王丽珩
- 作品数：11 被引量：4H指数：1
- 供职机构：扬州大学医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- p210bcr-abl限制性T细胞表位的预测及其特异性CTL细胞的检测
- 目的：预测及鉴定慢性粒细胞白血病抗原 p210的 HLA-A*0201限制性 T 细胞表位, 并检测慢粒患者体内表位特异性 CTL 细胞的频率。
- 王丽珩钱亚云张伟龚卫娟季明春
- 文献传递
- p210^(bcr-abl)抗原的T细胞表位鉴定及其特异性CTL细胞检测被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨p210bcr-abl抗原的免疫原性,预测并鉴定该蛋白来源的HLA-A2限制性T细胞表位,并在慢性粒细胞白血病患者中检测其特异性CTL细胞分布。方法:首先利用生物信息学软件预测并选取2个p210bcr-abl来源的表位:BCR-ABL642与BCR-ABL926m;T2细胞亲和力实验鉴定短肽与HLA-A2分子的亲和力;然后制备分别锚合这2种表位的可溶性HLA-A2四聚体,流式检测术检测其特异性CTL细胞在CML患者外周血CD8+T细胞中的频率。结果:与健康人群相比,BCR-ABL642和BCR-ABL926m肽表位限制性CTL细胞的频率在CML患者均明显升高(P<0.01);而来自流感病毒短肽的特异性CTL细胞在两个群体中无统计学差异(P>0.05);另外,BCR-ABL642特异性CTL细胞的频率在CML慢性期和急变期之间有统计学差异(P<0.05)。结论:所选2种肽表位均具有免疫原性,可建立基于这2种短肽的免疫治疗措施。
- 张俊王丽珩龚卫娟钱亚云姜扬文季明春
- 关键词：CTL慢性粒细胞白血病
- 双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 2007年
- 目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。
- 王丽珩张俊钱莉曹正峰龚卫娟季明春
- 关键词：4-1BBLRANTESK562活化
- 可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定
- 2009年
- 目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A*0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A*0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A*0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。
- 王丽珩龚卫娟肖炜明丁岩冰田芳季明春
- 关键词：融合蛋白
- 双表达外源性4-1BBL／CD86的k562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 目的:为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和 CD86的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。方法:采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和CD86基因插入双表达载体p...
- 龚卫娟曹正锋刘丹王丽珩钱莉季明春
- 文献传递
- 加载bcr-abl抗原肽的HLA-A*0201四聚体的制备和初步应用
- ＜正＞目的：选取来自 bcr-abl 融合蛋白的两个9 肽：A 肽（LLYKPVDRV）,B 肽（YLKALQRPV） （第一位的“S”改为“Y”,第2位的“S”改为“L”,增加其稳定性及亲和力）,分别加载至 HLA-A...
- 钱亚云王丽珩张伟龚卫娟季明春
- 文献传递
- 双表达外源性4-1BBL/IL-15的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究被引量：1
- 2007年
- 为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和IL-15的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和IL-15基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-IL-15。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、IL-15分子的K562细胞(K562/4-1BBL/IL-15)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/IL15细胞和K562细胞分别用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24 h,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达。对NK细胞不仅同时检测活化性受体NKG2D的表达,还用乳酸脱氢酶释放法观察NK细胞受不同刺激细胞作用后,细胞毒活性的变化。结果显示受K562/4-1BBL/IL15细胞刺激后,T细胞CD69的表达无明显变化。γδT细胞CD69表达增长5倍。NK细胞CD69表达增长6倍,而NKG2D的表达增加1.5倍;NK细胞受K562/4-1BBL/IL15细胞作用72 h后,细胞毒活性明显提高。提示双表达4-1BBL/IL-15的K562细胞能够高效激活γδT细胞及NK细胞,有望用于肿瘤的过继免疫治疗。
- 曹正锋万兵王丽珩刘丹龚卫娟季明春
- 关键词：4-1BBLIL-15K562活化
- 人工抗原递呈细胞K32/4-1BBL/CD86的制备及其功能的初步研究
- ＜正＞目的：为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活 T 细胞、NK 细胞的高效途径,研究人工抗原递呈细胞 K32/4-1BBL/CD86刺激外周血淋巴细胞活化的能力,进一步在动物体内评价经此人工抗原递呈细胞活化后的 PBMC 对...
- 王海洋曹正锋王丽珩龚卫娟季明春
- 文献传递
- 双表达外源性4-1BBL／IL-15的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 目的:为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和 IL-15的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。方法:采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和IL-15基因插入双表达载...
- 曹正锋刘丹王丽珩钱莉龚卫娟季明春
- 文献传递
- 双表达外源性4-1BBL／RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 目的:探讨双表达外源性4-1BBL／RANTES的K562细胞对T细胞、NK细胞的活化作用,为进一步研究人工抗原提呈细胞提供重要前提。方法:采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO...
- 王丽珩曹正锋刘丹钱莉龚卫娟季明春
- 文献传递
