王颖洁
- 作品数：27 被引量：37H指数：4
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生自动化与计算机技术生物学更多>>
- miRNA-31通过靶向Stra8调控鸡SSC减数分裂
- Stra8是在哺乳动物生殖细胞中有丝分裂转变为减数分裂时表达的特异性基因,在哺乳动物和鸟类的减数分裂发生中起关键作用.因此,cSSCs(鸡精原干细胞)中Stra8通路的研究可以更深入地了解鸟-类精子发生.miRNA也是S...
- 王颖洁左其生张文慧何娜娜孙长花张亚妮李碧春
- 关键词：精原干细胞减数分裂
- 鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中关键lncRNA的筛选
- 本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SS...
- 李东纪艳芹王颖洁王飞路镇宇何娜娜靳锴汪怡临程少泽王曼张文慧张晨赵瑞丰张亚妮李碧春
- 关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞靶基因
- 口吸管法制备DF-1单细胞克隆
- 取对数期末的DF-1细胞,通过手工拉针连接橡皮管制备的单细胞分离装置,于倒置显微镜下收集DF-1单细胞.收集的单细胞培养于同源条件培养基中,形成单细胞克隆之后传代并建立DF-1单克隆细胞系;采用连续细胞计数绘制DF-1单...
- 赵瑞丰靳锴金晶王颖洁李东左其生张亚妮李碧春
- 关键词：条件培养基染色体核型分析
- GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白被引量：2
- 2020年
- 为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。
- 周鑫琦王颖洁张文慧张文慧
- 关键词：NOS2蛋白质相互作用
- 蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控被引量：1
- 2016年
- 【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(spermatogonia stem cell,SSCs),分别提取细胞的总RNA,采用RNA-Seq方法对3种细胞的转录本进行深度测序,然后进行WEGO(web gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因,RT-q PCR(Real time Quantitative PCR)检测部分关键差异基因的表达变化,并与RNA-Seq(RNA sequencing)结果进行比较分析,同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制,观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段,有697个差异基因参与生物代谢,显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路,在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因,这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异,而在抑制剂组中,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的m RNA表达量均出现了降低;而体外抑制NOS2基因后,对照组中的ESCs在2、4、6、8和10d内细胞不断增殖,但是未出现类胚体;RA诱导组中,2d出现小的类胚体,4d类胚体增大,且数量增多,6d类胚体边缘开始出现破裂,8d类胚体解体,10d出现类精原样细胞;抑制剂组中,ESCs在2、4、6、8和10d内无类胚体出现,且相较于对照组细胞增殖缓
- 李东汤贝贝王颖洁纪艳芹王飞路镇宇王曼张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞雄性生殖细胞
- 如皋黄鸡功能未知基因C1EIP表达载体的构建及其抗小鼠血清制备被引量：1
- 2017年
- 为了深入研究鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖细胞分化过程,基于RNA-Seq基础,筛选出功能未知且差异极其显著的关键基因C1EIP,PCR克隆得到其编码区全长序列409bp,构建其真核表达载体pcDNA3.0-C1EIP和pEGFP-C1EIP,实现C1EIP在真核细胞内的定位表达,并以PEI包裹pcDNA3.0-C1EIP后免疫小鼠制备抗血清。间接免疫荧光检测抗血清效价为1∶10,RT-PCR和Western blot证实C1EIP真核表达载体成功表达且抗血清效果良好,为C1EIP基因在ESCs向雄性生殖细胞分化过程中的功能研究奠定了基础。
- 李东王飞纪艳芹汪怡临王曼张晨王颖洁何娜娜靳锴路镇宇程少泽张亚妮李碧春
- 关键词：如皋黄鸡真核表达抗血清
- 鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立
- 目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培...
- 赵瑞丰靳锴张晨金晶王颖洁左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚成纤维细胞
- 脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制的研究
- [目的]探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据.[方法]采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonicstem cell,ESC)、原始生殖细胞...
- 左其生张蕾连超肖天荣王颖洁汤贝贝王飞纪艳芹路镇宇赵瑞峰张文慧张亚妮李碧春
- 关键词：RNA-SEQ雄性生殖细胞视黄酸脂代谢
- TGFβ信号通路对鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用研究
- 前言生殖细胞在有性繁殖的生物中肩负着将遗传信息在世代中传递的任务，并能代替胚胎干细胞(ESCs)用于治疗和遗传修饰，而不涉及伦理和免疫排斥问题。但是，如何在体外培养条件下获得大量的精原干细胞(SSCs)并使其能够产生具有...
- 张亚妮施青青王颖洁左其生李东连超毕瑜林王飞纪艳芹路镇宇李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化
- 鸡Stra8原核表达载体的构建及多克隆抗体血清的制备被引量：1
- 2021年
- 试验旨在探究视黄酸介导的Stra8信号在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制。以如皋黄鸡睾丸cDNA为模板扩增Stra8基因CDS区,并与pET-28a载体相连获得原核重组表达载体pET-28a-Stra8,然后转染大肠杆菌BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导外源基因表达,离心收集菌液,并用超声波破碎等方法收集表达的蛋白,用纯化的蛋白作为抗原制备兔源抗体,产生带有免疫抗体的兔血;取全血,经血凝离心等步骤后获取血清,通过SDS-PAGE检测抗体的纯度,将获得的含有多克隆抗体的血清进行ELISA检测效价。结果显示:成功构建pET-28a-Stra8重组载体,IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE分析后显示,STRA8蛋白大小约为55 ku;ELISA检测显示在血清稀释比为1∶256000时P/N=3.3>2.1,达到阳性血清合格标准;Western blotting结果显示制备的多克隆抗体血清可结合STRA8蛋白,该结果为进一步研究Stra8在生殖细胞发生过程中的作用和调控机制提供了基础。
- 赵宗仪王颖洁靳锴左其生张亚妮
- 关键词：原核表达载体多克隆抗体
