王平江
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
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- 血管内皮祖细胞移植对大鼠重症急性胰腺炎肾损伤的保护作用
- 2014年
- 目的:探讨内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)合并肾损伤的保护作用。方法:通过共沉淀法制备超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO);密度梯度离心法分离培养SD大鼠骨髓来源EPCs;使用SPIO标记EPCs;将72只SD大鼠随机分为对照组、SAP组和SPIOEPCs组,采用胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠制作SAP模型。对照组和SAP组经尾静脉注射生理盐水,SPIOEPCs组注射等量的SPIO-EPCs;分别于造模2,6,12 h检测各组大鼠血清中淀粉酶、尿素氮、肌酐和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;苏木精染色观察肾组织各时相病理变化及进行病理评分,普鲁士蓝染色观察肾组织各时相铁颗粒含量。结果:SAP组2,6,12 h的血清淀粉酶、尿素氮、肌酐和TNF-α的水平较对照组明显升高(P<0.01);而SPIO-EPCs组均显著低于SAP组(P<0.01)。与对照组比较,SAP组2,6,12 h肾病理改变明显加重,肾病理评分明显提高(P<0.05);与SAP组比较,SPIO-EPCs组肾病理改变明显减轻,肾病理评分明显降低(P<0.05)。普鲁士蓝染色见SPIOEPCs组在2,6和12 h肾组织血管内皮铁颗粒含量逐渐增多。结论:移植EPCs可减少炎症介质释放,减轻SAP肾的血管内皮损伤,对大鼠SAP肾损伤具有保护作用。
- 党胜春王平江曾艳华陈荣芳王豪冯舒崔磊张建新
- 关键词：内皮祖细胞重症急性胰腺炎肾损伤超顺磁性氧化铁
- 一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性。方法密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80%左右融合时,用脂质体LipofectamineTM2000体外转染eNOS基因至EPC。转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量。结果成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体。转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P<0.01),NO含量明显升高(P<0.01),ROS含量明显降低。结论脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达。
- 党胜春陈荣芳王平江冯舒张建新
- 关键词：内皮祖细胞内皮型一氧化氮合酶基因一氧化氮氧自由基
- MAPK信号转导在实验性重症急性胰腺炎大鼠中的作用被引量：2
- 2011年
- 目的探讨p38MAPK信号转导通路在SAP中的作用及其特异性抑制剂SB203580对胰腺的保护作用。方法 SD大鼠48只,随机分为对照组(C)、胰腺炎组(P)及SB203580干预组(T)。各组于制模型后2及6小时分为2组,每组8只,用于抽取血样及胰腺组织学观察。P组采用胰腺被膜下均匀注射法制作模型,开腹后自胰尾至胰头方向被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠(4ml/kg),C组进行同样操作,仅胰腺被膜下注射等量生理盐水,T组术前灌胃给予SB203580(10mg/kg)。结果胰腺评分见C组胰腺病理正常,T组胰腺病理损害程度较P组明显减轻(P<0.05)。SAP大鼠模型诱导成功后,P组各时间点血清TNF-α浓度较C组明显升高(P<0.01),T组血清TNF-α浓度较P组比较明显下降(P<0.01)。P组各时间点胰腺p38MAPK表达较C组明显,T组各时间点胰腺p38MAPK表达较P组下降。结论 p38MAPK信号转导通路在SAP的发展中起着重要作用,其特异性抑制剂SB203580对胰腺的保护作用。
- 陈旭丹王坤沈耀王平江党胜春
- 关键词：重症急性胰腺炎丝裂原活化蛋白激酶
- 大鼠重症急性胰腺炎肺损伤时髓系细胞触发受体-1的表达被引量：3
- 2013年
- 目的探讨重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）引起急性肺损伤（acute lung injury，ALI）时髓系细胞触发受体一1（triggering receptor-1 on myeloid cells，TREM-1）以及相关炎症因子的表达。方法雄性SD大鼠24只，随机（随机数字法）分为SO组（假手术组）、SAP组和SAP＋LP17组（LP17为人工合成的TREM-1多肽），每组8只，采用逆行胰胆管技术制备SAP大鼠模型。于造模后12h提取胰腺及左肺组织，苏木精-伊红（HE）染色观察胰腺和肺组织的病理形态学变化；免疫组织化学法采用巨噬细胞特异性抗体CD68检测巨噬细胞浸润情况；通过荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR法）检测肺组织TREM-1、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA的表达量。