田美媛
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金甘肃省科技重大专项计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 几种蜱MLP基因的表达及其表达产物反应原性的分析
- 2012年
- 通过对饥饿的长角血蜱雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,以期获得长角血蜱MLP基因全长cDNA序列。设计通用引物,采用PCR方法分别从青海血蜱、麻点璃眼蜱、森林革蜱、微小牛蜱及小亚璃眼蜱中对MLP基因完整的开放阅读框进行了扩增,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性。结果表明,成功扩增了长角血蜱的MLP基因全长序列及多个蜱种的MLP基因开放阅读框序列,体外高效诱导表达了约39.2ku的不同蜱的MLP重组蛋白。Western-blot结果表明,长角血蜱的MLP重组蛋白具有很强的反应原性,且不同蜱的重组蛋白间具有很强的交叉反应性。
- 沈辉刘光远柴慧萍田占成谢俊仁罗金张萍田美媛殷宏
- 关键词：MLP原核表达
- 长角血蜱Tm蛋白和MALC蛋白的免疫保护性初步分析
- 蜱（Tick）传播疾病病原能力世界第二，是最重要的人畜共患病传播媒介之，特别是森林脑炎、新疆出血热、莱姆病、Q热等人畜共患病，严重威胁着世界人类健康和畜牧业的发展。因此，蜱的安全、无污染、有效防治成为畜牧业生产中急待解决...
- 田美媛
- 关键词：长角血蜱原肌球蛋白免疫保护性
- 文献传递
- 四种蜱源MIF基因的原核表达及表达产物的反应原性分析
- 2013年
- 为研究不同蜱源巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因的生物学特性,本研究设计了1对特异性引物,采用PCR从亚洲璃眼蜱、青海血蜱、血红扇头蜱、麻点璃眼蜱中扩增MIF基因的完整阅读框,并对该序列一级结构特征进行分析。PCR产物经BamHⅠ+EcoRⅠ双酶切后亚克隆到表达载体pGEX-4T-1上,重组质粒转入感受态细胞BL21(DE3),37℃下用1mmol/L IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析MIF基因体外的表达特征;接着用亚洲璃眼蜱全蜱血清与四种不同蜱种MIF重组蛋白进行Western-blot分析。结果显示,MIF基因完整阅读框全长351bp,编码116个氨基酸。氨基酸比对结果显示,亚洲璃眼蜱、青海血蜱、血红扇头蜱、麻点璃眼蜱MIF基因推导的氨基酸序列与已知的长角血蜱MIF基因推导的氨基酸序列相似性分别为98%、93%、93%、92%。SDS-PAGE结果显示,诱导的MIF重组蛋白的分子质量约为38.5ku。亚洲璃眼蜱全蜱血清与亚洲璃眼蜱MIF重组蛋白有较强的反应原性,且该血清与青海血蜱、血红扇头蜱、麻点璃眼蜱MIF重组蛋白存在交叉反应。结果表明,蜱MIF是一种良好的抗原分子。
- 袁小松罗金谢俊仁田占成田美媛郑进峰王芳芳张以芳刘光远
- 关键词：巨噬细胞移动抑制因子原核表达
- 长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析
- 2013年
- 为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。
- 赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松
- 关键词：长角血蜱生物信息学克隆真核表达
- 亚洲璃眼蜱不同发育阶段及其组织中microRNA-10表达分析被引量：3
- 2014年
- 【目的】MicroRNA(miRNA)是一类长度为20—22个核苷酸(nt)且高度保守的非编码小RNA。迄今为止,在病毒、动物、植物中都有发现,如在Mareks病毒、果蝇、斑马鱼、人类以及拟南芥等多种生物中都有存在。其通过与靶基因特异性的碱基互补配对使靶基因降解或者受到抑制,在转录后水平调控靶基因的表达水平。miRNAs参与多种生物的细胞增殖、分化、代谢与死亡等多种生物学过程。为了解microRNA-10在亚洲璃眼蜱中的潜在生物学功能,试验获得亚洲璃眼蜱miR-10的前体、成熟体序列;分析亚洲璃眼蜱不同发育阶段及组织miR-10的表达水平,及亚洲璃眼蜱miR-10的生物学意义;为进一步研究miR-10与亚洲璃眼蜱生长发育间的关系奠定基础。【方法】用Trizol Reagent分别提取不同发育阶段及组织的总RNA,用SYBR?Prime Script TMmiRNA RT-PCR Kit(TaKaRa Code:RR716)制备cDNA。参考miRBase数据库中isc-miR-10(登录号:MI0012262)序列,设计特异性引物,通过PCR的方法从亚洲璃眼蜱中扩增获得miR-10前体序列,通过MEGA4软件将此前体序列与已知物种的miR-10前体序列进行比对分析;利用qPCR技术分析亚洲璃眼蜱不同发育阶段及组织miR-10的表达情况;推测miR-10在亚洲璃眼蜱中的生物学功能。【结果】获得亚洲璃眼蜱miR-10的前体序列CUACAUCUACCCUGUAGAUCCGAAUUUGUUUGCCACUAGACUACAAAUUCGGUUCUAGAGAGGCUUUGUGUGG,大小为73bp;亚洲璃眼蜱的miR-10前体序列与肩突硬蜱的相似性最高,是95.9%,且与其他节肢动物相似性在88.9%—91.7%之间;miR-10在不同物种间高度保守。miR-10的成熟体序列为UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGU,种子序列为ACCCUGU。在亚洲璃眼蜱的不同发育阶段中,饥饿若蜱的miR-10的表达水平最高,是卵的48.3倍;饥饿成蜱是卵的7.78倍;饥饿幼蜱是卵的2.78倍。在饥饿雌性成蜱吸血过程中,吸血3d的成蜱是饥饿成蜱的约4.28倍,吸血5d的成蜱是饥饿成蜱的约0.31倍,饱血自然脱落的�
