苏小虎
- 作品数：16 被引量：26H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：内蒙古自治区自然科学基金国家自然科学基金中国科学院西部之光基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- SP刺激对内蒙古绒山羊皮肤干细胞的影响
- 2015年
- 本研究旨在探讨不同浓度P物质(SP)对内蒙古绒山羊皮肤干细胞分化及生长状况的影响。通过设立0mol/L(对照组)、1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L 6个浓度梯度的SP对内蒙古绒山羊皮肤干细胞进行刺激。结果表明:0 mol/L组(对照组)出现细胞团、细胞生长较均一,多呈铺路石状紧密排布,SP刺激组未见成团细胞出现、开始出现长梭形细胞、细胞生长不再均一,不同类型的细胞组织在一起,并有明显的细胞分界出现;与低浓度SP刺激组相比高浓度SP刺激组绒山羊皮肤干细胞相对散乱,整体性差;生长曲线显示,与对照组相比,各组细胞对数期均为4 d左右,只是调整期略有不同,1×10-6mol/L对增值影响相对明显。揭示了SP刺激对内蒙古绒山羊皮肤干细胞分化、增殖生长有一定的促进作用。
- 张宁宁高峰苏小虎刘迎春周欢敏
- 关键词：内蒙古绒山羊皮肤干细胞SP分化
- Sox2基因真核表达载体的构建及转Sox2基因绵羊骨髓间充质干细胞系的建立被引量：2
- 2016年
- Sox2是多能干细胞的主要标记之一,有研究发现高表达Sox2基因的神经干细胞作为供体细胞进行核移植时具有较高的重编程能力。本研究旨在通过对绵羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)Sox2基因进行外源性增强表达,以期提高其重编程能力,从而改善动物体细胞克隆效率。试验提取绵羊胎儿生殖腺组织RNA,以其为模板克隆Sox2基因cDNA序列,装入真核表达载体pEGFP-N1,构建出pEGFP-N1-Sox2表达载体。经脂质体转染将重组质粒转染入绵羊BMSC,经G418与荧光标记双筛选后挑选单克隆并扩增培养。测序鉴定表明,克隆得到绵羊Sox2基因CDS区全长,重组质粒构建成功;荧光检测表明,成功建立表达Sox2基因的绵羊BMSC系。本研究得到了高表达Sox2基因的绵羊BMSC系,为提高体细胞克隆过程中的重编程效率提供了新思路。
- 刘怀禹李浩天苏小虎孟凡华刘春霞张焱如曹俊伟
- 关键词：骨髓间充质干细胞重编程
- CRISPR/Cas9编辑绒山羊FGF5基因细胞株的建立被引量：5
- 2016年
- 拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑FGF5基因的绒山羊细胞株。在FGF5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物,构建2个编辑FGF5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶(T7E1)检测载体活性,选择活性最高的载体转染细胞,单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。经测序分析共获得20个FGF5基因敲除细胞株(包括FGF5+/-和FGF5-/-),总突变率为14.81%。双敲除突变细胞株可作为供体细胞进行重构胚构建,为创造高产绒性状的FGF5基因编辑绒山羊奠定基础。
- 阿力玛高原苏小虎周欢敏
- 关键词：绒山羊FGF5
- 绒山羊皮肤干细胞的初步分离及碱性磷酸酶鉴定被引量：1
- 2012年
- 以0.02%胰酶4℃过夜消化,分离表皮,37℃消化30min,打成单细胞悬液,经100μg/mLⅣ型胶原处理的培养皿黏附10min,除掉未黏附的细胞,加入培养基(80%DMEM-F12+20%FBS+氢化可的松(25μg/mL)+青霉素(100IU/mL)+链霉素(100μg/mL)+胰岛素(15μg/mL)+转铁蛋白+EGF(20μg/mL))培养24h,而后将此细胞消化接种到经20μg/mL丝裂霉素C处理4h的成年绒山羊成纤维细胞滋养层上,培养2周后有各种形态的克隆状细胞集落出现,用碱性磷酸酶(AKP)染色呈深黑紫色,初步判断细胞呈阳性。本研究旨在分离绒山羊皮肤干细胞,为研究干细胞分化机制,探索绒毛发育机理,培育高产高质绒毛性状奠定分子育种理论基础。
- 苏小虎高峰刘迎春王宏张焱如周欢敏
- 关键词：绒山羊干细胞
- 牛肌肉生长抑制素基因打靶载体的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 本试验旨在构建用于牛肌肉生长抑制素(MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。基于已发布的MSTN基因序列,选取第3外显子约600bp作为靶位点,在其上、下游设计2条同源臂,分别为4.4和1.4kb。以pPNTⅢ为骨架载体,在其2个多克隆位点处插入同源臂,构建出置换型打靶载体MSTN-KO-pPNTⅢ。结果显示,经DNA测序及酶切鉴定证实1.4kb同源短臂和4.4kb同源长臂均正确插入基础载体中。结果表明,成功构建出牛MSTN-KO-pPNTⅢ打靶载体。