计量资料采用均数4-标准差（^-x±s）表示，采用SPSS17．0统计软件进行单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果HE染色结果显示，SAP组胰腺及肺组织损伤程度均较SO组及SAP＋LP17组增高，其病理评分均较SO组及SAP＋LP17组高（P〈0．05）；免疫组化染色结果显示，SAP组肺组织巨噬细胞较SO组浸润明显；SAP组肺组织TREM-1 mRNA的表达水平较SO组及SAP＋LP17组均显著增高（P〈0．01或P〈0．05），IL-1β和TNF-α mRNA表达水平亦较SO组及SAP＋LP17组显著增高（P〈0．01或P〈0．05）。结论TREM-1在SAP急性肺损伤中表达显著增高，可能是SAP引起ALI机制中的一个重要炎症调节介质。LP17可以有效降低TREM-1的表达，减少炎症因子的释放，从而有利于减轻SAP引起的ALI。
- 祝文蕊党胜春张晨王坤沈耀王平江端礼荣侯雯跻张建新
- 关键词：急性肺损伤髓系细胞触发受体-1白细胞介素-1
- 髓系细胞触发受体-1对大鼠肠巨噬细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨髓系细胞触发受体-1 （triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）的表达对大鼠肠巨噬细胞凋亡的影响.方法 体外培养肠巨噬细胞,实验3分组,每组6孔：对照组、LPS组及LPS＋LP17组.加入药物LPS（1 mg/L）和LP17 （0.1 mg/L）,培养6h后用TUNEL试剂盒及流式细胞仪对大鼠肠巨噬细胞凋亡进行检测,利用SPSS 18.0软件进行统计分析.结果 细胞生长状态良好,分布均匀,细胞活力约为80％～85％,CD14免疫荧光鉴定证实为肠巨噬细胞.经药物处理后,TUNEL检测细胞凋亡情况：LPS组（44.33±7.74）％较对照组（19.17±6.01）％明显增多（P=0.000）,LPS＋ LP17组（28.33±6.53）％的凋亡细胞比LPS组（44.33±7.74）％明显减少（P =0.004）,对照组（19.17 ±6.01）与LPS＋ LP17组（28.33±6.53）％的凋亡细胞差异无统计学意义（P =0.050）.采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况：LPS组（16.47±1.66）％较对照组（7.70±1.52）％明显增多（P=0.000）,LPS＋LP17组（11.47±3.12）％的凋亡细胞比LPS组（16.47±1.66）％明显减少（P=0.018）,对照组（7.70±1.52）％与LPS＋ LP17组（11.47±3.12）％的凋亡细胞差异无统计学意义（P =0.061）.结论 LP17能抑制肠巨噬细胞TREM-1的表达,减少肠巨噬细胞凋亡.
- 党胜春冯舒刘彬陈志明王平江顾敏张建新
- 关键词：髓系细胞触发受体-1凋亡脂多糖肠黏膜屏障TUNEL流式细胞
- 氯膦酸二钠脂质体对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜Akt、MAPK(ERK1/2)活性的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:研究氯膦酸二钠脂质体(liposomal clodronate,LC)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肠黏膜蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和丝裂原活化蛋白激酶1/2[mitogen-activated protein kinase,MAPK(ERK1/2)]活性的影响,探讨LC治疗SAP肠黏膜损伤的保护作用.方法:利用薄膜法制备LC.SD大鼠48只,随机分为3组:对照组(C组)、SAP+空白脂质体治疗组(P组)、SAP+Clodronate脂质体治疗组(T组).P组和T组采用胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠制作SAP模型后,分别经尾静脉注射空白脂质体和Clodronate脂质体,C组仅注射等量生理盐水.制模后2、6 h分别取肠系膜上静脉血液,检测各组大鼠血清中淀粉酶(amylase,AMS)的含量,同时检测各组大鼠血清中白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量,观察各组肠黏膜的病理学变化及病理评分,采用免疫组织化学方法检测肠黏膜巨噬细胞Akt和MAPK(ERK1/2)的表达情况.结果:P组大鼠在制模后2、6 h的血清AMS水平较C组明显升高(P<0.01).与P组比较,T大鼠各时相的血清AMS水平均显著降低(P<0.01).P组较C组2、6 h血清IL-6和TNF-α明显升高(P<0.01).T组各时相较P组血清IL-6和TNF-α显著降低(P<0.01).T组大鼠的肠黏膜病理变化均较P组明显减轻,病理学评分明显降低(P<0.01).T组肠黏膜Akt和MAPK(ERK1/2)的表达较P组明显减少.结论:巨噬细胞在SAP大鼠肠黏膜损伤中起重要作用,LC可选择性清除巨噬细胞,减少肠黏膜Akt、MAPK(ERK1/2)的表达,对肠黏膜损伤有一定的保护作用.