- 袁小松罗金田占成谢俊仁王芳芳田美媛张以芳刘光远
- 关键词：MIR-1克隆
- 18S rRNA序列差异在马梨形虫分类学中的应用被引量：3
- 2012年
- 为揭示18SrRNA V4高变区在物种分类学的本质意义,及进一步阐述马泰勒虫(之前称马巴贝斯虫)的分类学地位,本试验参考马泰勒虫(DQ287951)和驽巴贝斯虫(FJ209026)18SrRNA基因序列,在其V4高变区设计引物。将获得的片段克隆至pMD19-T进行测序,正确的结果与其他种梨形虫的相应序列进行分析。系统发生树结果显示,泰勒虫和巴贝斯虫处于明显的两个分支,而称之为马巴贝斯虫的物种和泰勒虫有着较为密切的关系,他们处于同一分支,其亲缘关系较巴贝斯虫更远。序列对齐分析表明,巴贝斯虫核苷酸序列相对于泰勒虫种序列存在多个位点的缺失和突变。而马巴贝斯虫和泰勒虫18SrRNA V4高变区核苷酸序列的相似程度较高,与巴贝斯虫在该序列上的差异较大。以上结果表明,泰勒虫种和巴贝斯虫种18SrRNA V4高变区核苷酸序列间的这种缺失和突变可作为泰勒虫和巴贝斯虫分类依据的本质因素之一。马巴贝斯虫应隶属于泰勒虫科,泰勒虫属。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛
- 关键词：泰勒虫分类学RRNA
- 长角血蜱MLC基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析被引量：1
- 2012年
- 为了解长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)肌球蛋白碱轻链(MLC)基因表达产物的免疫学活性,利用RT-PCR方法扩增了长角血蜱MLC基因的完整开放阅读框,将该基因连接到原核表达载体pGEX-4T-1中进行表达,在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导条件下,用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达情况。结果表明,该重组蛋白的表达分子质量为44ku。Western-blotting结果显示,MLC蛋白能被兔抗长角血蜱成蜱阳性血清识别,表明MLC蛋白具有良好的反应原性。
- 田美媛田占成谢俊仁罗金沈辉袁小松郑进峰王芳芳曾巧英刘光远
- 关键词：长角血蜱原核表达免疫原性
- 长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达被引量：3
- 2012年
- 根据GenBank上登录的蜱4D8基因序列设计引物,用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因,将其连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T-4D8,并对检测为阳性的克隆进行测序。将该基因重组至原核表达载体pGEX-4T-1,经表达纯化后,进行Western-blot试验鉴定其生物学活性。结果,长角血蜱4D8基因的氨基酸序列与青海血蜱、肩突硬蜱的同源性分别为90%、81%。表达的重组蛋白是分子质量约为41ku的融合蛋白。Western-blot试验证明,该重组蛋白能很好地识别兔抗长角血蜱全蜱阳性血清。结果表明,4D8基因作为一种重要的分子标记基因在蜱的流行病学调查方面有着重要的价值,同时作为潜在的候选抗原基因在疫苗的研究方面也有重要意义。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛
- 关键词：长角血蜱克隆原核表达
- 马泰勒虫EMA1基因的克隆与生物学特性分析被引量：11
- 2012年
- 根据GenBank上登录的马泰勒虫美国株(AB043618)裂殖子表面蛋白抗原1(EMA1)基因,设计了2对引物,采用PCR技术首次扩增出我国马泰勒虫肇源株EMA1基因。将该基因克隆到pMD19-T载体后,进行序列测定及分析。将鉴定为阳性的克隆重组到原核表达载体pET-30a后进行表达,并纯化表达的重组蛋白,进行Western-blotting试验,以鉴定其生物学活性。结果,EMA1基因长819bp,编码272个氨基酸,将该基因编码蛋白的氨基酸序列与GenBank中登录的11种已知梨形虫的相应氨基酸序列进行比较分析,马泰勒虫肇源分离株与已报道的马泰勒虫(马巴贝斯虫)亲缘关系最近,其次是环形泰勒虫和斑羚泰勒虫,而与东方泰勒虫、瑟氏泰勒虫的亲缘关系较远。表达的重组蛋白是分子质量约为38ku的融合蛋白,且表达产物能被马泰勒虫标准阳性血清识别。结果表明,马泰勒虫EMA1作为一种良好的抗原分子,在虫株的分类学研究、流行病学调查以及候选疫苗的研制中有着重要的意义。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁沈辉田美媛
- 关键词：克隆系统发育
- 亚洲璃眼蜱不同发育阶段及组织间microRNA-10的表达分析
- 为了解亚洲璃眼蜱microRNA：10(miRNA：10)的生物学特征.本研究利用常规PCR从亚洲璃眼蜱中扩增获得miRNA：10前体序列,并通过MEGA4软件将此序列与部分已知物种miRNA：10前体序列进行比对；qP...
- 袁小松罗金田占成谢俊仁田美媛王芳芳刘光远
- 关键词：兽医学基因序列原核表达