- 朱和平吴凯峰苏小虎王一超周欢敏赵瑞媛张焱如
- 关键词：肌肉生长抑制素基因基因打靶
- CRISPR-Cas9介导的蒙古牛MSTN基因敲除细胞系的建立被引量：3
- 2018年
- 试验旨在利用CRISPR-Cas9技术对蒙古牛胎儿成纤维细胞肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行编辑,构建无标记的MSTN基因敲除的蒙古牛细胞系,为培育肌肉发达的蒙古牛提供试验材料。通过组织块贴壁法对妊娠45d的蒙古牛胎儿建立皮肤成纤维细胞系,同时在第2外显子区域选定1个gRNA靶位点,使用在线软件设计sgRNA序列,并选取评分较高的3个sgRNA,采用试剂盒法构建无标记的Cas9/gRNA载体,随后用T7E1酶酶切法对其进行活性验证,将有活性的载体用电转法转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过无限稀释法和口吸管法将转染后的单细胞接种于96孔板扩繁后提取DNA,对其进行PCR扩增及测序验证来获取阳性细胞。本试验构建了3个无标记的CRISPR-Cas9载体,经验证1个有活性,对电转染后的单细胞进行筛选共获得96个单细胞株,测序分析后有1个单细胞株发生单碱基突变,使得MSTN基因不能编码正常的蛋白。试验成功建立了1个MSTN基因失活的细胞株,可作为后续体细胞核移植的供体细胞,用于生产无标记的敲除MSTN基因的蒙古牛,对培养产肉率高并具有生物安全性的蒙古牛具有重要的意义。
- 郭梓茹张立马云龙苏小虎周欢敏张焱如刘晓
- 关键词：MSTN基因蒙古牛
- 无标记转Fat-1基因真核表达载体的构建及转基因绵羊细胞系的建立
- 2016年
- 为了建立无筛选标记基因的转Fat-1基因绵羊细胞系,本研究将PCR克隆得到的Fat-1基因,合成的attB、Loxp序列并克隆入pN1-EGFP框架载体,得到可删除筛选标记基因的pEGFP-N1-Fat-1真核表达载体。体外转录合成phiC31整合酶mRNA并与线性化的pEGFP-N1-Fat-1载体共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞,G418筛选得到表达绿色荧光的单克隆,再利用pET-28a-His-NLS-TAT-Cre质粒诱导Cre重组蛋白表达,将纯化后的Cre穿膜肽转导表达绿色荧光的单克隆细胞,将荧光淬灭的细胞系扩繁,提取基因组DNA,进行PCR及测序鉴定,得到无标记转Fat-1基因绵羊胎儿皮肤成纤维细胞系,为生产无筛选标记基因的转基因绵羊奠定基础。
- 阿力玛朱和平王瑞瑶闫涛苏小虎李璐王丙萍那顺温都乐齐贵春周欢敏
- 关键词：真核表达载体
- SP对内蒙古绒山羊皮肤干细胞β-catenin及BMP2//4表达影响的初步研究
- 本研究旨在探讨SP对下游基因β-catenin及BMP2//4的作用方式及可能的信号通路,为绒山羊皮肤干细胞定向诱导分化提供一定的理论基础。
首先选择SP对皮肤干细胞的最适浓度,设立1X10-5mol//L>1×...
- 苏小虎
- 关键词：皮肤干细胞SPΒ-CATENINBMP2BMP4
- 文献传递
- 蒙古马脂肪来源间充质干细胞体外成脂和成骨诱导分化被引量：2
- 2011年
- 取蒙古马背臀部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养脂肪组织来源的间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs),经过原代培养和传代培养,分别加入成脂诱导剂和成骨诱导剂培养,采用倒置显微镜观察诱导后的细胞形态变化,并通过油红O染色和茜素红染色法对其脂肪细胞和成骨细胞表型进行鉴定.结果显示:ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成脂、成骨诱导培养2周后形态、体积发生明显改变.经油红O染色,细胞质内出现橙红色脂滴;茜素红染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节.说明马ADSCs经体外诱导培养后可向脂肪细胞和成骨细胞分化,并具有明显的成脂和成骨表型,表明ADSCs具有多向分化潜能.
- 刘宗正韦林盖苏小虎张焱如芒来
- 关键词：脂肪细胞成骨细胞细胞分化
- 水盐胁迫对骆驼肾脏中钙调素表达的影响
- 2015年
- 钙调素（calmodulin,CaM）是一种由19种148个氨基酸组成的单链可溶性蛋白,是功能最重要的钙依赖性调节蛋白[1-4],广泛存在于各类真核细胞中,作为真核细胞的重要信号蛋白,在真核生物正常与逆境条件的生长发育中发挥重要作用[5-7]。骆驼有“沙漠之舟”的美称,颇能忍饥耐渴,每饮足1次水可数日不喝水仍能在炎热、干旱的沙漠地区活动。
- 金敏李秀锋苏小虎邢燕平张焱如周欢敏
- 关键词：CALMODULIN钙调素机体需要可溶性蛋白信号蛋白真核生物