- 陈吉祥刘彬党胜春陈敏姜德立王坤王平江张建新
- 关键词：重症急性胰腺炎肠黏膜损伤
- 大鼠肠巨噬细胞TREM-1表达对其侵袭力和肠上皮细胞增殖的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨肠巨噬细胞髓系细胞触发受体-l(triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1)的表达对肠巨噬细胞侵袭力和肠上皮细胞增殖的影响,进一步明确肠巨噬细胞在肠屏障功能障碍(intestinal barrier dysfunction,IBD)中可能的作用.方法:体外培养肠巨噬细胞及肠上皮细胞,逆转录-多聚酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠肠巨噬细胞的TREM-1和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因表达水平,用Tanswell板将二者共培养,MTT法绘制肠上皮细胞生长曲线,Matrigel侵袭实验检测肠巨噬细胞对肠上皮细胞的侵袭力.结果:脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组TREM-1及TNF-α的基因表达水平高于LPS+LP17组和空白对照(Control)组(均P<0.05);LPS+LP17组与Control组相比无差异.与Control组相比,两实验组的肠上皮细胞的生长均受到抑制(均P<0.05);LPS组肠上皮细胞生长的抑制大于LPS+LP17组(P<0.05).侵袭实验中3组平均穿膜细胞数分别为29.3±2.1、46.0±3.6和34.7±3.1.LPS组与Control组比较差异具有明显统计学意义(P<0.01),LPS组与LPS+LP17组相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:LP17不但能抑制肠巨噬细胞TREM-1的表达及炎症介质的释放,还可以抑制肠巨噬细胞对上皮细胞的侵袭.利用LP17阻断TREM-1信号转导可减轻肠巨噬细胞对肠上皮细胞的损害,有望成为治疗IBD的新靶点.
- 张建新王坤祝文蕊沈耀王平江党胜春
- 关键词：髓系细胞触发受体-1肠上皮细胞
- LP17对大鼠肠巨噬细胞超微结构的影响
- 2015年
- 目的:通过观察LP17对体外培养的大鼠肠巨噬细胞超微结构的影响,探讨LP17对激活的肠巨噬细胞的作用机制,寻找对肠黏膜屏障功能障碍的可能治疗方法。方法:体外分离、培养大鼠肠巨噬细胞分为对照组[未加脂多糖(LPS)和LP17处理],及实验组[包括LPS组(用LPS处理)和LPS+LP17组(用LPS及LP17处理)]。给药浓度为LPS 1 mg/L,LP17 0.1 mg/L,培养6 h后用0.25%胰酶消化收集细胞。Tecnai 12透射电镜观察实验组及对照组大鼠肠巨噬细胞的超微结构变化。结果:经药物处理后,电镜下观察,对照组为正常巨噬细胞,实验组中LPS组巨噬细胞内出现大量溶酶体,LPS+LP17组巨噬细胞出现凋亡小体。结论:LP17能促使被激活的巨噬细胞凋亡。
- 张建新陈志明党胜春冯舒王平江
- 关键词：髓系细胞触发受体-1肠黏膜屏障功能障碍
- 巨噬细胞表型在重症胰腺炎肾损伤中的表达被引量：7
- 2014年
- 目的 探讨巨噬细胞（Mφ）表型在重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）急性肾损伤中的机制.方法 雄性Wistar大鼠64只,随机（随机数字法）分为对照组（SO组）和SAP组,每组32只,采用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型,于造模后2、6、12及24h分别取血和肾组织.自动生化分析仪测定血液中尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的改变.逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测肾组织IL-12、TNF-α、IL-10及TGF-β的mRNA的表达水平.蛋白质印迹法检测CD68、iNOS、Arg-1的表达.结果 SAP组各时点BUN、Cr的浓度均高于对照组（P ＜0.01,P＜0.05）;SAP组各时点肾组织IL-12、TNF-α、IL-10、TGF-β的mRNA的表达水平较对照组显著增高,差异具有统计学意义（P＜0.01,P＜0.05）; SAP组各时点CD68、iNOS、Arg-1表达量均高于对照组.结论 SAP时炎症反应及炎症失衡是急性肾损伤的可能病理因素.
- 党胜春冯舒王平江沈耀张建新
- 关键词：重症急性胰腺炎肾损伤巨噬细胞CD68
- 小鼠骨髓源性内皮祖细胞的体外培养及标志物鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨小鼠骨髓来源的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的体外培养、诱导分化及表面标志物的鉴别。方法:收集ICR小鼠骨髓EPCs,Ficoll分离单核细胞,使用含有血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)的培养基培养。分别在细胞培养5,10,15及20 d后检测细胞表面的内皮细胞标志物。结果:培养5 d后细胞开始出现上皮细胞的形态,有伪足出现;培养10 d,细胞开始增殖,成圆形,出现梭形细胞;培养15 d,细胞出现较为典型的内皮细胞形态,铺路石状;培养20 d,细胞出现长梭形拉网状,即类似成熟内皮细胞形态。免疫荧光染色及流式定量检测结果显示,CD34在EPCs中的表达随培养时间延长有渐变减弱的趋势;血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)在EPCs的表达随培养时间延长有渐变增强的趋势。结论:骨髓EPCs在特定诱导条件下可分化出典型的成熟内皮细胞,取材方便,扩增能力较强。
- 党胜春陈纪芳冯舒刘彬王平江张建新
- 关键词：骨髓内皮祖细胞体外培养
