王东澍
- 作品数：16 被引量：8H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 一种驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1的方法
- 本发明公开了一种驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1的方法。本发明提供了的重组载体，为将DNA分子插入穿梭质粒pKSV7的SmaI位点得到的载体；所述DNA分子的核苷酸序列为序列表中的序列1。本发明的实验证明，本发明根据质粒不...
- 王恒樑刘先凯王东澍王华贵冯尔玲
- 文献传递
- PlcR在炭疽芽胞杆菌A16R中的功能研究被引量：1
- 2015年
- 炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽胞杆菌(B.cereus)和苏云金芽胞杆菌(B.thuringiensis)均属于蜡样芽胞杆菌群,在遗传学上有很高的相似性。PlcR(Phospholipase C regulator)在蜡样芽胞杆菌中是十分重要的调控因子,但plc R基因在炭疽芽胞杆菌中发生一个无义突变导致在炭疽芽胞杆菌中产生一个截短Plc R蛋白。为了研究plc R基因对炭疽芽胞杆菌功能的影响,文章以蜡样芽胞杆菌CMCC6330基因组为模板,构建重组表达质粒p BE2A-plc R后导入炭疽芽胞杆菌疫苗株A16R中获得重组菌株,对其进行表型分析。结果显示,炭疽芽胞杆菌重组菌株的溶血活性基本没有恢复,但恢复了部分神经鞘磷脂酶活性,表明将蜡样芽胞杆菌的plc R基因导入炭疽芽胞杆菌后,可以直接激活神经鞘磷脂酶活性。
- 贾晓琳王东澍高志奇冯尔玲郑继平王恒樑郭桂英刘先凯
- 关键词：蜡样芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌溶血素
- 预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法
- 本发明公开了预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法。本发明公开的预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗，活性成分为将SEQ ID No.1的第20‑156位或SEQ ID No.1的第1‑156位所示的蛋白质糖基化得...
- 王恒樑刘志成潘超朱力吴军冯尔玲刘先凯孙鹏王东澍曾明王斌井申荣
- 文献传递
- 可被O-糖基化修饰的多肽
- 本发明公开了可被O-糖基化修饰的多肽。本发明所提供的多肽为：a1)序列为W-P-Xn-S-Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸；所述氨基酸中的氨基酸为2...
- 王恒樑潘超朱力吴军冯尔玲刘先凯孙鹏王东澍曾明王斌
- 利用免疫蛋白质组学鉴定炭疽杆菌蛋白MetK及其免疫原性验证
- 2012年
- 目的验证免疫蛋白质组中鉴定到的S-腺苷甲硫氨酸MetK蛋白的免疫原性。方法免疫蛋白质组学的方法鉴定到MetK蛋白,通过PCR方法扩增metK基因全长,然后将其克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌DH5α,测序正确后提取质粒转入BL21(DE3)中进行诱导表达。再通过Ni-NTA柱纯化MetK蛋白,纯化后的蛋白免疫SPF级的BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,通过多克隆抗体与炭疽芽孢杆菌A16R全菌蛋白Western印迹检测,验证MetK蛋白的免疫原性。结果与结论成功表达了MetK蛋白,制备了其多克隆抗体,为免疫蛋白质组学鉴定到的蛋白点进行验证,也为研究MetK蛋白的生物学功能研究提供了条件。
- 童超刘先凯任静晓王东澍高志奇冯尔玲朱力廖祥儒王恒樑
- 关键词：基因表达多克隆抗体
- 双向电泳法比较两种蛋白质组样品制备方法
- 2014年
- 目的比较两种破碎方法提取的蛋白质样品在双向电泳(2-DE)中的分离效果。方法用超声破碎和玻璃珠振荡破碎方法分别制备革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织的蛋白抽提样品,通过2-DE比较两种制样方法的实际效果。结果获得了革兰阴性菌、革兰阳性菌、动物组织在两种制样条件下的2-DE图。结论通过对比不同样品的电泳结果发现,玻璃珠振荡破碎法制样背景更低,更有利于后续的图像分析。
- 崔勇王东澍冯尔玲刘先凯王恒樑朱力
- 关键词：蛋白质组学蛋白提取
- 炭疽芽胞杆菌A16D2株BA2380基因缺失突变株的构建被引量：1
- 2017年
- 本课题组早期研究结果表明,炭疽芽胞杆菌BA2380蛋白可能与炭疽芽胞杆菌毒力有关,因而有必要对其功能进行深入研究。选取炭疽芽胞杆菌A16D2株为出发菌株,以其BA2380基因为目的缺失基因,参照A16D2株基因组序列及质粒pSET4s序列,利用软件设计上下游同源臂及抗性基因引物,用本实验室改造的"Golden Gate"克隆方法将3个片段同时连入温敏型穿梭载体pKMBK中(本实验室构建的受体质粒),从而构建基因打靶质粒。将该基因打靶质粒导入炭疽芽胞杆菌A16D2感受态细胞中,利用同源重组原理,筛选获得炭疽芽胞杆菌A16D2 BA2380基因缺失突变株,并对其进行验证。结果验证了本课题组构建的"Golden Gate"克隆体系进行多片段克隆的高效性,也为后续探索其基因功能奠定了基础。
- 贾书骅陈楠王东澍王甜甜冯尔玲朱力王恒樑彭清忠刘先凯
- 关键词：炭疽芽胞杆菌GOLDEN同源重组
- 炭疽芽孢杆菌A16R株lysA基因缺失突变株的构建
- 2013年
- 目的构建炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)A16R株lysA基因缺失突变株,为后续的定量蛋白质组学研究奠定基础。方法以炭疽杆菌活疫苗A16R株lysA基因为目的缺失基因,利用软件设计上下游同源臂以及抗性基因的引物,用同源重组酶将3个片段连入质粒中,构建重组质粒,并将重组质粒导入炭疽杆菌A16R感受态细胞中,筛选炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,对其进行验证。最后绘制缺失突变株和野生株生长曲线并进行生理生化分析。结果成功构建了重组质粒,经同源重组后获得lysA基因缺失突变株。鉴定表明目的基因已经丢失。结论成功获得炭疽杆菌A16R株lysA基因缺失突变株,为定量蛋白质组学研究奠定了基础,也为炭疽杆菌重要基因功能的研究建立了良好的技术平台。
- 高飞王东澍冯尔玲朱力王恒樑廖祥儒刘先凯
- 关键词：同源重组
- 炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点被引量：5
- 2014年
- 【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。
- 高志奇王东澍冯尔玲王秉翔惠一鸣韩少波焦磊刘先凯王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌分子分型
- 一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法
- 本发明公开了一种同时驱除炭疽杆菌毒力大质粒pXO1和pXO2的方法。本发明提供了一种DNA分子，其核苷酸序列为序列表中的序列1。含有所述DNA分子的重组载体、转基因细胞系或重组菌。所述重组载体为将所述的DNA分子插入穿梭...
- 王恒樑刘先凯王东澍王华贵冯尔玲
- 文献传递
