳、第一次感染和第二次感染,母源抗体维持时间较短,感染病毒后抗体强度和维持时间逐渐加强.因此在今后应该重视乙型脑炎病毒感染的严重性,加强管理和免疫,不但保护猪群,并且对公共卫生体系的建立也有重要的意义.
- 冯若飞马忠仁乔自林李明生徐德志韦鹏建樊得英
- 关键词：乙型脑炎抗体
- β-丙内酯对脑心肌炎病毒灭活效果的试验被引量：3
- 2011年
- 通过研究β-丙内酯(BPL)对脑心肌炎病毒(EMCV)灭活效果以及优化灭活条件,为制备脑心肌炎诊断试剂和疫苗提供参考依据。用终浓度分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000等的β-丙内酯灭活103TCID50滴度猪脑心肌炎病毒,采用4℃灭活4 h、8 h、12 h后37℃2 h,并将灭活后的病毒接种敏感细胞VREO上观察细胞病变(CPE)情况,选择未出现CPE的细胞孔盲传3代后,采用ELISA和PCR的方法观察灭活效果。结果显示:BPL浓度和反应时间与灭活效果存在明显的线性关系,但BPL浓度越高抗原性下降幅度越大,RT-PCR未有扩增,说明BPL可以用于EMCV的灭活,且根据试验结果优选灭活条件为BPL浓度为1:2 000,4℃灭活8h为最佳。结论表明:BPL完全可以用来灭活EMCV,为今后开发灭活疫苗或诊断试剂的生物安全性提供了保证。
- 冯若飞樊得英韦鹏建李向茸乔自林李明生沈心亮马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒灭活
